苯巴比妥残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

苯巴比妥（Phenobarbital,PB）具有镇静、催眠等作用,在肉用畜禽生产中常被用作饲料添加剂,但PB存在神经、骨髓、致畸、致癌等毒性作用,其残留严重危害人们的身体健康,我国和世界上多数国家都严禁PB用作饲料添加剂.目前,国外已开发出PB残留检测的ELISA试剂盒,如德国DadeBehring公司等,国内尚未见报道.本研究应用杂交瘤技术在制备出PB单克隆抗体（mAb）基础上,成功研制出PB残留检测阻断EILSA试剂盒（PB-Kit）,并对其性能进行了测定,现报告如下.     

氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定

在建立氯霉素单克隆抗体（CAP mAb）杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上．研制出CAP残留快速检测试剂盒（CAP-kit），并对其性能进行了测定。结果表明，CAP-kit的标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R^2=0．9953，检测范围为1．0μg/L～128．0μg/L，灵敏度为0．85μg／L，半数抑制浓度（IC50）为7．54μg/L，检测限为1．0μg/L；牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88．3％、82．5％，平均批内和批间变异系数均〈15％；CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应（CR％）为150％，与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应；试剂盒在4℃可保存6个月。     

磺胺二甲基嘧啶残留快速检测阻断ELISA试剂盒的研制及其性能测定

应用磺胺二甲基嘧啶(SM2)单克隆抗体(mAb)成功研制出SM2残留快速检测阻断ELISA试剂盒(SM2-Kit).研究结果表明,SM2-Kit的标准曲线呈典型的S型,相关系数R2=0.9911,符合4参数logit曲线拟合,线性检测范围为0.625μg/L～80μg/L,灵敏度为0.9 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为5.82μg/L,检测限为1μg/L;饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为83.4%、89.5%,平均批内和批间变异系数均低于15%;SM2-Kit与磺胺甲基嘧啶的交叉反应率(CR%)为2.08%,与其它磺胺类药几乎没有反应性;基质对SM2-Kit的检测结果影响不大;试剂盒在4℃可保存6个月.     

链霉素残留检测ELISA试剂盒的研制及应用

本研究采用EDC法人工合成链霉素抗原（SM—BSA）,免疫BALB／c小鼠,通过杂交瘤技术获得了分泌抗链霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株,建立了快速检测链霉素（SM）残留的酶联免疫方法,并成功研制了试剂盒。然后对其灵敏度、准确度、特异性、基质效应性等技术指标进行检测,同时应用该试剂盒对生长猪尿液中的残留情况进行检测。结果表明：除双氢链霉素外,该试剂盒与其它抗生素类药物均无交叉反应;线性检测范围为1～1289g／L,相关系数R^2=0．9251,灵敏度为0．45μg／L,半数抑制浓度（IC50）为7．769g／L,检测限为19g／L;猪尿样的平均添加回收率为84．1％;基质对该试剂盒的检测结果影响不大。该试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于SM残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。     

试剂盒法检测兽药残留应注意的问题

应用ELISA技术生产的快速检测试剂盒作为一种比较成熟的检测模式，已经很普遍地应用在兽药残留监督检测工作中了。这种方法速度快、仪器化低，可用于大量样品的筛选检测，阳性可疑样品再用HPLC或GC—MS确证，这样可以大大提高工作效率，降低检测成本。而且随着生产企业的不断研发，检测样品的范围广（包括鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、肠衣、蜂蜜、牛奶、尿液、血清、     

使用ELISA试剂盒应该注意的问题

酶联免疫试剂盒是较普遍常用的药物残留检测方法,与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,但对实验操作条件的要求比较严格.实验条件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面组成.但EIJSA试剂盒对实验室操作环境的要求是儿种药物残留检测方法中相对较低的.由于大部分的试验操作步骤都是由实验人员来完成的,人为的误差相对严重一些.本人结合几年的工作实践介绍一下进行ELISA操作的时候应该注意的问题.     

犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究以纯化的犬细小病毒（CPV）重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0．158微克／毫升;待检血清稀释倍数为1：100,作用时间为60分钟：羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1：2000,作用时间为60分钟;底物作用时间为10分钟;判定标准为S／P≥0．282时为阳性．S／P≤0．226时为阴性。该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆菌病等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15％．显示该方法具有良好的重复性;     

猪链球菌2型PCR快速检测试剂盒的研制及初步应用

根据猪链球菌2型荚膜多糖抗原编码基因簇中的cps2J基因序列设计1对可扩增560 bp片段的特异性引物,成功地建立了一种检测猪链球菌2型的PCR方法,并通过优化研制出PCR检测试剂盒。进一步的研究结果表明,试剂盒具有很好的特异性、敏感性和稳定性。试剂盒能从病料8 h增菌的混合菌群中快速检测出猪链球菌2型菌株。试剂盒对临床样本的检测结果表明,猪链球菌2型在我国猪群发生的链球菌病例中不占主导地位。     

直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留

采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA,与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA,用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体,利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性,在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538,R^2=0．995,IC50为41．7ng／mL,在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加,回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较,二者的阳性符合率为81．3％,阴性符合率为83．3％,总符合率为88．9％;与同类英国RANDOX试剂盒比较,二者符合率为100％。     

农药残留检测中采样的步骤、方法、数量及注意事项

由于食品数量较大,而且目前的方法大多数具有破坏作用,故不能对全部食品进行校验,必须从整批食品中采取一定比例的样品进行校验。从大量的分析对象中抽取具有代表性的一部分样品作为分析化验样品,这项工作即称为样品的收集或采样。食品的种类繁多,成分复杂。同一种类的食品,其成分及其含量也会因品种、产地、成熟期、加工或保藏条件不同而存在相当大的差异。同一分析对象的不同部位,其成分和含量也可能有较大差异。从大量、组成成分不均匀的被检物质中采集能代表全部被检物质的分析样品（平均样品）,必须采用正确的采样方法。如果采取的样品不足以代表全部物料的组成成分,即使以后的样品处理、检测等一系列环节非常精密、准确,其检测的结果亦毫无价值,甚至导出错误的结论。可见,采样是食品分析工作非常重要的环节。现对采样的步骤、方法、数量及注意事项,介绍如下。     

鸡肌肉组织中左氧氟沙星兽药残留ELISA检测方法的研究

用N-羟基琥珀酰亚胺法把左氧氟沙星（LVL）与牛血清白蛋白（BSA）偶联制备免疫抗原,免疫新西兰大白兔得到LVL的多克隆抗体,建立了LVL间接竞争ELISA方法。结果表明：抗LVL血清效价达1∶212以上,得到标准曲线的线性回归方程为y=-0.289 4x＋0.049 5（R2=0.987 8）,50%抑制浓度（IC50）为64 ng/mL,最低检测限（LOD）为10 ng/mL,标准曲线的线性范围为10～1 000 ng/mL。批内变异系数为3.51%～7.46%,批间变异系数为8.66%～11.89%,鸡肌肉中的LVL添加浓度在10～1 000 ng/ml范围内时,回收率为73.5%～84.36%。本试验建立的ELISA方法能够满足左氧氟沙星兽药残留检测要求。