不同稀释剂对猪冷冻精液的影响

手握法采集12月龄大约克种公猪精液,在37℃下离心,弃去精清,收集浓缩段富含精子部分,用7种不同的稀释液进行稀释,应用液氮熏蒸法制作颗粒冻精。结果表明,在7种稀释液中,7号稀释液优于其他6种稀释液(p<0.05);与其他的冷冻保护剂相比,甘油的冷冻保护性能较好(p<0.01),其适宜浓度为2~4ml/l;干解冻(40~45℃)效果优于湿解冻,解冻后精子活率达0.46~0.49(p<0.05);稀释液中添加安钠咖可有效地延长精子的冻后存活时间(p<0.01)。     

卵黄、牛奶及EDTA对冷冻过程中猪精子内Zn~(++)和Ca~(++)含量的影响

冷冻过程中,卵黄能有效地抑制精子内Zn~(++)含量的升高,而牛奶则无此作用。由于卵黄和牛奶中都含有大量的Ca~(++),因此当用作保护剂时,会使冻后精子内Ca~(++)的含量大大升高,但卵黄的影响较小。如果在卵黄中加入EDTA,则能明显阻止精子内Ca~(++)含量的升高。而且,解冻后精子的存活时间也延长。试验结果表明:(1)卵黄对精子的保护作用优于牛奶;(2)卵黄和牛奶中的Ca~(++)会影响解冻后精子的存活,但添加EDTA后可得到明显改善。     

卵黄离心及精液透析预处理对猪精子冷冻效果的影响

从卵黄离心处理和精液透析两方面对现有猪精子冷冻方法进行优化。分别采用两种离心方案除去卵黄中大颗粒物质,研究卵黄离心处理对猪精子冷冻效果的影响;在精液冷冻预处理的第一阶段降温平衡中,将包含精浆的猪精液在大体积稀释液中进行透析,研究透析方法对猪精子冷冻效果的影响。结果发现,对卵黄进行离心以及对包含精浆的精液采用透析处理均能明显改善猪精子冷冻效果(P0.05)。     

猪冷冻精子的体外受精与单精子胞浆内注射

用猪冷冻精子进行体外受精和单精子胞浆内注射(ICSI),并研究添加L-半胱氨酸及不同成熟培养法对猪ICSI胚胎发育的影响。结果表明:用猪冷冻精子生产的ICSI胚胎卵裂率及囊胚发育率分别为68.3%和11.4%,均低于用冷冻精子进行体外受精(IVF)所获得的卵裂率和囊胚发育率(分别为76.9%和19.2%,P<0.05)。在培养液中添加1.71mmol·L~(-1) L-半胱氨酸培养3 h,无论是卵裂率、桑椹胚发育率,还是囊胚发育率,均未得到明显改善(P>0.05);采用含0.4%BSA的NCSU-23培养液进行猪卵母细胞成熟培养,ICSI胚胎卵裂率虽明显高,但各组所获胚胎发育率均无显著差异(P>0.05),表明所用卵母细胞的成熟方法并未对ICSI胚胎发育产生明显的影响;用颗粒细胞或卵丘细胞共培养ICSI胚胎后,卵裂率有明显提高(P<0.05),但各组囊胚发育率无统计学差异。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

猪体外受精精子冷冻后的超微结构研究

猪鲜精冷冻后，虽保持了一定的活力，但受精能力明显降低。精子结构特别是顶体遭到不同程度的损伤。应用超微结构方法，观察了鲜精体外获能顶体反应（对照组）及冻精解冻（实验组）后顶体结构的改变。二者在质膜膨胀断裂、囊泡化方面，有着十分相似之处，显示冷冻解冻后，可以使有些精子产生一种假顶体反应（ＰｓｃｕｄｏａｃｒｏｓｏｍａｌＲｅａｃｔｉｏｎ），从而导致受精率下降。     

猪冷冻精液受胎率试验

1990～1991年,利用本项研究确定的冷冻、解冻稀释液及成套冷冻技术程序生产的冻精,以杂交母猪和本地母猪为主进行配种试验,受胎率由30％提高到50％,1991年中间试验情期受胎率提高到70.59％,窝产仔8.34～9.73头。     

5种禽类卵黄低密度脂蛋白对猪精子冷冻效果的影响

为了确定具有最佳抗冷冻效果的禽类卵黄低密度脂蛋白(LDL)及其添加质量分数,在猪精液冷冻稀释液中分别添加质量分数为6%、7%、8%、9%和10%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子和鸵鸟的卵黄LDL,分析不同禽类的LDL对猪精子的冷冻保存效果。结果表明,稀释液中添加质量分数为9%的鸡、鸭、鹌鹑、鸽子卵黄LDL以及质量分数8%的鸵鸟卵黄LDL时,冷冻-解冻后精子活率最高,分别达到42.33%、35.63%、31.47%、47.33%和36.40%。以5种禽类LDL最佳质量分数配制冷冻稀释液冷冻精子,发现质量分数为9%的鸽蛋LDL冻存猪精子时解冻后精子活率达到47.33%,顶体完整性达到62.57%,质膜完整性达到48.13%,均显著优于其他处理组(P<0.05)。说明鸽子卵黄LDL对猪精子具有良好的冷冻保护性能,可提高猪精子抵抗低温打击的能力。     

维生素B12对牛冷冻精液精子质量的影响

牛精液冷冻前于精液然释中添加ＶＢ１２为试验组,不添加ＶＢ１２的对照组。冷冻结果表明：试验组冻精解冻后精子活力,顶体完整率分别对照组提高１６．１１％,１５．９％,精子畸形率与ＧＯＴ活性明显下降;精子存活时间处长。说明ＶＢ１２在牛精液冷冻中对牛了形态结构具有保护作用。     

N,N-二甲基甲酰胺（DMF）对猪精液冷冻效果的影响

【目的】研究N,N-二甲基甲酰胺(N,N-Di methylformamide,DMF)与甘油配制的混合保护剂对猪冷冻精子的保护效果。【方法】以DMF和甘油配制成混合冷冻保护剂对猪精液进行冷冻,试验共设对照组(30mL/L甘油)、A组(10mL/L DMF+20mL/L甘油)、B组(20mL/L DMF+10mL/L甘油)、C组(30mL/L DMF)和D组(50mL/L DMF)5个处理组,以活动精子百分率、精子活率、精子直线运动速率、精子顶体完整率以及精子质膜完整率为检测指标,对猪精子冷冻效果进行评价。【结果】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂对猪精子有较好的冷冻保护作用,与其他处理组相比,除精子直线运动速率和质膜完整率与10mL/L DMF+20mL/L甘油组无显著差异外,其他各项指标均优于其他组及甘油对照组。30mL/L DMF对猪精子的毒性强于同浓度甘油,但20mL/LDMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂的毒性与甘油对照组无显著差异(P>0.05)。【结论】20mL/L DMF+10mL/L甘油混合冷冻保护剂比单一使用甘油或DMF能起到更好的冷冻保护作用。     

海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护效果的影响

比较了在冷冻保存液中添加不同水平海藻糖、蔗糖和乳糖对猪精液冷冻保护的效果。结果表明,添加3种双糖均能提高精液的冷冻保护效果,其最佳添加水平均为0.035 g/mL,在该添加水平下,海藻糖组的精子活率、活力和精子质膜完整率分别为(46.34±0.52)%,(41.38±0.39)%和(43.51±1.78)%,与蔗糖组差异均不显著(P>0.05),但均显著高于乳糖和对照组(P<0.05);海藻糖组的有线粒体活性精子百分率和精子顶体完整率分别为(44.56±1.16)%,(64.09±0.81)%,显著高于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05),3种双糖均随添加水平升高精子的顶体完整率逐渐升高;海藻糖组获能处理前后的精子获能率分别为(3.68±0.07)%和(41.82±0.56)%,显著优于蔗糖、乳糖和对照组(P<0.05)。说明海藻糖对猪精液冷冻保护的效果最好,最佳添加水平为0.035 g/mL。     

猪精液保存及精子代谢与表观遗传调控研究进展

猪精液保存在科学理论研究和经济生产实际中都具有重要的意义。文章就国内外有关猪精液保存、精子代谢、精子冷冻过程中的表观遗传调控等研究进展进行了综述,并对猪精液保存的前沿发展与研究方向进行了展望,以期为进一步提高猪精液保存的品质,发挥良种优势提供理论依据。     

猪精液冷冻保存的初步研究

采用液氮熏蒸法制作猪冻精颗粒 ,对稀释液及冷冻保护剂进行优化筛选。结果表明 ,在 5种稀释液中 ,5号稀释液优于其他 4种 (P<0 .0 5 ) ;甘油的冷冻保护性能优于乙二醇和二甲基亚砜 (P<0 .0 1) ,其适宜浓度为2 m L/ L;稀释液中添加安钠咖可有效延长精子的冻后存活时间 (P<0 .0 1)。猪精液冷冻效果的关键因素是冷冻温度、冷冻速度和解冻温度 ,通过对不同温度情况的研究 ,初步制定了猪精液冷冻温度曲线。     

不同抗氧化剂对金华猪精液冷冻保存效果的影响

为了观察冷冻稀释液中添加不同浓度的抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)、绿茶多酚(GTPs)、维生素E(VE)和超氧化物歧化酶(SOD)对金华猪精液冷冻保存效果的影响,分别在冷冻稀释液中添加0.125、0.25、0.5 mmol.L-1的GSH,10、15、20 mmol.L-1的GTPs,1、2、4 mg.mL-1的VE和1 000、2 000、4 000 I U的SOD,采集活率较高的金华猪精液,用上述含抗氧化剂的冷冻稀释液稀释后进行冷冻保存,分别检测4个处理组精子4℃平衡后的活率和解冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率。结果表明,在金华猪精液的冷冻稀释液中分别添加15 mmol.L-1GTPs、2 mg.mL-1VE、4 000 I U SOD可显著提高猪精子4℃平衡后的活率、解冻后精子活率和质膜完整率(P0.05)。     

富硒益生菌对种公猪精液品质的影响

在成年长白种公猪的饲料中,以0.3 mg/kg(以硒浓度计算)添加富硒益生菌,研究了富硒益牛菌对种公猪精液品质的影响.结果显示,试验组种公猪精液中的精子活率、顶体完整率、还原型谷胱甘肽过氧化物酶的活性均比对照组高,但精液中的精子畸形率比对照组低,说明富硒益生菌能明显改善种公猪的精液品质.     

猪0.5 mL细管冷冻精液的人工授精试验

【目的】制备猪0.5mL细管冷冻精液,并对其输精效果进行检测。【方法】制备猪0.5mL细管冷冻精液,解冻后对其品质(活力、快速直线游动精子比例、质膜完整率、顶体完整率)进行检测。将36头母猪随机分为8组:A-1、A-2组(各5头)均输新鲜精液精子4×109个,稀释至80mL,其中A-1组采用常规输精,A-2组采用子宫内人工输精;B-1、B-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液,精子数量分别为1×109和2×109个,均稀释至20mL;C-1、C-2组(各5头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子2×109个,C-1组稀释至60mL,C-2组稀释至80mL;D-1、D-2组(各4头)均采用子宫内人工输冷冻精液精子4×109个,D-1组稀释至60mL,D-2组稀释至80mL。人工授精后记录妊娠率、受胎率及产仔数量。【结果】制作的猪0.5mL细管冷冻精液解冻后,活力最高的达到(42.4±0.9)%,质膜完整率为(47.2±0.3)%,顶体完整率为(46.8±0.4)%。新鲜精液平均妊娠率为100%,产仔数为9.00±0.63;冷冻精液平均妊娠率为72%,产仔数为6.64±0.82,新鲜精液妊娠率和产仔数均显著优于冷冻精液。【结论】新鲜精液人工输精效果优于冷冻精液;冷冻精液采用60和80mL稀释液体积对产仔率、产仔数没有明显影响;冷冻精液通过子宫内人工输精,效果最佳的精子数为2×109个,稀释液体积为60mL。     

稀释液中卵黄浓度对猪精液冷冻保存效果的影响

为探索卵黄在猪精液冷冻中的应用效果,筛选出猪精液冷冻稀释液中卵黄的最佳浓度,分别在猪精液冷冻稀释液中添加不同比例（20%、25%、30%）的卵黄,并以精子活率、活力、路径速率（VAP）、轨迹速率（VCL）、直线运动速率（VSL）等为指标,对猪精液稀释后、平衡后和冷冻后3个阶段的精液质量进行比较分析。结果表明,将猪精液冷冻稀释液中卵黄的添加量提高5～10个百分点,其稀释后、平衡后及解冻后3个阶段精子的5个运动参数与常规添加量相比均无显著差异（P〉0.05）。可见,提高猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度未能显著改善猪精液冷冻后的质量,综合考虑,猪精液冷冻稀释液中卵黄浓度仍以20%（v/v）为宜。     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

牛精清及牛用稀释液在猪精液冷冻中的应用

为了验证牛精清及牛用精液冷冻稀释液在猪精液冷冻中的有效性,将牛精清(0、2.50%、5.00%、10.00%)加入猪精液冷冻稀释液(葡萄糖1.10%、柠檬酸1.48%、Tris 2.42%、NAC 0.02%、卵黄20.00%、甘油6.00%、青霉素0.06%、链霉素0.10%)中,或用改良猪精液冷冻稀释液(另加入0.10 mmol/L他克林)、牛精液冷冻稀释液及改良牛精液冷冻稀释液,对猪精液进行冷冻处理。结果表明,在本试验条件下,牛精清对猪精子冷冻保存没有正面作用;改良牛用稀释液用于猪的精液冷冻,效果与改良猪用稀释液相当,优于未改良牛用稀释液。