芥子碱和硫酸铜对芥子碱降解菌酶活力的影响

【目的】本试验通过研究芥子碱、硫酸铜以及培养时间对芥子碱降解菌1(Sinapine-degrading Bacteria 1, SDB1)相关酶活力的影响,旨在探索SDB1中参与芥子碱降解的酶类以及影响酶活的因素。【方法】把30个SDB1的基础平板培养基平均分成1个对照组和4个处理组,每组6个重复。对照组除基础培养基外不再添加其他成分;处理1组和处理2组分别在基础培养基中添加0.40和0.80 g/L的芥子碱;处理3组和处理4组分别在基础培养基中添加1.00和3.00 mmol/L的硫酸铜。收集培养液,测定培养2、4、6、8 d后菌液中淀粉酶、多酚氧化酶、β-葡萄糖苷酶、漆酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的活力。【结果】①从对照组的结果看,SDB1具有一定的淀粉酶活性。与对照组相比,添加0.40 g/L芥子碱培养8 d,SDB1淀粉酶的活力是对照组的2.32倍(P0.05),添加0.80 g/L芥子碱对SDB1淀粉酶活力没有显著影响。②SDB1具有多酚氧化酶活性。添加0.80 g/L芥子碱,多酚氧化酶活性在培养的第2和4天,分别比对照组增加了75.70%(P0.01)和197.03%(P0.01)。③SDB1具有较高的漆酶活性,且漆酶活性有随培养时间延长而增加的趋势。芥子碱可以提高SDB1的漆酶活力。添加0.40和0.80 g/L的芥子碱均可以提高SDB1漆酶活力,其中添加0.40 g/L的芥子碱培养4 d,SDB1漆酶活力是对照组的6.25倍(P0.01);添加0.80 g/L的芥子碱培养4、6和8 d,漆酶活力分别为对照组的5.92(P0.01)、3.03(P0.01)和5.70倍(P0.05)。④SDB1不具有β-葡萄糖苷酶活性,添加芥子碱对SDB1β-葡萄糖苷酶活力也没有显著影响。⑤SDB1具有一定的乙酰胆碱酯酶活性。与对照组相比,添加0.80 g/L芥子碱培养6 d,SDB1的乙酰胆碱酯酶活性显著降低(P0.05),添加0.4 g/L芥子碱对SDB1乙酰胆碱酯酶活性没有显著影响。⑥SDB1具有一定的脂肪酶活性。添加0.40、0.80 g/L的芥子碱对SDB1脂肪酶活性没有显著影响。⑦添加1.00和3.00 mmol/L的硫酸铜对SDB1淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶活力均没有显著影响。(结论)本试验条件下,SDB1具有淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶的活性,不具有β-葡萄糖苷酶的活性。在培养基中添加芥子碱,可以在培养的4～8 d内不同程度的提高SDB1淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶活性;添加芥子碱对SDB1的β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、脂肪酶活性没有显著影响;添加硫酸铜对SDB1的淀粉酶、多酚氧化酶、漆酶、β-葡萄糖苷酶、乙酰胆碱酯酶和脂肪酶活性均没有显著影响。     

外源添加皂苷对斑玉蕈生长发育的影响

研究了外源添加皂苷对斑玉蕈生长发育的影响。结果表明:外源添加皂苷显著抑制了斑玉蕈菌丝的生长,并对菌落形态有所影响;显著增加了培养60 d的菌丝子实体的产量和数量,但对培养85 d的菌丝子实体影响不明显。当皂苷质量浓度为0.01 g/L和0.05 g/L时,培养60 d的菌丝子实体产量比未添加的85 d对照组高。外源添加皂苷后,斑玉蕈胞外纤维素酶和β-葡萄糖苷酶活性均呈现先降低后升高的趋势。     

酒酒球菌β-葡萄糖苷酶产酶条件优化及酶学性质研究

【目的】优化酒酒球菌中β-葡萄糖苷酶的产酶条件,分析β-葡萄糖苷酶的性质,为将其应用于葡萄酒生产提供参考。【方法】对12株酒酒球菌进行β-葡萄糖苷酶活性测定,选择其中β-葡萄糖苷酶活性最高的菌株CS-7b作为试验菌株,并以商业菌株31-DH为对照,以菌株催化底物对硝基苯酚-β-葡萄糖苷(p-NPG)生成对硝基苯酚的速度衡量β-葡萄糖苷酶活性高低。然后通过单因素试验和正交试验对菌株产β-葡萄糖苷酶的条件进行优化,并探究葡萄酒环境相关因素(pH值、温度、乙醇体积分数、葡萄糖质量浓度)对β-葡萄糖苷酶活性的影响。【结果】单因素试验确定菌株产β-葡萄糖苷酶培养基的最佳pH值为6.8,最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为酵母浸粉,正交试验进一步确定了各种成分的最佳配比,即每升液体培养基中含麦芽糖7g,酵母浸粉20g,MgSO_4·7H_2O 0.1g,盐酸半胱氨酸0.5g,MnSO_4·4H_2O 0.03g,培养基起始pH值为6.8,在此条件下,β-葡萄糖苷酶活性可由0.359增加到1.319μmol/(g·min)。β-葡萄糖苷酶的酶学性质为:最适pH值为5.0,最适温度为37℃;当乙醇体积分数大于4%、葡萄糖质量浓度大于1g/L时,β-葡萄糖苷酶活性开始受到抑制。【结论】酒酒球菌CS-7b在葡萄酒环境的pH及乙醇体积分数条件下仍可保持一定的β-葡萄糖苷酶活性。     

红枣汁乳酸菌发酵生产γ-氨基丁酸的研究

以红枣汁作为发酵对象,旨在生产富含γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)功能性成分的乳酸菌饮品。通过对5种乳酸菌进行筛选,探究谷氨酸钠(sodium glutamate,MSG)、氮源、可溶性固形物、MgSO_4、KH_2PO_4单因素添加量对GABA质量浓度的影响,采用响应面法对各单因素添加量进行优化,以提高GABA产量,并分析红枣汁发酵前后主要指标。结果表明,添加5 g/L MSG、11 g/L氮源、可溶性固形物20%、0.4 g/L MgSO_4、15 g/L KH_2PO_4时,GABA产量为412.54μg/mL;发酵后的红枣汁中总酸质量浓度上升至20.63 g/L,还原糖质量浓度下降至69.82 g/L,总酚在60 h时最大值为3181.64 mg/L,氨基酸含量明显增加。     

一株野生古巴栓孔菌生物学特性的研究

采用单因素和正交试验法,研究野生古巴栓孔菌(Trametes cubensis)菌丝的最佳培养条件.单因素试验结果表明,古巴栓孔菌菌丝的最适碳源、氮源分别为葡萄糖、酵母浸粉,碳源、氮源的最适添加量分别为5 g/L,3 g/L,最适培养温度为35℃,培养基初始pH对古巴栓孔菌菌丝的生长影响不显著.正交试验结果表明,影响古...     

茯苓液体培养条件的优化

以茯苓菌丝生物量和三萜含量为指标,研究在普通液体培养基中添加松木酶解液对茯苓生长的影响。通过单因素试验确定了松木酶解液制备的最佳工艺条件。结果表明,固液比1:20,浸提温度50℃,浸提时间24h,纤维素酶添加量为310u/g,在该条件下得到的松木酶解液作为液体培养基成分培养的茯苓,菌丝干重为6.104g/L,三萜含量为24.37μg/5g。     

钾元素对苹果树腐烂病菌生长发育的影响

本研究在室内测试了不同浓度钾元素对苹果树腐烂病菌生长速率、菌丝形态、菌丝干重、分生孢子萌发及致病力的影响,旨在为寻找更有效的抗腐烂病菌靶标提供理论基础。在基础培养基PDA和PDB中分别添加不同量KCl粉剂,配制成含不同浓度钾的培养基,通过生长速率法、菌丝干重法、孢子萌发法和伤口接种法研究钾元素对腐烂病菌的影响。结果表明：纯钾浓度低于9.04 g/L时能促进腐烂病菌菌丝生长,当浓度高于9.04g/L时则抑制菌丝生长,同时,该浓度下的分生孢子孢子萌发率也出现显著下降。当纯钾浓度达到12.82 g/L时,腐烂病菌菌丝生长、孢子萌发和致病性都受到显著抑制;从19.16 g/L高浓度钾处理菌株接种的病果上分离获得的腐烂病菌菌株KVm470,其致病力与野生型Vm470相比显著下降。因此,树体中保持合理浓度的钾含量除了提高树体抗病性之外,还能够显著抑制腐烂病菌的侵染和扩展,而且,钾元素对腐烂病菌致病力的影响具有一定程度的可遗传性。     

茶薪菇锌-金银花藤培养基的筛选

在PDA培养基的基础上添加金银花藤制成基本培养基,通过添加不同浓度ZnSO4来筛选适宜的茶薪菇母种培养基.结果表明:ZnSO4浓度为100mg/L时对茶薪菇菌丝生长最有利,过高浓度的ZnSO4抑制菌丝生长.     

1种野生多孔菌的分离鉴定及其高产漆酶培养基的筛选

对内蒙古自治区锡林郭勒盟境内的1种野生多孔菌进行分子鉴定。通过组织分离的方法对该菌种进行分离培养,并选取常用的4种固体培养基进行最佳固体培养基配方的筛选;以漆酶活性为评价指标,筛选高产漆酶的液体培养基。结果表明,该种野生多孔菌为硬毛粗盖孔菌(Coriolopsis trogii)。固体培养基D(葡萄糖20 g、蛋白胨5 g、酵母浸膏10 g、KH2PO42 g、MgSO41 g、琼脂20 g,加水至1 000 mL,自然pH值)为该种多孔菌的最佳固体培养配方,在该培养基上培养的该种野生多孔菌菌丝长势良好,菌丝干质量为0.132 g; 2号液体培养基(马铃薯切片200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨2 g、酵母浸膏2 g、KH2PO43 g、MgSO41.5 g,加水至1 000 mL,自然pH值)为该种多孔菌发酵产漆酶的最佳液体培养配方,在该培养基上培养的该种野生多孔菌菌丝生物量为8.56 g/L,漆酶活性可达907.34 U/L。     

添加物对木耳液体菌种老化的影响

以黑木耳品种‘黑威15’为试验材料,研究营养物质对木耳液体菌种生长及老化的影响,筛选抗老化及易老化培养基,研究其抗氧化酶活性、底物降解酶活性、抗氧化物质及膜质过氧化程度变化规律。结果表明,①与对照组相比,添加磷酸二氢钾及VB1可延缓菌丝老化,且促进菌丝生长。添加硫酸镁对菌丝老化有缓解作用,但抑制菌丝生长。添加过量氮源可促进菌丝生长且加速菌丝老化。②与对照及易老化培养基相比,抗老化培养基中菌丝总蛋白含量、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶、淀粉酶活性显著提高。表明活性氧自由基清除系统相关酶活性的提高对延缓菌丝老化具有重要作用。③SOD活性随菌龄增加而逐渐减小,与菌龄呈显著负相关。在抗老化培养基中,丙二醛含量随菌龄增加而降低,两者间呈显著负相关。在对照及易老化培养基中,MDA含量随菌龄增加呈上升趋势,两者间呈显著正相关。研究对分析木耳菌丝老化机制及解决液体菌种老化问题具有理论价值。     

不同营养条件对花脸香蘑菌丝生长的影响

研究花脸香蘑(Lepista sordida)菌丝平板培养最佳碳源、氮源和无机盐,得到优化配方。以花脸香蘑菌丝生长速度为指标,通过平板培养研究9种碳源、8种氮源及6种无机盐对花脸香蘑菌丝生长的影响,并用三元二次正交回归试验对花脸香蘑的培养基配方进行优化。结果表明,促进花脸香蘑菌丝生长的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为麸皮,最佳无机盐为MgSO_4,培养7 d后菌丝生长速率分别为2.29、1.88、1.64 mm/d;优化后的培养基配方为:马铃薯20%、琼脂2%、蔗糖3.06%、麸皮0.45%、MgSO_4 0.02%。培养基中添加蔗糖、麸皮和MgSO_4可促进花脸香蘑菌丝生长,并得到优化后的培养配方,为下一步研究提供了基础。     

番茄ZF遗传转化再生体系的研究

番茄 ZF无菌苗出芽后 5～ 7d,子叶切成 0 .5 cm× 0 .5 cm小块 ,下胚轴切成 1cm的小段作为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,玉米素 1.0 mg/ L,6 -苄基腺嘌呤 1.0 m g/ L 分别与吲哚乙酸 0 .0 5 ,0 .2 ,0 .5和 1.0 mg/ L配成 7个激素组合 ,经诱芽比较 ,确定 MS+BA1.0 m g/ L+IAA0 .2 mg/ L 为最佳生芽培养基 ,MS添加吲哚乙酸0 .0 ,0 .0 5 ,0 .1和 0 .2 mg/ L 进行生根比较 ,确定 MS+IAA0 .0 5 mg/ L 为最佳生根培养基。卡那霉素 (Kan)临界浓度确定为 2 5 mg/ L。转化培养过程为 :外植体于生芽培养基 2 6℃ ,2 6 0 0 lx光下预培养 2 4 h。农杆菌 L BA4 4 0 4过夜培养 ,用 MS培养液稀释 10～ 2 0倍 ,侵染外植体 5 m in,2 8℃黑暗共培养 4 8h。然后在 MS+BA1.0 mg/ L+IAA0 .2 m g/ L+Kan2 5 mg/ L+Cef2 0 0 mg/ L 筛选培养基上诱芽 ,每 14 d转接 1次。芽长至 2 cm时 ,切下转至 MS+IAA0 .0 5 mg/ L+Kan2 5 m g/ L+Cef10 0 m g/ L 培养基上生根。     

大球盖菇液体发酵产漆酶条件的优化

拟探讨培养条件对大球盖菇液体发酵产漆酶的影响,为大球盖菇漆酶的应用提供理论依据和技术指导。以ABTS[2,2-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)]为底物,用分光光度法测定漆酶活性。采用单因素试验研究培养条件对漆酶活性的影响,采用正交试验对各影响因素进行优化。结果表明,大球盖菇液体发酵产漆酶的培养基最佳配方为25 g/L可溶性淀粉、2. 5 g/L蛋白胨、1. 5 g/L MgSO4,其中可溶性淀粉和蛋白胨用量为显著影响因素。最佳发酵条件为pH值5. 5、250 mL三角瓶装液量60 mL、接种量5%、温度28℃、转速140 r/min。在最佳发酵条件下,发酵培养7 d后酶活性可达18. 103 U/mL。由结果可知,大球盖菇在发酵条件优化后具有较高的产漆酶能力。     

Na2SeO3和ZnSO4浓度对大球盖菇富集液体培养的影响

为开发同时富含人体必需微量元素硒和锌的新膳食补充剂,本论文在实验室现有大球盖菇菌丝液体培养基（200 g/L 土豆,20 g/L 葡萄糖,4 g/L酵母浸粉, 2 g/L磷酸二氢钾,1 g/L硫酸镁,0.05 g/L 维生素 B1）基础上,添加不同浓度配比的Na2SeO3和ZnSO4对大球盖菇菌丝进行富硒、富锌及硒锌同富液体培养,测定了富集液体培养的大球盖菇菌丝干重、多糖产量、可溶性蛋白产量和有机硒锌产量,探究了Na2SeO3和ZnSO4浓度对大球盖菇富集液体培养的影响规律。试验结果表明大球盖菇菌丝硒锌同富液体培养的最佳硒锌浓度配比为Na2SeO3 20 mg/L、ZnSO4 50 mg/L。在此浓度配比下,大球盖菇菌丝干重比对照组高96.12%,有机硒产量比对照组高237.29倍,有机锌产量比对照组高4.22倍,多糖产量比对照组高63.64%,可溶性蛋白比对照组高78.16%,Na2SeO3利用率比Na2SeO3浓度为20 mg/L富硒液体培养处理组高30.12%,ZnSO4利用率比ZnSO4浓度为50 mg/L富锌液体培养处理组高0.47%。说明在适宜的硒锌浓度配比下,硒锌同富液体培养可以显著提高大球盖菇菌丝产量、菌丝活性物质产量和生物转化率。     

尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型原生质体制备优化及再生性能

唐菖蒲(Gladiolus hybridus Hort)根腐病是由尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型(Fusarium oxysporum f.sp.Gladioli)引起的真菌性病害。原生质体是研究尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型与唐菖蒲之间的互作关系的重要工具,试验以尖孢镰刀菌唐菖蒲专化型为供试菌株,进行原生质体制备条件的优化与再生,明确培养基、菌龄、β-巯基乙醇预处理、酶选择以及酶解时间对原生质体产生的影响。试验结果表明:在PDB培养基中原生质体制备的最优条件为15μLβ-巯基乙醇预处理1 h,在5%崩溃酶溶液酶解3 h。在此条件下,12~14 h菌丝的原生质体产量可达到1.4×107个/m L,再生率为57.4%。     

外源添加物对西葫芦胚状体诱导效果研究

以6个基因型的西葫芦未授粉子房为试材,于MS培养基中分别添加不同质量浓度6-BA(1.0,1.5,2.0mg/L)和TDZ(0.04,0.05,0.06mg/L),筛选最适培养基与出胚材料;获得最适培养基后再分别添加不同质量浓度的NAA,AgNO3或相同质量浓度(20mg/L)秋水仙碱不同时间培养,分析其对西葫芦未授粉子房胚状体诱导的效果。结果表明:1西葫芦未授粉子房在培养基(P5)MS+30g/L Suc.+8g/L Agar+0.05mg/L TDZ上胚状体诱导效果最好,XH13-7为出胚率最高材料;2在P5培养基中添加0.25 mg/L NAA有利于出胚并可适当降低玻璃化率,胚状体诱导率高达10.53%;3添加20mg/L AgNO3显著减少胚状体玻璃化,对出胚影响不明显,玻璃化率仅为11.63%;4添加20mg/L秋水仙碱抑制胚状体发生。     

黑曲霉液体发酵产α-半乳糖苷酶发酵条件优化

[目的]优化黑曲霉液体发酵产α-半乳糖苷酶的发酵条件。[方法]采用单因素试验和正交试验相结合的方法优化了黑曲霉液体发酵产α-半乳糖苷酶的发酵条件。[结果]单因素试验结果表明,以蔗糖为碳源的黑曲霉生长最好,所产酶的活力最高,最佳碳源浓度为15g/L;蛋白胨浓度为15g/L时黑曲霉干重最大,蛋白胨浓度为10g／L时所产酶的活力最高;pH值为5时黑曲霉的生物量最大,pH值为4时所产酶的活力最高;培养温度为30℃时,所产酶的活力最高。最佳培养基组成为葡萄糖20g／L＋蛋白胨5g/L＋MgSO4 0．05g/L＋KC10．5g/L＋K,HPO4 1g/L＋FeSO4 0．5g/L。当pH值为5,发酵温度为25℃,孢子接种量为10^6cfu/ml,发酵时间为96h时,培养基上黑曲霉产α-半乳糖苷酶的活力最高,达到（3．250±0．035）U／ml。[结论]该试验为仪一半乳糖苷酶的工业化生产提供了参考依据。     

烟草疫霉分离及生长培养基的选择

采用不同的基本培养基添加抗生素组合对烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)进行分离培养.结果表明,以V8培养基(100 mL/L Vs汁+0.02 g/L CaCO3+2 g/L洋菜)为基本培养基附加10 mg/mL氨苄青霉素+5 mg/mL制霉素+5 mg/mL多菌灵的选择培养基分离烟草疫霉的效果较好,分离成功率达100％,菌丝的生长状态也较好.菌丝分离后在V8基本培养基中培养,菌丝紧密、浓白、粗壮,菌落大、长势旺.     

Na_2SeO_3和ZnSO_4对大球盖菇富集液体培养的影响

为开发同时富含人体必需微量元素硒和锌的新膳食补充剂,在实验室现有大球盖菇菌丝液体培养基(土豆200 g/L,葡萄糖20 g/L,酵母浸粉4 g/L,磷酸二氢钾2 g/L,硫酸镁1 g/L,维生素B10.05 g/L)基础上,添加不同浓度的Na_2SeO_3和ZnSO_4对大球盖菇菌丝进行富硒、富锌及硒锌同富液体培养,测定了富集液体培养的大球盖菇菌丝干重、多糖产量、可溶性蛋白产量和有机硒锌产量,探究了Na_2SeO_3和ZnSO_4对大球盖菇富集液体培养的影响。试验结果表明:大球盖菇菌丝硒锌同富液体培养的最佳硒锌浓度为Na_2SeO_320 mg/L、ZnSO_450 mg/L。在此条件下,大球盖菇菌丝干重比对照高96.12%,有机硒产量比对照高237.29倍,有机锌产量比对照高4.22倍,多糖产量比对照高63.64%,可溶性蛋白比对照高78.16%,Na_2SeO_3利用率比Na_2SeO_3浓度为20 mg/L富硒液体培养处理组高30.12%,ZnSO_4利用率比ZnSO_4浓度为50 mg/L富锌液体培养处理组高0.47%。这说明适宜浓度的硒、锌同富液体培养可以显著提高大球盖菇菌丝产量、菌丝活性物质产量和生物转化率。     

白腐菌(Trametes pubescens MB89)漆酶的培养与纯化

【目的】通过培养白腐菌Trametes pubescens提取胞外漆酶。【方法】以白腐菌T.pubescensMB89为漆酶培养菌,在25℃120 r/min条件下用基础GP液体培养基(300 mL培养基中含40 g/L丙三醇、15 g/L蛋白胨和1 g/LMgSO4.7 H2O)进行胞外漆酶的震荡培养,培养10 d后,添加CuSO4.5 H2O使培养基中Cu2+的最终浓度达1 mmol/L。定时测定漆酶活力,于漆酶活力开始下降时终止培养。将菌体破碎、离心后,用DEAE-Ssepharose对获得的漆酶进行分离和纯化。【结果】在以葡萄糖为碳源的培养基中添加一定浓度的Cu2+,可促进菌体的生长和漆酶活力的增加。培养前10 d,漆酶活力增加缓慢,培养10 d后添加CuSO4.5 H2O,漆酶活力快速增加,并于培养的第19天达到最大,为51.70 U/mL。用超滤方法分离纯化漆酶,可使漆酶纯度达53%。【结论】T.pubescensMB89可作为生产漆酶的菌种,在漆酶培养过程中,Cu2+对漆酶活力的增加有促进作用。