β-葡萄糖苷酶产生菌的筛选及产酶条件优化

本研究从实验室构建的微生物菌库中筛选获得1株β-葡萄糖苷酶产生菌株HHL,结合ITS序列分析方法鉴定其为米曲霉（Aspergillus oryzae）。以β-葡萄糖苷酶酶活为考察指标,通过单因素试验及正交试验对其产酶条件进行优化。结果显示：菌株HHL最优产酶条件为以改良察氏培养基为培养基,pH 6.0,接种量8%,培养温度35℃,培养时间144 h。此条件下,产β-葡萄糖苷酶酶活为48.74 U/mL。     

1株产β-葡萄糖苷酶菌株的分离、鉴定与发酵条件初步优化

试验旨在从自然界中筛选β-葡萄糖苷酶高产菌株,对其进行鉴定和产酶条件优化。采用七叶苷显色技术分离和筛选β-葡萄糖苷酶菌株,采用固体发酵技术对其产酶条件进行优化,通过形态学特征及系统发育分析对其进行鉴定。结果表明,在广西河池喀斯特地貌自然植被区筛选出1株产β-葡萄糖苷酶的菌株,将其鉴定为棘孢曲霉（Aspergillus aculeatus）,得到最佳产酶条件为pH值7.0、温度28℃、装液量40 mL/250 mL,经过优化后该棘孢曲霉菌株的产酶能力达到了42.75 U/mL,相较于出发条件提高了10.9倍。研究表明,研究筛选得到的棘孢曲霉能够稳定产生β-葡萄糖苷酶,经固体发酵技术优化后产酶能力得到了较大提高,且在中性条件下产酶量最高,在饲料生产中具有应用价值。     

米曲霉发酵玉米芯生产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究

将经过筛选的产β-葡萄糖苷酶的米曲霉,通过单因子及正交实验对其产酶发酵条件进行了研究,结果显示:当培养基为:玉米芯3%;豆饼粉0.2%;KH2PO40.4%;CaCl20.04%;MgSO40.04%;自然pH;装液量为60ml时为最佳发酵条件。酶活力测定中采用了京尼平甙法测相对酶活。     

大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶产生菌的选育及产酶条件研究

以豆豉为材料筛选产大豆异黄酮β-葡萄糖苷酶的菌株,并用京尼平甙法检测相对酶活。以相对酶活最高的野生菌为出发菌(经镜检为杆菌),通过UV和LiCl诱变育种,利用单因素和正交实验进行产酶条件研究确定最佳条件为:黄豆粉1%、酵母膏1%、麸皮2%、KH2PO40.1%、NaCl0.5%、起始pH值7.5、装液量30ml、发酵时间48h、发酵温度37℃、转速70r/min。在该条件下,用京尼平甙法测得该菌株的相对酶活为0.826,水杨苷法测得绝对酶活为5.49μg/ml。     

耐碱性β-甘露聚糖酶产生菌的分离鉴定及发酵条件优化

研究旨在高产β-甘露聚糖酶饲用益生芽孢杆菌的筛选及培养条件优化。用透明圈法筛选得到一株产β-甘露聚糖酶活力较高的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WMYB-2,通过单因素实验、Box-Behnken实验及响应面分析对该菌的产酶培养基及培养条件进行了优化,并对其酶学性质进行了初步研究。结果表明,该菌株产酶的最佳培养基及发酵条件为:魔芋微粉10.0 g/l,大豆蛋白胨10.0 g/l、CaCl_2 0.6 g/l、K_2HPO_4 0.8 g/l、MgSO_4·7H_2O 1.0 g/l,pH三角瓶,37℃、220 r/min发酵36 h,酶活力达355.75 U/ml,是初始酶活力的3.5倍。该酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和5.5。在45～55℃内酶活力稳定,55℃保温30 min和3 h后其相对酶活力保留92%和57%;在pH值5.0～10.0内酶活力稳定,在pH值9.0和10.0的环境下处理2 h其相对酶活力保留95%和81%。Li~+和K~+对该酶具有一定的激活作用。该酶具有良好的耐碱特性及应用潜力。     

β-葡萄糖苷酶的研究进展

本文综述了β-葡萄糖苷酶的分类、分布、理化性质及其水解糖苷机制,以及国内外对β-葡萄糖苷酶分子生物学的研究情况。     

局限曲霉产β-葡聚糖酶发酵培养基和发酵条件的优化

通过对局限曲霉(QY-00305)发酵培养基和发酵条件的研究,得出其最佳培养基配方为(100ml):大麦粉1.5g,(NH4)2SO40.5g,NaNO30.4g,Na2HPO4·12H2O0.25g,FeSO4·7H2O0.03g,CaCO30.5g,Tween800.15ml;其最佳培养条件为:发酵初始pH为8.5,发酵温度为34℃,500ml三角瓶的装液量为80ml(摇床转速为200r/min),菌体的接种量为7%(孢子悬液的浓度为1.25×106),发酵周期为84h。在最佳培养基和最优发酵条件下,每毫升发酵培养基酶活力达1300.52U,大约是初始设计培养基的3倍。     

产β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌降解豆粕的发酵条件优化及抗营养因子测定

试验优化得到了降解豆粕芽孢杆菌Z-1生长的最优发酵条件,并对发酵后豆粕中的抗营养因子进行了测定。采用单因素试验的方法在摇床培养的基础上对β-葡萄糖苷酶芽孢杆菌的生长主要影响因素进行了考察,其中包括发酵培养基的C源、N源、无机盐、p H值、接种量、发酵时间等。通过设计正交试验对各因素的浓度和组合以及最佳培养条件进行了优化,得到该菌株产酶的最适条件为:糊精5.0%、蛋白胨1.0%、Cu SO4·5H2O 0.1%、Fe SO4·7H2O 0.01%、接种量3%、p H值为7、培养时间72 h。用优化后的培养基进行发酵,在产酶活性上比优化前提高了35.5%,抗营养因子数量下降了61.6%。     

航天诱变菌株黑曲霉ZM-8发酵玉米秸秆产β-葡萄糖苷酶的条件优化及其酶学特性

黑曲霉ZM-8是一株经航天诱变筛选出的高产纤维素酶菌株。以玉米秸秆和麸皮为原料,利用固态发酵法研究了发酵时间、发酵温度和初始pH对该菌株产β-葡萄糖苷酶的影响,采用正交试验对各因素进行了优化,并对酶学特性进行了初步研究。结果表明,发酵时间和发酵温度对酶活影响均达到极显著水平(F=14.994>F0.01=5.85;F=10.872),初始pH(F=5.843)对其影响达到显著水平;当初始pH为5.5、培养温度为35℃、培养时间为72 h时,β-葡萄糖苷酶的酶活达到了58.95 U/mL。该酶最适温度为55℃,保温2 h后仍具有95%以上的酶活力;最适pH为5.5,pH在3.0～6.0时,酶活力稳定性良好。     

β-葡萄糖苷酶的研究

1837年，Liebig和Wohler首次在苦杏仁汁中发现了β-葡萄糖苷酶。β-葡萄糖苷酶（EC3．2．1．21）的英文名是β-glucosidase，属于水解酶类，又称β-D-葡萄糖苷水解酶，别名龙胆二糖酶、纤维二糖酶和苦杏仁苷酶。它可催化水解结合于末端非还原性的β-D-糖苷键，同时释放出配基与葡萄糖体。     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的最佳参数

试验采用三因素五水平二次回归通用旋转组合设计方法对黑曲霉β-葡萄糖苷酶水解大豆异黄酮的条件进行研究。建立了水解后游离型苷元含量与时间、温度、酶量之间的数学模型;并获得最佳水解条件:水解时间5.3 h,水解温度55.4℃,酶量68.7 U/g。     

一株纤维降解菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达及酶学性质分析

试验对1株娄彻氏链霉菌(B5)的β-葡萄糖苷酶(高活性纤维降解酶)基因进行克隆,通过构建高效表达的载体实现基因表达,对所得表达产物的酶学性质进行测定分析,为饲用纤维素酶的开发利用提供参考。通过PCR扩增B5的Egl基因的完整CDS序列,构建pET-32a-egl表达载体,转化到BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞。试验成功构建了高产β-葡萄糖苷酶的基因工程大肠杆菌,实现了β-葡萄糖苷酶的分泌表达,其分子量约4.1×10-4 U,酶学特性分析表明,在40℃、pH值8、底物浓度为3.0×10~(-2) mol/L时,酶活力最高,为1 085 U/mL。     

葡萄糖氧化酶产生菌的分离及固体发酵条件优化

采用Fiedure.K.J显色法,从土壤中分离得到1株命名为LJ-1的葡萄糖氧化酶产生菌。经过形态学观察并基于ITS-rDNA序列分析构建系统发育树对菌株LJ-1进行鉴定。采用固体发酵法和单因素试验法研究培养基组成和发酵条件对菌株LJ-1产葡萄糖氧化酶活力的影响,在单因素试验结果的基础上,采用响应面法对影响葡萄糖氧化酶活力较大的因素进行优化。结果表明：菌株LJ-1被鉴定为褐红篮状菌LJ-1(Talaromyces pinophilus LJ-1)。适宜的发酵培养基组成为：葡萄糖14%,硝酸钠0.64%,KH₂PO₄0.2%,MgSO₄·7H₂O 0.25%,CaCl₂0.2%,Zn SO₄0.25%,吐温801%;优化后的发酵条件为：固水比1:0.85,发酵温度33℃,发酵时间8 d,装量17.5 g/250 mL三角瓶,初始p H 6.5,接种量6%。在此条件下,葡萄糖氧化酶活力达到46.30 U/g干基。试验结果为葡萄糖氧化酶的生产提供了新的途径。     

β-葡萄糖苷酶对肉鸡骨骼生长及抗氧化功能的影响

选用240羽1日龄艾维茵肉用仔公鸡,随机分为4个组,每组设4个重复,每个重复15羽.在玉米-豆粕基础日粮中添加不同水平的β-葡萄糖苷酶制剂(0、2、4、6 g/kg).试验期为42 d.结果显示,饲粮中添加β-葡萄糖苷酶的水平为0.2%时,肉鸡生长最佳,但对肉鸡的股骨、胫骨生长无显著影响,血清中钙、磷及碱性磷酸酶(ALP)指标均无显著变化;可显著提高血清中SOD和肝脏中GSH-PX、GR活力(P<0.05),同时使血清中MDA含量明显降低(P<0.05);极显著地提高了胸肌的a*(红度)值(P<0.001),而L*(亮度)值显著低于对照组(P<0.001).     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶稳定性的研究

β-葡萄糖苷酶是纤维素酶的重要组成部分，它可水解结合于末端、非还原性的β-D一糖苷键，释放葡萄糖和相应的配基，其活力高低及稳定性直接影响纤维素酶的作用效果。本文对该酶的稳定性进行研究，为饲料酶制剂的生产和应用提供理论依据。     

京尼平甙法测定酶活在β-葡萄糖苷酶高产菌株筛选中的应用

在筛选β-葡萄糖苷酶高产菌株过程中用京尼平甙作底物来测定β-葡萄糖苷酶的活力,在对产物进行显色时,具有显色稳定、重现性好、试剂价格较低等优点。通过水杨苷法作葡萄糖标准曲线,能得到相对酶活与绝对酶活的换算公式,进而得到绝对酶活。实验采用京尼平甙作底物来测定β-葡萄糖苷酶的活力,即京尼平甙法,并从实验室保藏菌和豆豉分离菌中筛选出一株适合β-葡萄糖苷酶产量高的菌株O3。     

一株聚β-羟基丁酸（PHB）产生菌的分离纯化及鉴定

本研究从土样中分离纯化出一株PHB高产菌株P-9,通过对其进行形态学和生理生化反应特征研究,初步鉴定为苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）。进一步研究P-9菌的生长规律,发现P-9菌生长的延迟期为0-24 h,24 h后进入对数生长期,同时积累PHB,84 h时细胞进入稳定生长期,108 h时PHB产量达到最大,达1.25 g/L。     

β-葡聚糖酶活力测定条件研究

<正>β-葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1,3和β-1,4糖苷键连接而成的D型葡萄糖聚合物,它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。β-葡聚糖酶属于水解酶类,能有效地降解β-葡聚糖分子中的β-1,3和β-1,4糖苷键,使之降解为小分子。由于在     

γ-氨基丁酸产生菌的分离及发酵条件优化

γ-氨基丁酸(GABA)是哺乳动物体内的一种抑制性神经递质,具有许多重要的生理功能。利用酸菜、酸奶等食品进行乳酸菌的分离,通过纸层析法筛选得到1株产GABA量较高的菌株Y-3,经16SrDNA鉴定该菌株为短乳杆菌。单因素试验和正交试验确定的菌株Y-3最佳发酵条件为:葡萄糖1.5%、酵母膏0.5%、胰蛋白胨1.5%、L-谷氨酸钠1.0%、丁二酸钠0.5%,初始pH为6.0,接种量6%,37℃静置培养48 h,GABA产量达12 g/L以上,比优化前产量提高了近5倍。     

黑曲霉液体发酵产β-葡聚糖酶培养基的优化

对黑曲霉2449菌株液体发酵产酶培养基进行了优化。通过单因素试验，确定了培养基的最佳组分碳源、有机氮源和无机氮源分别为大麦粉、豆粕粉和NH4NO3。通过正交试验，确定了大麦粉、豆粕粉和NH4NO3的最优组合为3％大麦粉、2％豆粕粉、0．14％NH4NO3。