冬凤兰非共生萌发和低温离体保存

[目的]利用组培技术建立冬凤兰(Cymbidium dayanum)非共生萌发和低温离体保存技术,以达到快速繁殖和长期离体保存该植物的目的。[方法]以冬凤兰种子为外植体,选择不同培养基建立冬凤兰非共生萌发技术;同时利用原球茎为材料,选择低温离体保存,恢复增殖及植株再生条件,初步建立冬凤兰低温离体保存技术体系。[结果]冬凤兰种子在花宝1号,MS培养基上培养90 d萌发率98%以上;原球茎在花宝1号培养基上于5℃、黑暗中能连续保存18个月以上,成活率达90%,并能在1/2 MS、花宝1号培养基中进行恢复增殖;壮苗生根培养基为1/2 MS培养基。[结论]该研究为冬凤兰种质的离体保存和快速繁殖提供了实践基础。     

云南独蒜兰×陈氏独蒜兰种子萌发与幼苗生长研究

以云南独蒜兰(Pleione yunnanensis)×陈氏独蒜兰(P.chunii)授粉120 d成熟未开裂蒴果的种子作为试验材料,研究不同浓度6-BA、NAA和花宝2号对其种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:种子萌发的适宜培养基为3 g/L花宝2号+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+50 g/L马铃薯+50 g/L香蕉+2 g/L蛋白胨+2 g/L活性炭+7 g/L琼脂,萌发率(94.45%)显著高于其他处理组,且萌发后植株生长速度最快;NAA对该杂交种无菌萌发具有明显的促进作用,而细胞分裂素6-BA则在一定程度上抑制其萌发。针对假鳞茎膨大和植株高度2个指标,幼苗生长的适宜培养基为1 g/L花宝2号+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+25 g/L蔗糖+1 g/L蛋白胨+1 g/L活性炭+7 g/L琼脂,在所研究的3个因素中花宝2号对该杂交种假鳞茎膨大作用最大,NAA对植株高度促进作用最大。     

三褶虾脊兰无菌播种快繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplicata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0.5 mg/L 6-BA、0.1 mg/L NAA 和 1.0 g/L AC）、附加物［椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥］及基本培养基（花宝1号、1/2花宝1号、MS和1/2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1/2花宝1号+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+200 mL/L CM+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基中培养150 d左右可形成原球茎,萌发率超过80%以上;诱导原球茎在1/2MS+100 mL/L CM+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4.5;原球茎接种于花宝1号+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+1.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上分化培养40 d后,再转入花宝1号+0.1 mg/L NAA+100.0 g/L土豆泥+2.0 g/L AC+20.0 g/L蔗糖培养基上培养40 d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100.0%,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的三褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

三褶虾脊兰无菌播种陕繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplieata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0．5mg／L6-BA、0．1mg／LNAA和1．0g／LAC）、附加物[椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥]及基本培养基（花宝1号、1／2花宝1号、MS和1／2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1／2花宝1号＋0．5mg／L 6-BA＋0．1mg／L NAA＋200ml/L CM＋1．0g／L AC＋20．0g／L蔗糖培养基中培养150d左右可形成原球茎,萌发率超过80％以上;诱导原球茎在1／2MS＋100mL／LCM＋2．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4．5;原球茎接种于花宝1号＋0．1mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上分化培养40d后,再转入花宝1号＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋2．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上培养40d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100．0％,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的王褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

血叶兰的无菌播种与快速繁殖

[目的]研究野生中药资源血叶兰的无菌播种技术,实现其快速繁殖.[方法]以血叶兰种子为外植体,接种于4种不同的培养基MS、1/2MS、花宝1号(3.0 g/L)和1/2花宝1号(1.5g/L),80 d后统计萌发率,筛选适合血叶兰种子荫发的培养基.在培养基中添加不同激素配比,不同的有机物等,筛选适宜血叶兰原球茎增殖与分化、壮苗与生根的培养基.[结果]成熟血叶兰种子在1/2花宝1号(1.5g/L)培养基中暗培养80 d左右形成原球茎团,萌发率为86.67％,是最适于血叶兰种子萌发的培养基;而种子萌发效果较差的是MS培养基.在1/2花宝1号(1.5 g/L)+6-BA 2.0 mg/L+椰汁100ml/1培养基中添加NAA 0.4-0.6 mg/L,原球茎团转接培养45 d左右形成原球茎和小芽的混合体,最高增殖倍数为6.11倍,增殖效果显著优于添加NAA 0.2和0.8 mg/L的培养基(P＜0.05)将培养获得的小芽转接至分别添加10％土豆汁、10％香蕉汁和100 ml/L椰汁的花宝1号(3.0 g/L)+NAA l.0 mg/L+培养基中进行壮苗和生根培养,结果表明添加香蕉汁10％的培养效果最佳,培养80 d后可形成完整植株,幼苗生根率为93.33％,株高7.19 cm.经温室大棚炼苗l0d后,将血叶兰试管苗移栽至泥炭土与1 cm火山石(3∶1)的混合基质中,60 d后成活率达91.7％.[结论]该研究以血叶兰种子为外植体所建立的血叶兰无菌播种育苗技术体系可用于血叶兰的种质资源保护、种苗生产及产业化开发等.     

血叶兰的无菌播种与快速繁殖（英文）

[目的]研究野生中药资源血叶兰的无菌播种技术,实现其快速繁殖。[方法]以血叶兰种子为外植体,接种于4种不同的培养基MS、1/2MS、花宝1号(3.0 g/L)和1/2花宝1号(1.5g/L),80 d后统计萌发率,筛选适合血叶兰种子萌发的培养基。在培养基中添加不同激素配比,不同的有机物等,筛选适宜血叶兰原球茎增殖与分化、壮苗与生根的培养基。[结果]成熟血叶兰种子在1/2花宝1号(1.5 g/L)培养基中暗培养80 d左右形成原球茎团,萌发率为86.67%,是最适于血叶兰种子萌发的培养基;而种子萌发效果较差的是MS培养基。在1/2花宝1号(1.5 g/L)+6-BA 2.0 mg/L+椰汁100ml/L培养基中添加NAA 0.4-0.6 mg/L,原球茎团转接培养45 d左右形成原球茎和小芽的混合体,最高增殖倍数为6.11倍,增殖效果显著优于添加NAA 0.2和0.8 mg/L的培养基(P0.05)。将培养获得的小芽转接至分别添加10%土豆汁、10%香蕉汁和100 ml/L椰汁的花宝1号(3.0 g/L)+NAA 1.0 mg/L+培养基中进行壮苗和生根培养,结果表明添加香蕉汁10%的培养效果最佳,培养80 d后可形成完整植株,幼苗生根率为93.33%,株高7.19 cm。经温室大棚炼苗10 d后,将血叶兰试管苗移栽至泥炭土与1 cm火山石(3∶1)的混合基质中,60 d后成活率达91.7%。[结论]该研究以血叶兰种子为外植体所建立的血叶兰无菌播种育苗技术体系可用于血叶兰的种质资源保护、种苗生产及产业化开发等。     

血叶兰种质资源的离体保存研究

研究了血叶兰试管苗的中短期离体保存技术。研究结果表明:向培养基(花宝1号3 g/L+NAA 1.0 mg/L+10%香蕉汁+AC 1.0 g/L+2.5%蔗糖+1%卡拉胶)中添加甘露醇20 g/L较适合血叶兰试管苗的离体保存,试管苗保存18个月后成活率在90%以上。试管苗恢复培养2个月后,生长良好,无变异。     

多花兰的离体萌发和试管成苗技术研究

[目的]建立多花兰的组培快繁技术体系。[方法]以多花兰种子为试验材料,研究基本培养基和添加物对其无菌萌发、原球茎增殖与分化、试管苗壮苗培育的影响。[结果]在MS、VW、KC、HP[Hyponex（花宝1号）3 g/L＋Peptone（蛋白胨）4 g/L]4种培养基中,以VW中的萌发率最高,达到75%;添加AgNO31 mg/L＋La（NO3）2.6H2O1 mg/L对原球茎的增殖与分化起促进作用;添加0.3%的活性炭可克服培养过程中的褐化现象;HP培养基添加10%香蕉可以获得壮苗。[结论]在不同培养阶段,通过基本培养基与添加物的优化组合可以建立高效的多花兰无菌播种试管成苗技术体系。     

铁皮石斛种子液体静置培养及其对离体植株生长的影响

【目的】研究铁皮石斛种子液体静置培养过程中,基本培养基对种子萌发、原球茎发育的影响以及来自不同培养基的原球茎及其体积大小对离体植株生长的影响。【方法】采用1/2B_5、1/2N_6、1/2MS、1/2花宝1号、1/2花宝2号等液体培养基静置培养铁皮石斛种子,观察统计种子萌发和原球茎发育生长情况;原球茎转至固体培养基后,比较来自不同液体培养基和体积大小(30目、40目)的原球茎,生长形成离体植株的形态类型。【结果】1/2N_6培养基培养获得的原球茎直径平均值最高,显著大于1/2MS培养基、1/2花宝1号培养基和1/2花宝2号培养基;原球茎在固体培养基上培养90 d,可发育形成单芽、多芽、愈伤组织等形态类型,来自不同液体培养基的原球茎,发育形成多芽、愈伤组织的比例均存在显著差异,原球茎大小对单芽、多芽、愈伤组织产生具有显著影响。【结论】铁皮石斛种子液体静置培养中,基本培养基是影响原球茎发育的重要因素,1/2N_6是较适宜的培养基;来自不同液体培养基的原球茎及其大小显著影响离体植株的生长,大于30目的原球茎发育形成正常单芽植株比例较高。     

虎雪兰与朱砂兰、蕙兰正反交育种及种子无菌萌发与增殖研究

[目的]研究虎雪兰与朱砂兰、蕙兰正反交育种及种子无菌萌发与增殖.[方法]以虎雪兰、朱砂兰、蕙兰‘绿春兰’为亲本,采用正反交杂交法进行育种试验得到果实,对成熟的种子进行无菌萌发试验,并对种子萌发获得的小苗进行增殖研究.[结果]朱砂兰为母本获得杂交种子无菌萌发最适培养基为：1/2MS ＋0.5 mg/L BA ＋0.2 mg/L NAA ＋3％花宝1号＋0.05％碳粉;最佳增殖及生长培养基为：1/2MS＋1.0 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/L NAA ＋0.5 mg/L KT ＋3％花宝4号＋0.05％碳粉.蕙兰‘绿春兰’为母本获得种子萌发最适培养基为：1/2MS＋ 1.0 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/L NAA＋ 3％花宝1号＋0.05％碳粉;最佳增殖及生长培养基为1/2MS＋ 1.5 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/LNAA ＋0.5 mg/L KT＋3％花宝4号＋0.05％碳粉.[结论]该方法为虎雪兰的种质资源栽培提供了理论依据.     

虾脊兰原球茎诱导及植株高效再生体系研究

以野生虾脊兰(Calanthe discolor)未成熟蒴果为材料,MS为基本培养基,探讨不同光照度、热激和不同培养基配方对虾脊兰种子萌发、原球茎发生及植株再生的影响。结果表明,未完全成熟的种子在1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯+1.0 g/L活性炭培养基中萌芽率最佳;在1 500 lx光照度条件下培养时种子萌发速率较快。通过黑暗条件下35℃热激5 d有利于已萌动种子脱分化形成原球茎。使用MS+3.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖培养基诱导原球茎形成胚性愈伤组织效果最好。MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+20 g/L马铃薯培养基分化形成植株分化率最高,1/2MS+0.2 mg/L IBA+7 g/L琼脂+30 g/L蔗糖+0.1 g/L活性炭培养基则为最佳生根培养基,生根率100%,植株根系发达,长势健壮。该研究建立了虾脊兰无菌快繁体系,为保护野生虾脊兰资源和种苗人工繁育提供了有效技术途径,也为其遗传转化研究奠定基础。     

大晶帽石斛再生体系建立研究

本文以成熟度70%原生大晶帽石斛荚果内种子为外植体,探究采用不同消毒时间、培养基成分构成及浓度配比对大晶帽石斛无菌萌发的影响。结果表明,大晶帽石斛荚果用5%次氯酸钠消毒15 min,可有效降低污染率;将消毒后荚果种子接入MS+蛋白胨2 g/L+NAA 0.5 mg/L+花宝1号2 g/L+0.1%活性炭+0.58%琼脂+2%蔗糖培养基中,种子萌发率达88%,是适宜大晶帽石斛无菌萌发的培养基配方。     

多效唑在酸樱桃离体植株保存中的应用研究

研究培养基中添加多效唑(PP333)对酸樱桃再生植株离体保存的影响.结果表明,与不添加多效唑对照相比,培养基中添加多效唑对酸樱桃再生植株离体保存的效果有显著提高(P<0.01).从对株高的影响看,多效唑浓度为0.5 mg/L时保存420 d的植株株高最为理想.较长时间保存酸樱桃植株培养基添加多效唑的理想浓度为1.5 mg/L,恢复生长后酸樱桃植株茎粗、继代成活率测定值最高.恢复生长后植株生物学性状无异常变化.     

蝴蝶兰不定芽的组培快繁技术

通过诱导蝴蝶兰豹斑花花梗腋芽萌发出无菌不定芽,以不定芽为外植体,建立蝴蝶兰无菌培养体系.结果表明:在花宝1号3.0 g/L+ BA 3.0 mg/L+ NAA 0.3 mg/L+蔗糖20 g/L的培养基中,腋芽萌发效果很好.采用L16(44)正交设计探讨基本培养基、BA、NAA、蔗糖4个因素对蝴蝶兰不定芽增殖的影响,得出BA是影响增殖系数的主要因子,NAA、基本培养基次之,蔗糖最弱.MS +BA 8.0 mg/L +NAA 0.8 mg/L+蔗糖20 g/L对不定芽增殖有良好的效果,增殖系数能够达到2.83.诱导蝴蝶兰生根的最佳培养基为花宝1号3.5 g/L +MET 0.4 mg/L +NAA 0.5 mg/L+蔗糖20 g/L.移栽基质以水苔最好,成活率达93.18％.     

素花虎头兰×黄蝉兰F_1代原球茎再生体系的建立

以素花虎头兰×黄蝉兰F_1代的原球茎、茎尖和叶片基部为材料,在无菌条件下研究不同激素配比对原球茎受体系统建立的影响。结果发现,以原球茎为材料诱导增殖原球茎的效果明显优于以茎尖和叶片基部为材料诱导增殖原球茎的效果,最佳培养基为1/2MS+1. 0 mg/L 6-BA+0. 5 mg/L NAA+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,增殖倍数为4. 5倍,最佳分化培养基为1/2MS+2. 0 mg/L 6-BA+0. 1 mg/L NAA+0. 1 mg/L KT+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,分化率为38. 80%,且原球茎浓绿色和长势健壮;最佳生根培养基为1/2MS+0. 3 mg/L 6-BA+1. 5 mg/L NAA+1. 5 g/L花宝1号+0. 5 g/L炭粉+80 g/L香蕉泥,生根率达到100%,平均株根数为4. 69条,平均根长为7. 31 cm,植株长势健壮,叶片浓绿。     

独占春种子非共生萌发和低温离体保存

独占春(Cymbidium eburneum Lindley)成熟种子无菌播种诱导原球茎,并以原球茎进行低温离体保存。结果表明:在培养基花宝1号3g/L LH(水解乳蛋白)1g/L BA(细胞分裂素)0.5 mg/L NAA(生长素)0.1 mg/L CM (椰子汁)100 ml/L AC 2 g/L 蔗糖25 g/L中种子萌发出原球茎;原球茎在培养基1/2 MS LH 0.5 g/L BA 0.5 mg/L NAA 0.1mg/L AC 2g/L 蔗糖20g/L中于6℃黑暗条件下连续保存了20个月,成活率达85%,并能在恢复培养基MS BA 3～5 mg/L NAA 0.2 mg/L AC 1g/L CM 100 ml/L 蔗糖25 g/L中进行恢复增殖培养。     

梳唇石斛快速繁殖技术

通过组织培养方法研究梳唇石斛快速育苗技术,利用不同培养基诱导种子直接萌发形成原球茎,并进一步分化获得再生植株。结果表明,种子萌发原球茎诱导的最佳培养基:1/2MS NAA 0.2 mg/L;最佳原球茎增殖培养基:1/2MS 6-BA 0.5 mg/L;最佳生根培养基:1/2MS 香蕉泥100 g/L NAA 0.5 mg/L。     

豆瓣绿组织培养配方筛选研究

以豆瓣绿叶柄基部、叶片为外植体,采用组培快繁技术,研究了6-BA及各种添加物对豆瓣绿的植株诱导、不定芽分化及生根培养的影响。结果表明：豆瓣绿的组织培养应选取叶柄基部为宜,诱导适宜培养基配方为：MS＋6-BA 3.0 mg/L;芽继代增殖适宜培养基配方为：花宝1号30g/L＋香蕉25g/L＋马铃薯25g/L＋活性炭1g/L;生根适宜培养基配方为：花宝1号30g/L＋香蕉50g/L＋马铃薯50g/L＋活性炭1g/L。     

金线兰组织培养技术研究

为比较不同的外植体灭菌时间、培养基质等对金线兰离体组织丛生芽诱导、壮苗生根的影响,寻求最适合的培养方法,达到快速获得大量幼苗的目的,特进行了金线兰组织培养技术试验。结果表明,外植体的灭菌时间对诱导成功率有较大影响;QZ(MS+6-BA 10 mg/L+蔗糖30 g/L+椰子汁30 m L/L+琼脂7 g/L,p H值5.5~5.8)培养基较适合金线兰外植体的诱导;SG(添加花宝1号3 g/L+花宝2号0.5 g/L+蛋白胨2 g/L+活性炭0.8 g/L+土豆泥50 g/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,p H值5.5~5.8)培养基较适合金线兰的生根培养。     

蝴蝶兰种子胚组织培养优化技术研究

以蝴蝶兰种子胚为外植体,探讨了不同采收期、不同培养基以及在培养基中添加多种附加物对原球茎形成和成苗的影响。结果表明:授粉后120~150 d的成熟种子胚适宜于组织培养,以花宝1号为基本培养基,附加椰子汁、香蕉、土豆汁能很好地诱导原球茎,诱导率达95%以上。添加有机附加物对不同花色的蝴蝶兰品种的培养效果不同,不添加植物生长调节剂也有利于种子萌发。用花多多4号3~4 g/L+Tryptone 2~2.5 g/L+1/3MS+6BA 1.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+CW 100 g/L+AC 0.5~1.0 g/L有利于原球体和幼苗的生长,成苗率达90%以上。