miR-15a真核表达载体的构建及鉴定

根据miR-15a成熟体序列合成1对miRNA寡聚单链DNA,克隆到真核表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR中,构建pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-15a真核表达载体。瞬时转染肺腺癌A549细胞后,经Real-time PCR证明pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-15a能有效表达miR-15a。试验结果为进一步研究miR-15a的功能和靶基因鉴定打下了基础。     

miR-146a过表达羊驼黑色素细胞内转录组图谱分析

miR-146a在一些癌症生理学过程如肺癌、肝癌、黑色素瘤中具有重要的调节作用。为了揭示miR-146a在羊驼黑色素细胞中的生物学功能,利用RNA-Seq的高通量测序技术从基因组转录水平解析miR-146a可能的分子作用机制,经Illumina sequencing平台测序并进行生物信息学分析。结果表明,miR-146a转染组和对照组羊驼黑色素细胞的转录表达谱,各样品纯数据均达到6.34 Gb,Q30碱基百分比在87.44%以上;组装后共获得161 666条序列,其中长度在1 kb的序列有20 019条。对序列进行功能注释,包括与NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO和Pfam数据库的比对,结果显示,共获得25 867条序列的注释结果,其中,SSR分析共获得10 963个SSR标记。功能分析结果表明,这些表达基因涉及多种GO分类及KEGG通路且与黑色素相关的GO分类和KEGG通路占有较大比例。结果显示,研究miR-146a在黑色素细胞中的功能及其分子机制,并获得了黑素细胞转录组图谱,可为进一步研究控制羊驼毛色生理和色素生成的基因表达网络提供宝贵的资源。     

miR-125a对人脑微血管内皮细胞功能的调节作用

目的 探讨miR-125a对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)功能的影响.方法 体外培养HBMECs,慢病毒感染法沉默HBMEC中miR-125a,qRT-PCR检测HBMECs中miR-125a表达.在正常条件及低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激条件下,采用MTT法检测HBMEC细胞增殖能力,血管形成检测试剂盒检测细胞血管形成,分别采用衰老试剂盒和流式细胞仪检测细胞的衰老及凋亡.结果 在正常及ox-LDL处理条件下,miR-125a敲除均能抑制HBMEC细胞增殖及血管形成能力,促进细胞衰老及凋亡.结论 miR-125a调控生理及病理条件下HBMECs多种功能.     

鸡miR-181a组织的表达谱及其转录调控区域

【目的】分析鸡miR-181a的转录起始位点,并分析其在1日龄和成年鸡不同组织中的表达谱,以期为研究miR-181a的功能奠定基础。【方法】采用qPCR技术构建miR-181a 在1日龄和成年鸡肝脏、脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织中的表达谱。用version(1.83)分析miR-181a的保守性,并采用ENCODE数据库进行miR-181a转录起始位点和启动子区域的分析。【结果】①采用qPCR检测miR-181a在鸡下丘脑中的表达量和高通量测序的结果一致,1日龄下丘脑中的表达量显著低于成年鸡的表达量（P＜0.05）;②miR-181a 在11个组织中均有表达,且在1日龄和成年鸡脾脏、肺、小肠、大脑、小脑、下丘脑、脑干、胸腺、心脏和肾脏组织的表达量差异显著（P＜0.05）,而在肝脏中表达量的差异不显著（P＞0.05）;③miR-181a的前体miR-181a-1上游区域有一个启动子区和一个潜在的转录起始位点;④miR-181a-1的转录调控区域内存在的多个转录因子,转录因子主要有NFKB,c-Fos等。【结论】鸡miR-181a的表达有组织和时序差异,其成熟序列在脊椎动物中十分保守,上游有一个转录起始位点及启动子区。     

鸡miR-133a靶向调控BIRC5基因的表达

【目的】研究miR-133a在鸡不同组织中的表达情况,对baculoviral IAP repeat containing 5（BIRC5）进行靶基因的试验验证,探讨鸡miR-133a对BIRC5的靶向调控作用。【方法】采用生物信息学方法对miR-133a靶基因进行预测,并用双荧光素酶报告系统及点突变试验对BIRC5进行靶基因验证,同时运用实时荧光定量PCR检测miR-133a在鸡不同组织中的表达量。【结果】在鸡3′UTR数据库的11 891个基因中预测到287个miR-133a的靶基因;miR-133a在鸡的组织表达谱中显示其在肌肉中的表达量较高,尤其是在骨骼肌中表达量最高;报告基因试验显示BIRC5是miR-133a的靶基因,点突变试验证实了miR-133a在BIRC5上结合的靶位点。【结论】miR-133a是与鸡骨骼肌发育高度相关的miRNA,且鸡BIRC5基因是miR-133a的靶基因。     

miR-20a在pk15细胞的过表达及其对炎症细胞因子的影响

炎症反应是机体应对外界刺激的自我保护机制,近年发现一些miRNA与机体的炎症因子存在相互调控关系,试验利用人工合成的miR-20a模拟物及抑制剂,建立了脂质体转染最佳体系,检测了miR-20a在pk15细胞中对炎症因子的调节作用。结果表明:60 pmol/μL和80 pmol/μL为最佳转染浓度,36 h为最佳转染时间,抑制miR-20a的表达会显著提高干扰素和白细胞介素的表达(P0.05)。这一结果揭示了miR-20a在机体免疫过程中对炎症反应起到负调控作用,在一定程度上可以预防过度炎症反应的发生。     

特异性敲除肠道miR-146a对小鼠肠道菌群的影响

【目的】miR-146a作为抑炎因子,仍然不清楚其是否参与宿主与微生物间的互作,进而影响肠道稳态,因此本文旨在研究miR-146a对小鼠肠道菌群的影响。【方法】以肠道miR-146a特异性敲除小鼠(CKO鼠)及对照小鼠(Flox鼠)为研究对象,利用16S rRNA高通量测序法检测2组空肠段的微生物菌群分布。【结果】测序共获得1 134个用于物种分类的OTUs,包括37门、80纲、161目、198科、261属、117种的细菌;Flox组和CKO组小鼠的空肠微生物中共有46个相同的OTUs;各组肠道微生物中厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteroidota、疣微菌门Verrucomicrobiota、变形菌门Proteobacteria和脱硫杆菌门Desulfobacterota是优势菌门;2组肠道微生物群落组成整体相似,但CKO组梭状芽孢杆菌纲Clostridia的平均相对丰度高于Flox组(P=0.067),毛螺菌目Lachnospirales平均相对丰度显著高于Flox组(P<0.05),其他层级组成无显著差异。【结论】miR-146a敲除可改变宿主肠道梭状芽孢杆菌...     

miR-19a对民猪前脂肪细胞分化影响的研究

为探究miR-19a对民猪脂肪细胞分化过程的调控机制,研究采用双荧光素酶报告载体、实时荧光定量PCR构建组织表达谱、过表达和抑制miR-19a后对成脂标志基因和脂肪酸代谢标志基因的影响,油红O染色等生物学技术分析miR-19a对前脂肪细胞成脂的影响。结果表明,miR-19a与KLF13呈靶向关系,过表达miR-19a抑制成脂标志基因表达,促进脂肪酸代谢标志基因表达,抑制脂滴形成。抑制miR-19a可促进成脂标志基因表达,抑制脂肪酸代谢标志基因表达,促进脂滴形成。综上,试验验证miR-19a可抑制前脂肪细胞成脂分化,确定KLF13为miR-19a靶基因,为进一步研究microRNA对民猪前脂肪细胞分化的调控机制提供参考。     

miR-6523a对延边黄牛垂体细胞中生长激素分泌的影响

为研究血液外胞体中miRNA对延边黄牛垂体细胞中生长激素(GH)分泌的影响,本研究选择在延边黄牛和韩延牛血液外胞体中显著差异表达的miR-6523a,利用实时定量PCR(qPCR)和Western Blot技术,研究了miR-6523a对延边黄牛垂体细胞中GH分泌水平的影响及miR-6523a与靶基因间的调控机制。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因系统结果显示,miR-6523a靶向了SSTR5的3′非翻译区(UTR);qPCR和Western Blot检测结果显示,与对照组相比,添加miR-6523a-mi能极显著提高延边黄牛垂体细胞中GH mRNA和蛋白的表达(P<0.01),而添加miR-6523a-in,GH mRNA和蛋白的表达有所降低,但和对照组相比差异不显著(P>0.05);与对照组相比,添加miR-6523a-mi能极显著抑制SSTR5 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),而添加miR-6523a-in,SSTR5 mRNA和蛋白的表达均有所提高,但和对照组相比差异不显著(P>0.05)。本研究表明,miR-6523a可通过调节SSTR5基因的...     

p16^INK4a与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16^INK4a基因是一种抑癌基因,在CyclinD-CDK4/6-pRb-E2F通路中发挥重要负反馈调节作用,大部分恶性肿瘤中均发现该基因表达缺失。p16^INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数,可作为卵巢癌独立的预后因子;p16^INK4a在宫颈癌中呈过表达,有助于宫颈癌的筛查;p16INK4a在子宫内膜癌发生发展中起着重要作用,与子宫内膜癌转移灶发生率的增加密切相关;而在外阴癌HPV感染型中,常有p16^INK4a过表达,是可靠的HPV阳性外阴癌的标记物。     

miR-221功能研究进展

miR-221是由内源性发夹(Hairpin)结构转录产物衍生出来的一类长21～28个核苷酸的小分子非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)。通过碱基互补配对原则与靶基因mRNA结合,从而在转录水平引起靶基因mRNA的降解或者抑制其翻译成蛋白。miR-221是成簇分布的miRNA,近来研究表明,miR-221参与调控细胞增殖、凋亡、造血、肿瘤发生等一系列生物进程。文章介绍了miR-221功能研究的进展,为进一步研究miR-221提供了理论基础。     

血浆miR-200c作为肺癌早期诊断的临床价值研究

目的 分析血浆miR-200c的表达与肺癌患者临床病理特征的相关性,并探讨miR-200c能否作为肺癌早期诊断的潜在肿瘤标志物的可能性。方法 收集55例肺癌患者和53例健康体检者,采用实时荧光定量PCR检测受检者血浆miR-200c的表达情况,对检测结果进行统计学分析。结果 miR-200c在肺癌患者组血浆中表达水平均高于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.01）。受试者工作特征曲线显示miR-200c能够将肺癌与正常对照组区分出来（AUC=0.676）。结论 血浆miR-200c的表达可能与肺癌的发生有关,提示miR-200c可作为特异性生物标志物对肺癌患者进行早期诊断的可能性。     

DNA甲基化与肿瘤相关性的研究进展

DNA甲基化在维持染色体以及基因组的稳定性方面日益显得重要起来,文章主要从甲基化的发生机制、甲基化与肿瘤的关系上进行讨论,综合目前对DNA甲基化研究的现状展开讨论,提出了其研究方向。     

miR-204在非小细胞肺癌患者中的表达及其对SIRT1的靶向调控作用

目的 研究miR-204在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中表达的临床意义及其对SIRT1的靶向调控作用.方法 收集39例原发性NSCLC患者的癌组织和对应癌旁组织标本.实时荧光定量PCR检测组织标本中miR-204的表达水平;并分析其与NSCLC临床病理学特征的关系.将人非小细胞肺癌细胞株A549分别转染miR-204的模拟物或抑制物,CCK-8试剂盒检测细胞的增殖,westem blot检测其潜在靶点基因SIRT1的表达.结果 癌组织中miR-204的表达量为(2.12±1.17),明显低于癌旁组织中的(3.08±1.46),P＜0.01.miR-204的表达水平与肿瘤的临床分期以及肿瘤大小有关(均P＜0.05),但与患者年龄、性别、吸烟史、分化程度、组织类型及淋巴转移情况无关(P＞0.05).A549细胞转染miR-204的抑制物后,细胞的增殖明显增强,SIRT1的表达上调;而转染miR-204模拟物则呈反向变化.结论 miR-204在NSCLC组织中呈低表达,并与患者的临床分期以及肿瘤大小有相关,其可能是通过靶向调控SIRT1而在NSCLC的发生发展中起重要作用.     

兴化湾环境因子与叶绿素a之间的相关性分析

2008年春、秋季对兴化湾的8个站位点进行6次常规要素监测,利用SPSS 18.0数据统计分析软件,从理化环境因子、营养盐因子2个方面分别对叶绿素a进行了相关性分析,同时分析了叶绿素a的时空分布特征。结果显示,兴化湾叶绿素a含量有明显的季节性差异,春、秋季节的叶绿素a含量与理化环境因子中的温度呈显著正相关,与溶解氧、pH值呈显著负相关,与化学需氧量的相关性不明显;与营养盐因子中的氨氮呈显著正相关,与硝酸盐、亚硝酸盐以及活性磷酸盐相关性不明显。兴化湾海域叶绿素a的含量受多个环境因子协同作用的影响。     

青海湖总磷、水温及矿化度与叶绿素a相关性分析

以青海湖水体11个样点为研究对象,测定水中叶绿素a含量,并对其分布特征及相关性进行分析.用叶绿素a来表征藻类,采用回归分析方法,对青海湖水中总磷、水温及矿化度与叶绿素a的关系进行探讨.结果表明:5月叶绿素a含量为0.396～4.031 mg·L-1,均值1.387 mg·L-1;7月叶绿素a含量为0.129-0.865 mg·L-1,均值0.432 mg· L-1;9月叶绿素a含量为0.164～1.360 mg·L-1,均值0.665 mg· L-1.5月至9月湖水总磷平均含量从0.124 mg· L-1持续下降到0.061 mg·L-1,藻类生长对总磷的需求大于外源输入和内源转化的总量,磷是青海湖藻类生长繁殖限制性营养元素之一,水温是春季限制藻类生长的主要因素.目前青海湖湖水矿化度在藻类生长的适宜范围内.     

调节猪Smad3 表达的miRNA 鉴定

生物信息学预测猪Smad3为miR-23a的靶基因,为了研究猪Smad3与miR-23a之间的调节关系,人工合成miR-23a双链序列及Smad3基因3'UTR中mR-23a的结合位点序列,分别与带荧光的慢病毒质粒pshRNA-copGFP Lentivector及萤光素酶质粒pPGL3-control连接,构建重组质粒LV-shRNA-miR-23a和pPGL3-control-Smad3-3'UTR.将两重组质粒共转CHO细胞,以慢病毒空质粒与pPGL3-control-Smad3-3'UTR共转作为对照,48 h后收集细胞裂解液检测荧光素酶活性变化,提取细胞总RNA实时荧光定量检测荧光素酶基因mRNA表达变化.结果显示,试验成功构建了重组质粒LV-shRNA-miR-23a和pPGL3-control-Smad3-3'UTR.miR-23a能够显著抑制荧光素酶基因mRNA表达(P＜0.05),并能通过抑制Smad3结合位点序列抑制其上游荧光素酶的活性(P＜0.05).初步证明,猪Smad3与miR-23a有直接的靶向关系.     

miR-31基因家族的分子进化与靶基因预测

 运用生物信息学方法从miRBase数据库中搜索动物物种miR-31基因家族成员的成熟序列,分析其分子进化特征并预测作用靶基因。结果表明,在49个动物物种中获得63条miR-31基因同源序列;miR-31家族成员大部分位于基因间隔区,少数位于内含子区;miR-31不仅存在于常染色体上,而且部分位于性染色体上。miR-31成熟序列长度在21-24 nt之间,序列同源性较高,部分位点在进化过程中发生了碱基突变和缺失。系统进化树显示,miR-31家族成员可分为2个分支。预测到哺乳动物miR-31拥有20个共同候选靶基因,与细胞生长发育、新陈代谢、信号转导、跨膜运输以及转录调控等过程密切相关。研究结果为深入理解miR-31基因家族的生物学功能奠定基础,也为后续研究提供理论依据。     

HMGCS1基因对猪肌肉生长发育的影响及 miRNA-18a/b对HMGCS1基因的调控

【目的】研究HMGCS1基因对猪骨骼肌生长发育的影响及其靶标的验证。【方法】采用real-time PCR对通城猪不同组织以及背最长肌不同发育时间点的HMGCS1基因的表达变化进行检测。【结果】①HMGCS1基因在成年猪肺组织中的表达量最高;②在背最长肌发育中,该基因分别在胚胎期33 和65 d高表达,出生后20、30、40和60 d低表达;③双荧光素酶试验显示,转染miR-18a/b minics组荧光素酶活性低于对照组。【结论】HMGCS1参与了猪骨骼肌生长发育过程,并受miR-18a/b的调控,是猪的产肉性状的潜在候选基因。     

卷烟烟气焦油释放量与B(a)P含量的相关性分析

[目的]研究探讨卷烟烟气焦油释放量与B（a）P含量的相关性。[方法]测定11种不同品牌卷烟烟气的焦油释放量和B（a）P含量,并测定3种品牌卷烟中各个不同规格卷烟的焦油释放量和B（a）P含量。[结果]卷烟烟气中焦油量为10.05-17.83 mg/支,烟气中B（a）P含量为6.32-13.34 ng/支。[结论]3种品牌中不同规格卷烟之间烟气焦油释放量与B（a）P含量不存在明显的相关性,11种不同品牌卷烟之间B（a）P含量随烟气焦油释放量变化而变化,存在一定的趋势性,但两者并不存在明显的相关性。