猪精液0.5 ml细管快速冷冻和解冻方法的优化

 【目的】优化冷冻-解冻方法,提高0.5 ml细管快速冷冻保存猪精液的质量。【方法】冷冻方法：分别将细管水平置于液氮面上方3、5、7、9和11 cm处,每一水平位置细管分别熏蒸3、5、10、15和20 min后投入液氮保存,37℃×30 s水浴解冻,确定最优冷冻方法;在选择最优冷冻方法的基础上,分别采用37℃×30s(对照组)、42℃×25 s、47℃×20 s、52℃×15 s、57℃×10 s和62℃×5 s共6种方法水浴解冻,确定最佳解冻方法。【结果】采用3 cm×10 min冷冻方法,解冻0、8 h精液中精子活率、质膜完整率和顶体完整率均最高。采用相对“高温短时”解冻,精子活率、质膜完整率、顶体完整率和线粒体膜电位均较高,同时丙二醛浓度降低;57℃×10 s和62℃×5 s解冻的精子各项指标无显著差异（P＞0.05）,但前4项指标显著高于对照组（P＜0.05）,丙二醛浓度显著降低（P＜0.05）。【结论】优化猪精液0.5 ml细管快速冷冻的冷冻和解冻方法可以显著提高解冻质量,采用3 cm×10 min冷冻、57℃×10 s或62℃×5 s解冻方法效果最佳。     

牛细管冷冻精液人工授精关键技术

随着牛冷冻精液改良配种技术的推广,牛细管冻精因使用方便、受胎率高等优点被广泛采用.如何正确使用牛细管冻精,关系到配种员配种技术水平高低,是决定受胎率高低的关键.     

布尔山羊细管冷冻精液研制初报

首次在国内建立了布尔山羊的细管精液冷冻程序,试验证明,选用３０ｇ／Ｌ的葡萄糖,１３ｇ／Ｌ的柠檬酸钠和１ｇ／Ｌ的乙二胺四乙酸钠（ＥＤＴＡ）作基础稀释液,乙二醇作保护剂,精液冻前经１００ｍＬ／Ｌ卵黄处理,离心除去精清。     

辽宁绒山羊细管冷冻精液人工授精技术

使用细管冷冻精液人工授精技术,能提高辽宁绒山羊群体的产绒量和绒毛品质,加快高产优质绒山羊的遗传进展。 1.配种母羊 对可繁配种母羊加强饲养管理,使之达到中上等膘情,无疫病和生殖疾患。公、母羊分群饲养,杜绝杂交滥配。繁殖母羊群设专人管理,建立母羊繁殖档案,记录母羊配种、产羔及断奶情况。     

程序降温法冷冻犬细管精液的实验

分别将6条公犬每次采集的精液(每条采6次),按同样的方法稀释、平衡、分装,而后将分装的细管分为两组,分别采用程序Ⅰ和程序Ⅱ进行冷冻,其冻后活率分别为0.47±0.10和0.34±0.05(P<0.01);复苏率分别为57.86±8.85和42.27±3.80(P<0.01);顶体完整率分别为34.47±5.20和29.77±4.37(P<0.01)。结果表明:程序Ⅰ的冷冻效果明显优于程序Ⅱ。     

布尔山羊细管冷冻精液研制初报

首次在国内建立了布尔山羊的细管精液冷冻程序。试验证明,选用３０ｇ／Ｌ的葡萄糖、１３ｇ／Ｌ的柠檬酸钠和１ｇ／Ｌ的乙二胺四乙酸钠（ＥＤＴＡ）作基础稀释液,乙二醇作保护剂,精液冻前经１００ｍＬ／Ｌ卵黄处理,离心除去精清。精液稀释并经冻前处理后装入０．５ｍＬ细管,在４℃下平衡１．５ｈ,再以１１～３０℃／ｍｉｎ的速率降温至－８０℃以下（３～５ｍｉｎ）投入液氮,可获得良好的冷冻效果。用乙二醇作保护剂的冷冻精液,解冻后在１２～１５℃的常温下放置２４ｈ,其活力仍可满足输精的要求。     

猪冷冻精液受胎率试验

1990～1991年,利用本项研究确定的冷冻、解冻稀释液及成套冷冻技术程序生产的冻精,以杂交母猪和本地母猪为主进行配种试验,受胎率由30％提高到50％,1991年中间试验情期受胎率提高到70.59％,窝产仔8.34～9.73头。     

肉羊细管冷冻精液的制作

该文详细介绍了肉羊细管冷冻精液的制作过程,重点强调了稀释液的配制,冷冻温度以及最佳解冻温度。     

牛冷冻精液人工授精技术要点

通过对牛冷冻精液人工授精技术工作的实践摸索,总结出一套牛冷冻精液人工授精技术和管理要点,为广大养牛户及从事动物改良工作的人员提供参考.     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

N,N-二甲基甲酰胺（DMF）对猪精液冷冻效果的影响

【目的】研究N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Di methylformamide,DMF)与甘油配制的混合保护剂对猪冷冻精子的保护效果。【方法】以DMF和甘油配制成混合冷冻保护剂对猪精液进行冷冻,试验共设对照组(30mL/L甘油)、A组(10mL/L DMF+20mL/L甘油)、B组(20mL/L DMF+10mL/L甘油)、C组(30mL/L DMF)和D组(50mL/L DMF)5个处理组,以活动精子百分率、精子活率、精子直线运动速率、精子顶体完整率以及精子质膜完整率为检测指标,对猪精子冷冻效果进行评价。【结果】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂对猪精子有较好的冷冻保护作用,与其他处理组相比,除精子直线运动速率和质膜完整率与10mL/L DMF+20mL/L甘油组无显著差异外,其他各项指标均优于其他组及甘油对照组。30mL/L DMF对猪精子的毒性强于同浓度甘油,但20mL/LDMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂的毒性与甘油对照组无显著差异(P>0.05)。【结论】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂比单一使用甘油或DMF能起到更好的冷冻保护作用。     

牛精清及牛用稀释液在猪精液冷冻中的应用

为了验证牛精清及牛用精液冷冻稀释液在猪精液冷冻中的有效性,将牛精清(0、2.50%、5.00%、10.00%)加入猪精液冷冻稀释液(葡萄糖1.10%、柠檬酸1.48%、Tris 2.42%、NAC 0.02%、卵黄20.00%、甘油6.00%、青霉素0.06%、链霉素0.10%)中,或用改良猪精液冷冻稀释液(另加入0.10 mmol/L他克林)、牛精液冷冻稀释液及改良牛精液冷冻稀释液,对猪精液进行冷冻处理。结果表明,在本试验条件下,牛精清对猪精子冷冻保存没有正面作用;改良牛用稀释液用于猪的精液冷冻,效果与改良猪用稀释液相当,优于未改良牛用稀释液。     

影响猪精子耐冻性的候选基因分析

在对通城猪精液冷冻保存的过程中,发现精液冻存质量存在个体差异。根据多次精液冻存后的精子活力检测结果,结合系谱关系筛选出精子耐冻与不耐冻个体各3头,并采用"中芯一号"SNP芯片进行群体遗传分化指数(F_ST)分析,应用生物信息学方法挖掘影响猪精子耐冻性差异的关键候选基因。结果显示:22头通城猪精液冻存后的精子活力存在明显差异,3头精子耐冻个体之间和3头精子不耐冻个体之间分别具有更近的亲缘关系,表明猪精子耐冻性差异可能受遗传因素影响;对耐冻性差异个体SNP芯片数据的F_ST分析结果显示,F_ST平均值为0.170 5,存在较高程度的遗传分化;进一步选取F_ST前1%(F_ST>0.53)的266个SNP位点,并在其上下游100 kb区域共注释到了397个候选基因,富集在细胞形态、肌动蛋白细胞骨架和离子通道等生物学过程;其中KCNG4、ARPC1B、DNAAF4、MNS1、LIMK2、RPL31和VIM等基因可作为猪精子耐冻性差异的关键候选基因。以上结果说明,猪精子耐冻性受遗传因素影响,...     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

珍珠鸡人工授精的研究

用电刺激采精方法 ,对 5只雄性成年珍珠鸡进行 2 5只次试验 ,皆获得精液。与按摩采精法相比 ,电刺激采精法采集的精液量 (0 .5 5 m L )显著高于按摩法 (0 .12 m L ) ,平均每次射出的精子总数 (4.2 2亿个 )比按摩采精法 (2 .4 4亿个 )显著增加 ,但精子活率和受精率无显著差异。冷冻试验结果表明 ,精子的活率为 2 0 %～ 5 0 % ,输精结果表明 ,受精率可达 6 0 %。     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响

【目的】探索实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【方法】采用实时精子分离系统对精液进行分离优选,液氮冷冻法制作细管冻精,以未分离精液为对照,检测实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【结果】分离优选精子解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率均明显高于对照组(P<0.01);分离组精子的正常形态率也显著高于对照组,且未受冷冻-解冻过程的影响(P>0.01);分离过程对精子密度也未产生显著影响(P>0.01)。【结论】实时精子分离系统可以显著改善猪冷冻精液的品质。     

猪精液保存及精子代谢与表观遗传调控研究进展

猪精液保存在科学理论研究和经济生产实际中都具有重要的意义。文章就国内外有关猪精液保存、精子代谢、精子冷冻过程中的表观遗传调控等研究进展进行了综述,并对猪精液保存的前沿发展与研究方向进行了展望,以期为进一步提高猪精液保存的品质,发挥良种优势提供理论依据。