PCR法检测血清I型马立克氏病病毒及其敏感性试验的研究

以人工合成的针对血清Ｉ号马立克氏病病毒（ＭＤＶ１）Ａ抗原基因（ｇＡ）部分序列的两端寡聚核苷酸为聚合酶链反应（ＰＣＲ）的引物，分别对马立克氏病病毒血清Ｉ型（京－１株，ＭＤ１１／７５Ｃ株）；２型（ＳＢ－１株）；３型（火鸡疱疹病毒的ＦＣ１２６株）毒株和ＧＡ株ＢａｍＨＩ Ｂ片段的ＰＡＣＹ１８４克隆重组质粒ＤＮＡ进行基因扩增反应及其敏感性试验。结果表明，该引物不仅对ＭＤＶ１具有较强的特异性，而且由此引物引导     

天津地区禽多杀性巴氏杆菌分离株血清型鉴定

通过Ｃａｒｔｅｒ氏荚膜型鉴定方法和琼脂扩散试验，对天津地区禽多杀性巴氏杆菌血清型进行鉴定。结果１６株分离菌中１１株为Ａ：１（４），４株为Ａ：１（３，４），１株为－：１（４）表明引起天津地区禽霍乱的致病菌与国内报道的以Ａ：１型为主有一定的差异。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原Ⅰ型特异性和群共同性决定簇的单克隆抗体

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体。以Ⅰ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的２株单克隆抗体细胞株，定名为ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ＭＤＶ均呈阳性反应；单抗ＢＡ４只对Ⅰ型ＭＤＶ（包括ＣＶＩ９８８疫苗株）呈阳性反应。免疫沉淀反应进一步确证２株单抗识别的是ＭＤＶ糖蛋白Ｂ抗原。     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B抗原I型特异性和群共同性决定簇的…

用能表达马立克氏病病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）的重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞免疫小鼠，制备针对ＭＤＶｇＢ的单克隆抗体，以Ｉ型马立克氏病病毒ＧＡ株感染的鸡胚成纤维细胞作为检测抗原，同时以免疫荧光试验（ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来筛选杂交瘤细胞，结果获得了ＩＦＡ和ＥＬＩＳＡ均为阳性的１株单克隆抗体细胞株，定义名ＢＡ４和ＢＤ８。在ＩＦＡ和免疫沉淀试验中，单抗ＢＤ８与Ｉ，ⅡⅢ型ＭＤＶ均呈阳     

禽传染性支气管炎病毒分离毒株的血清型鉴定与免疫防制研究

应用基于单克隆抗体的间接免疫荧光实验和病毒血清中和实验，分别对１１个禽传 性支气管为为病毒分离毒株进行血清型鉴定。其中３株为Ｍａｓｓ型，２株为Ａｒｋ型，２株为Ａｒｋ／Ｍａｓｓ混合弄其余４株为不可分类型或未知型。     

禽霍乱基因缺陷菌株双型联合免疫的研究

将禽源多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１株（血清型为５∶Ａ）用化学诱变剂亚硝基胍（ＮＴＧ）处理，从３０００多个克隆中筛选出９株链霉素依赖性基因缺陷型菌株（Ｃｓｔｄ株），经２０代连续回复突变测定，除１株外，其余８株表型稳定。将８株Ｃｓｔｄ株用小鼠做毒力比较试验，...     

不同血清型鸭疫里氏杆菌分离株的部分特性比较

目前，国外已报道鸭疫里氏杆菌（Ｒｉｅｍｅｒｅｌｌａａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ，ＲＡ）已存在２１个血清型（１～２１）［１，２，３］。我国也已发现多个血清型ＲＡ，但由于缺乏相应的参考菌株，除１型和２型被明确外，其它血清型未能指定编号，但被分成几类，并暂时命名为ＣＡＵ３、ＣＡＵ４和ＣＡＵ５型，以便与１型和２型相区别；另外还有少量分离株不属于１、２、ＣＡＵ３、ＣＡＵ４、ＣＡＵ５型［４］。为使血清型命名标准化，本试验以１～１９型鸭疫里氏杆菌参考菌株为标准，采用本菌分型的常用方法，对国内分离株进行了研究，并…     

中国禽流感流行株的分离鉴定

分别从广东、四川、新疆等地禽流感（ＡＩ）血检阳性、发病率高、产蛋率下降的鸡群中采集１８６份病料，先后分离到６株Ａ型流感病毒。这些分离株可在鸡胚中传代，可凝集鸡红细胞，血凝价达１６０～１２８０倍。不被新城疫、减蛋综合症、败血支原体阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成琼脂扩散（ＡＧＰ）抗原与禽流感标准阳性血清可出现白色沉淀线。分别将分离毒株与ＡＩ标准分型血清Ｈ１～Ｈ１４、Ｎ１～Ｎ９进行ＨＩ、ＮＩ试验，结果川和川农株均为Ｈ４Ｎ６，西昌１和２株及Ｓｈ株均为Ｈ９Ｎ２，新疆石河子（石）株为Ｈ１４Ｎ５。分离株分别做脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）、静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）测定，结果所有分离株ＩＣＰＩ介于０２４～１４８之间，ＩＶＰＩ介于０１５～０５６之间．通过电镜观察，可见直径为８０～１２０ｎｍ球状或杆状典型的禽流感病毒．经联机检索，从新疆石河子ＡＩ阳性鸡场产蛋下降的鸡群中分离出的Ｈ１４Ｎ５株为国内外首次从鸡中分离出的Ｈ１４亚型禽流感病毒。将某单位送检的禽流感鹅体分离株（Ｇ１株和Ｇ２株）做了血清型和毒力测定，试验结果认定，Ｇ１和Ｇ２株均为Ａ型禽流感病毒Ｈ５Ｎ１亚型，Ｇ１、Ｇ２株对鸡均达到高致病力毒株标准。     

马源轮状病毒血清3型引起的马驹腹泻

１９８７年３－７月，在１６８例马驹腹泻病例中观察到８９例（５３％）由轮状病一道因清３型引起，从６２病例粪便中共分离到５１株ＲＶ，分离株（ＣＨ－３）具有独特的毒ＲＮＡ电泳型且不同于该农场广泛流行的其他病毒株，用抗人和动物的ＲＶ血清１－１２型抗血清分别与ＣＨ－３病毒进行中和试验均呈阴性，但Ｃ－３病毒株双股ＲＮＡ能与马源ＲＶ血清３型株进行探针杂交。     

猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因的克隆、序列测定及与其他HCV株的比较

应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株部分ｐ２３和ｐ１４基因，然后采用平端克隆法将扩增的ｃＤ－ＮＡ克隆到ｐＵＣ１９的ＳｍａⅠ位点，用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他１０株ＨＣＶ相同基因区域用ＤＮＡＳＩＳ计算机软件进行同源性比较和系统树分析，结果表明，大部分毒株为同一个型，该型共包括９个ＨＣＶ株，以Ｂｒｅｓｃｉａ株为代表，石门（Ｓｈｉｍｅｎ）株也属该型；而Ａｌｆｏｒｔ株和Ｐ９７株与上述９个毒株差异较大，不属同一型。     

猪瘟病毒（HCV）石门株部分p23和p14基因的克隆,序列测定及与其…

应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株部分ｐ２３和ｐ１４基因，然后采用平端克隆法将扩增的ｃＤ－ＮＡ克隆到ｐＵＣ１９和ＳａｍⅠ位点，用双脱氧终止法牟重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他１０株ＨＣＶ相同基因区域用ＤＮＡＳＩＳ计算机软件进行同源性比较和系统树分析。结果表明，大部分毒株为同一个型，该型共包括９个ＨＣＶ株，以Ｂｒｅｓｃｉａ株为代表，石门（Ｓｈｉｍｅｎ）株也属该型；而Ａ     

4型菌毛、毒素及蛋白酶在动物源气单胞菌的检测

将来源于鱼、猪、犬等９种动物的１８株气单胞菌分离株通过ＡＤ（氨苄青霉素－糊精）培养基纯化。另以大肠杆菌束状菌毛相关（ｂｆｐ－ｒｅｌａｔｅｄ）基因的ＰＣＲ引物对ＥＢ１（ＧＡＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＣ）—ＥＢ２（ＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＴＡＴ）扩增,用ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记,构建核酸探针,作斑点杂交试验,用以检测上述气单胞菌菌株的４型菌毛,同时以溶血试验检测其毒素,用脱脂奶溶蛋白圈试验检测其蛋白酶。结果显示,在１８个菌株中,４型菌毛、毒素和蛋白酶均为阳性者为１０株（５５．６％）;３项指标均无肯定的阳性结果者４株,两者合计共１４株,占检测总数约８０％（１４／１８）,提示这３种毒力因子存在较高的相关性。所有鱼源株（５株）三项指标皆为阳性;４株猪分离株三项指标均为阳性者占一半;其它动物分离株检测结果无明显规律性     

HIV—2gag基因在重组痘苗病毒中的表达

以痘苗病毒ＨＡ基因为侧翼，将ＨＩＶ－２ｇａｇ基因部分序列（简称Ｇ１）和全部序列（简称Ｇ２）分别插入牛痘病毒Ａ型包涵体（ＡＴＩ）和串联１０个（与ＨＡ基因反向）或１６个（与ＨＡ基因同向）痘苗病毒Ｐ７．５组成的复合型启动子下游，构建了４个重组痘苗病毒表达载体质粒。经脂质体转染、鸡红细胞吸附试验筛选和免疫荧光鉴定，获得４株能稳定表达目的蛋白的重组痘苗病毒。实验结果表明，以ＨＡ基因为侧翼构建重组病毒的重组率约为０．１％，阳性重组率为２５％～１００％。实验中还发现，以ＨＡ基因为侧翼的重组痘苗病毒能够引起细胞融合，其可作为筛选重组痘苗病毒的另一种标志。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，表达的Ｇａｇ蛋白能被ＨＩＶ－２血清中的特异性抗体所识别，并能诱导小鼠产生抗ＨＩＶ－２Ｇａｇ抗体。     

禽多杀性巴氏杆菌单克隆抗体的制备及其基本性状研究

将多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）Ｃ４８－１株（Ｈｅｄｄｌｅｓｔｏｎ１型；Ｃａｒｔｅｒ分型５：Ａ）灭活后全菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ／０骨髓瘤细胞在ＰＥＧ１０００作用下融合。用全菌包被的间接ＥＬＩＳＡ方法检测抗体，获得了２３株能稳定分泌抗Ｐ．ｍ．１型单克隆抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞培养２个月和冻存３个月后复苏培养，均能稳定分泌特异性单克隆抗体。２３株腹水ＥＬＩＳＡ效价分别从１０－３—１０－１１，无免疫沉淀性，也无凝集性。Ｉｇ类型鉴定表明，３株属于ＩｇＭ，２０株属于ＩｇＧ。间接ＥＬＩＳＡ检测结果表明：２３株单抗只与Ｐ．ｍ．１型起反应，而不与Ｐ．ｍ．３、４、１６型起反应，也不与禽类易感的鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、李氏杆菌起反应，具有型的特异性。用ＩＣ８Ｈ９腹水建立的夹心ＥＬＩＳＡ方法检定Ｐ．ｍ．１型菌株，其敏感性高，特异性强，也更为方便。     

狂犬病 犬肠炎 犬瘟热 犬腺病毒病犬副流感五联弱毒冻干疫苗的研究

从国外引进的犬瘟热病毒（ＣＤＶ）、犬细小病毒（ＣＰＶ）、犬腺病毒－２型（ＣＡＶ２）和犬副流感病毒病毒（ＣＰＩＶ）四联弱毒样品中，分离筛选出增殖性良好的ＣＰＶ０ＸＮ１，ＣＡＶ２－ＸＮ３和ＣＰＩＶ－ＸＮ４株。另外还通过离体异种细胞交叉传代，获得的ＣＤＶ－ＸＮ１１１２弱毒株；从狂犬病毒株疫苗样品中筛选出ＥＲＡ８３６株。经试验证明这５株病毒在５代以内可作为制苗用种毒。采用静置和旋转培养法高滴度扩增这５株弱     

地高辛标记大肠杆菌1型菌毛结构基因核酸探针对鸡大肠杆菌分离株？…

将ＰＣＲ扩增的鸡大肠杆菌１型菌毛蛋白结构基因（ｐｉｌＡ）用地高辛标记成核酸探针与分属２８个血清型的５０个鸡大肠杆菌分离株进行斑点杂交，阳性率达８４％，用甘露糖敏血凝试验（ＭＳＨＡ）检测阳性率为７２％，表明核酸杂交比ＭＳＨＡ法更敏感。     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

马立克氏病疫苗免疫鸡群强毒攻击后羽囊排毒情况

分别以血清型Ⅱ型马立克氏病病毒（ＭＤＶ）疫苗株（Ｚ４、ＳＢ１）、血清Ⅲ型火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）疫苗株（ＦＣ１２６）及二价疫苗（Ｚ４＋ＦＣ１２６、ＳＢ１＋ＦＣ１２６）免疫鸡群，用琼脂扩散试验（ＡＧＰＴ）检查各鸡群ＭＤＶ强毒攻击后不同时期的羽囊抗原。结果，二价苗能使试验鸡羽毛囊强毒排出高峰推迟，排毒率显著下降。     

鸡胚绒毛膜源和鸡肾细胞源禽腺病毒抗原用于AGP试验检测…

将不同血清型的禽腺病毒（ＦＡＶ）毒株分别接种鸡胚绒毛膜（ＣＡＭ）和鸡肾细胞（ＣＫＣ）制成抗原，用琼扩试验（ＡＧＰ）比较这两种不同来源ＦＡＶ毒株的抗原反应。结果表明，两种抗原对同株ＦＡＶ的抗血清反应比对异株的抗血清敏感，且血清型间在敏感性上存在量的差异。ＣＡＭ源抗原对异株抗血清反应比ＣＫＣ源抗原敏感。多价ＣＡＭ源抗原（２￣３种抗原），可以提高敏感性，检测田间血清样品得到较高的阳性检出率。     

禽霍乱基因缺陷菌株双型联合免疫的研究

将禽源多杀性巴氏杆菌Ｃ４８－１株（血清型为５∶Ａ）用化学诱变剂亚硝基胍（ＮＴＧ）处理，从３０００多个克隆中筛选出９株链霉素依赖性基因缺陷型菌株（Ｃｓｔｄ株），经２０代连续回复突变测定，除１株外，其余８株表型稳定。将８株Ｃｓｔｄ株用小鼠做毒力比较试验，其中５株加注链霉素表现毒力，不加注链霉素则不表现毒力；用小鼠做免疫力测定，其中Ｃｓｔｄ－１和Ｃｓｔｄ－７能保护１０个最小致死量（ＭＬＤ）同型强毒菌的攻击。将Ｃｓｔｄ－１株与另一禽源多杀性巴氏杆菌Ｐ１０５９株（血清型为８∶Ａ）的链霉素依赖型菌株Ｐｓｔｄ－６混合，用小鼠做双型联合免疫试验，结果小鼠能抵抗Ｃ４８－１和Ｐ１０５９两株强毒菌混合培养物１０个ＭＬＤ的攻击，保护率达１００％。