钙信号对小鼠脂肪组织中GPR120基因转录及脂肪生成的影响

【目的】探讨钙信号对小鼠脂肪组织中GPR120基因转录及脂肪生成的影响。【方法】用外源性葡萄糖酸钙和二氢吡啶钙离子通道的阻滞剂Nifedipine处理小鼠30 d,记录小鼠体质量的变化,测定小鼠皮下脂肪、附睾脂肪和肾周脂肪的沉积量,检测血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度,同时利用Real-ti me PCR法分析GPR120基因及与脂肪生成密切相关的转录因子PPARγ、C/EBPα和脂解基因HSL、生脂基因FASmRNA的表达情况,用SPSS软件分析小鼠附睾脂肪中GPR120与脂代谢相关基因表达的相关性。【结果】葡萄糖酸钙可延缓小鼠体质量的增加,减少体脂含量(P0.01),并使小鼠血清中的TG、TC和LDL-C浓度极显著降低(P0.01),HDL-C浓度显著升高(P0.05),可导致GPR120、PPARγ、C/EBPα和FAS的mRNA表达水平降低,且分别达到极显著(P0.01)或显著(P0.05)水平,并可使HSLmRNA表达水平极显著升高(P0.01);Nifedipine处理能使小鼠体质量增加(P0.05),促进体脂沉积(P0.01),并使小鼠血清中的TG和TC浓度显著升高(分别为P0.05和P0.01),GPR120、PPARγ、C/EBPα和FAS的mRNA表达水平极显著升高(P0.01),但却使HSLmRNA的表达水平极显著降低(P0.01)。相关性分析表明,GPR120 mRNA的表达水平与PPARγ、FAS和C/EBPα间呈显著正相关。【结论】钙信号在GPR120调节小鼠脂肪生成的过程中可能起到负调控作用。     

成熟脂肪细胞中脂联素基因表达的脂肪酸应答调控

用不同种类、不同浓度游离脂肪酸(FFA)处理体外培养的成熟3T3-L1脂肪细胞,实时荧光定量PCR和Western-blotting分析FFA处理前后脂联素基因mRNA和蛋白质水平的表达差异.结果表明:各类脂肪酸埘脂联素mRNA的表达均具有下调作用.且抑制效应呈时间、剂量依赖性;并且各种脂肪酸显著地影响脂联素蛋白的分泌作用.     

奶牛GPR109A基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

[目的]建立奶牛G蛋白偶联受体109A基因(GPR 109A)的实时荧光定量PCR检测方法,为开展奶牛产后脂类代谢紊乱及酮病发生机理研究奠定基础.[方法]根据GenBank中奶牛GPR 109A基因和卢-actin基因(内参基因)的mRNA保守序列设计合成两对引物,以奶牛肝脏组织cDNA为模板,PCR扩增目的基因后与载体连接构建重组质粒,以SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR进行扩增,绘制标准曲线,并对其特异性、敏感性、重复性等进行检验.[结果]GPR109A基因和β-actin基因的实时荧光定量PCR标准曲线方程分别为y=-3.309x+10.92(R2=0.9985)和y=-3.289x+9.794(R2 2=0.9997),扩增效率分别为101.0％和100.0％.特异性试验结果显示,GPR 109A基因和β-actin基因的溶解曲线峰单一,无引物二聚体和非特异性扩增产物生成;敏感性试验结果显示,线性扩增范围广,可检测到1.8×102个拷贝的GPR109A基因;重复性试验结果显示,各扩增反应的变异系数(CV)小于或等于1.7％.[结论]基于GPR109A基因建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有操作简便、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可用于牛源性GPR109A基因表达量的快速检测和定量分析.     

维生素对猪脂肪细胞的影响研究进展

猪脂肪细胞的增殖分化进一步影响脂肪沉积,而维生素可对机体脂肪细胞产生不同的影响。因此,从维生素A、B、C、D、E的结构作用以及对猪脂肪细胞的影响机制等方面概括研究进展。     

不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪合成相关基因转录表达的影响

【目的】诱导3T3-L1细胞分化为3T3-L1脂肪细胞,研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪合成相关基因转录表达的影响。【方法】利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0(对照组)、0.2、0.5、1 μmol/L生物素处理,分别在12 h、24 h与48 h时检测细胞上清液中PK mRNA、GLUT-4 mRNA、FAS mRNA及ACC1 mRNA相对表达量。【结果】在试验12 h时:各试验组GLUT-4、PK、ACC1 mRNA相对表达量均极显著(P＜0.01)高于对照组,1 μmol/L组与0.5 μmol/L组FAS mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组与0.2 μmol/L组;在试验24 h时:1 μmol/L组GLUT-4 mRNA与PK mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组,0.2 μmol/L组与0.5 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组;在试验48 h时:1 μmol/L组GLUT-4 mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L 组PK mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于对照组,0.5 μmol/L组FAS mRNA相对表达量极显著(P＜0.05)高于1 μmol/L组,1 μmol/L组FAS mRNA相对表达量显著(P＜0.05)高于对照组,1 μmol/L组ACC1 mRNA相对表达量极显著(P＜0.01)高于其它组。【结论】生物素的添加可以提升脂肪细胞GLUT-4、PK、FAS与ACC1 mRNA相对表达量,且当以1 μmol/L浓度作用时对GLUT-4、PK与ACC1提升效果最佳,以0.5 μmol/L浓度作用时对FAS提升效果最佳。     

FSTL1基因促进猪前体脂肪细胞分化成脂的机制

【目的】构建猪FSTL1基因过表达载体和RNAi载体,探究FSTL1基因对猪前体脂肪细胞分化成脂的作用及机制。【方法】通过构建FSTL1基因过表达载体和RNAi载体,在猪前体脂肪细胞中过表达、干扰FSTL1基因并诱导其分化,测定细胞中甘油三酯含量以及脂肪细胞分化相关调节基因的m RNA表达量。【结果】成功克隆得到猪FSTL1基因c DNA序列,其开放阅读框全长924 bp,并将序列提交到GenBank,登录号为KF021281。成功构建猪FSTL1基因的过表达载体pcDNA3.1-FSTL1和RNAi载体pSilencer4.1-491以及pSilencer4.1-530。过表达FSTL1基因促进了猪前体脂肪细胞中甘油三酯生成,干扰FSTL1基因抑制了猪前体脂肪细胞中甘油三酯的生成。FSTL1在猪前体脂肪细胞中使PPARγ2和AP2基因表达分别上调了73%和113%,使LPL、 Adiponectin和FASN等基因表达分别下调了44%、79%和16%。【结论】FSTL1基因通过上调PPARγ2和AP2基因,下调LPL、Adiponectin及FASN基因的表达,促进猪前体脂肪细胞的分化,提高猪前体脂肪细胞中甘油三酯的含量。     

槲皮素对肉鸡脂肪细胞环腺苷酸信号通路的作用

【目的】研究槲皮素对肉鸡脂肪细胞甘油三酯沉积过程中环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）信号通路的作用。【方法】将脂肪细胞随机分5组,每组6个重复;空白对照组为基础培养液,溶剂对照组为含2‰二甲基亚砜（DMSO）的培养液,试验组为含10、20和40 mg•L-1槲皮素的培养液,分别于24、48和72 h收集细胞及培养液;ELISA法测定乙酰CoA羧化酶（acetyl CoA carboxylase,ACC）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthase,FAS）、脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase,LPL）、cAMP、腺苷酸环化酶（adenylate cyclase,AC）、磷酸二脂酶（phosphodiesterase,PDE）、蛋白激酶（protein kinase A,PKA）含量;紫外分光光度计测定甘油三酯（triacylglycerides,TG）含量。【结果】与空白对照组相比,①溶剂对照组各指标均无显著差异（P＞0.05）;②20和40 mg•L-1槲皮素组ACC、FAS、LPL、TG和PDE含量显著降低（P＜0.05）,cAMP和PKA含量显著增加（P＜0.05）;③3个槲皮素组AC含量均无显著差异（P＞0.05）。【结论】一定剂量槲皮素可通过调控cAMP信号通路抑制脂肪合成,并减少脂肪沉积。     

L-Gln对大鼠前体脂肪细胞的影响

设置养分贮存损失状态不同的4类培养液,分别添加一定浓度梯度的L-谷氨酰胺(L-G lu tam ine,L-G ln)培养大鼠前体脂肪细胞。通过形态学观察、M TT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态及增殖与分化的效果。结果表明,添加0 mm o l/L L-G ln的新鲜培养液和配制后4℃冷藏20 d,再添加0.685 mm o l/L L-G ln的培养液,均较利于前体脂肪细胞的增殖与分化;配制后4℃冷藏90 d的培养液,对前体脂肪细胞培养效果较差,添加L-G ln也不能使培养效果得到改善。另外,启封后的M 199和胎牛血清(F eta l C a lf Serum,FCS)分别冷藏不宜超过90 d。说明及时满足培养液中L-G ln的需求量,可使前体脂肪细胞达到较好的增殖与分化状态。     

归芪益母复方制剂对产后奶牛血液氧化脂质的调节作用

【目的】探究归芪益母复方制剂对产后奶牛血液氧化脂质的调节作用,以期进一步明确归芪益母复方制剂抗炎和抗氧化的作用机制,为归芪益母复方制剂在产后奶牛保健与疾病防治中的应用提供参考依据。【方法】选取体况相近、2～3胎次的健康待产荷斯坦奶牛15头,将其随机分成对照组（n=7）和试验组（n=8）,试验组奶牛产后灌服归芪益母复方制剂500 mL/头,连续灌服6 d,对照组奶牛每日灌服等体积饮用水。产后7 d晨饲前于尾静脉采集血液,制备血浆样本,采用超高效液相色谱—串联质谱（UPLC-MS/MS）技术定量检测2组奶牛血浆中氧化脂质含量,分析2组奶牛血浆氧化脂质代谢轮廓的变化规律,筛选产后奶牛血液中的差异氧化脂质并进行代谢通路富集分析。【结果】2组奶牛血浆中共鉴定出44种氧化脂质,其中花生四烯酸及其代谢物18个、亚麻酸及其衍生物12个、二十碳五烯酸及其衍生物9个、二十二碳六烯酸及其衍生物4个、二十二碳五烯酸及其衍生物1个。产后7 d,试验组奶牛血浆中8种氧化脂质代谢轮廓较对照组发生显著变化（P<0.05,下同）,其中5种脂质分子显著上调（VIP≥1,FC≥2）,包括12-HETE、11-HETE...     

siRNA干扰ATGL基因表达对猪脂肪细胞脂肪分解的抑制作用

【目的】探讨猪脂肪甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因在脂肪细胞脂解中的作用。【方法】构建针对猪ATGL基因CDS区113和1 358位点的慢病毒干扰载体,包装后用其感染猪成熟脂肪细胞,检测ATGL和激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase,HSL)基因mRNA及其蛋白的表达情况;用甘油试剂盒检测细胞甘油释放量。【结果】成功构建了ATGL基因的慢病毒干扰载体,用其感染猪成熟脂肪细胞后,RT-PCR分析和Western印迹检测结果表明,试验组脂肪细胞ATGL的表达显著下调,HSL的表达没有明显变化;甘油释放量显著降低,其中针对ATGL基因CDS区113位点的siRNA1对ATGL mRNA的干扰效率达55%,甘油释放量降低了49%。【结论】成功构建了猪ATGL基因慢病毒干扰载体,其能显著降低ATGL基因mRNA及其蛋白在猪成熟脂肪细胞中的表达,降低脂肪细胞的甘油释放量,表明ATGL在猪脂肪细胞脂解中有着重要作用,且113位点是ATGL基因CDS区的最佳干扰靶位点。     

农抗120对西瓜枯萎病作用方式的研究

田间试验表明生物杀菌剂农抗１２０对西瓜枯萎病具有一定的防治效果。本文对其防病机理进行了初步研究。室内毒力测定表明：２％农抗１２０水剂对其菌丝生长具有明显的抑制作用，同时还可以抑制小孢子的萌发，ＥＣ５０为２２２．８６μｇ／ｋｇ。用它浸种、灌根或喷雾后可明显促进西瓜幼苗生长，并提高了植物体内过氧化物酶活性和叶绿素含量，从而增加了植株的耐病性。     

玉米霉变对奶牛养殖业危害及应对措施

奶牛饲料原料中霉菌毒素广泛存在,并严重地威胁着奶牛健康,影响着奶牛生产性能的发挥。一般认为反刍动物的瘤胃能把部分的霉菌毒素代谢掉,会比单胃动物更能耐受霉菌毒素。但是研究发现,产奶牛采食过被霉菌毒素污染过的饲料时,也会造成瘤胃代谢紊乱、繁殖率下降（流产率增加）、牛奶中体细胞数量增加和产奶量下降以及乳房炎、蹄病等的发生。     

山羊KLF16对肌内前体脂肪细胞分化的影响

为分析山羊KLF16对肌内前体脂肪细胞分化的调控作用,利用RT-PCR克隆得到山羊KLF16基因序列,利用生物信息学分析山羊KLF16基因序列特征,通过过表达、油红O染色和qPCR等方法从形态学及分子水平分析过表达山羊KLF16后肌内脂肪细胞脂滴积聚及分化标志基因表达水平的变化.结果表明:1)克隆得到包含CDS区的山羊...     

亚麻籽木脂素对初产奶牛体重及乳房外型指数的影响

【目的】研究亚麻籽木脂素对初产奶牛增重及乳房外型指数的影响。【方法】初产荷斯坦奶牛36头随机分为对照组与试验组,对照组饲喂基础日粮,试验组:基础日粮基础+精料(添加亚麻籽木脂素3.75 g/kg),连续饲喂95 d,分析亚麻籽木脂素对初产奶牛增重及乳房外型指数影响的情况。【结果】添加亚麻籽木脂素的试验组奶牛体重与对照组比较差异不显著(P>0.05),平均日增重试验组奶牛极显著高于对照组(P<0.01);试验组奶牛后乳房高度极显著高于对照组(P<0.01),后乳房宽度对照组比较无变化,乳房深度试验组极显著高于对照组(P<0.01),乳头长较对照组无差异,悬韧带较对照组提高了11.11%(P<0.05),乳房直径试验组较对照组提高了49.25%(P<0.01),乳房宽度试验组显著高于对照组(P<0.05)。【结论】亚麻籽木脂素在一定程度上具有促进初产奶牛体重增加以及奶牛乳腺外型增大的作用。     

不同pH和SCFAs对奶牛瘤胃上皮细胞SCFAs转运蛋白和GPR41表达的影响

为研究不同pH和短链脂肪酸(SCFAs)对奶牛瘤胃上皮细胞SCFAs转运蛋白和G-蛋白偶联受体41(GPR41)表达影响,设计6组试验,每组3个重复,培养24h之后,收集细胞提取细胞总RNA。结果表明:在添加SCFAs条件下,pH 6.2、6.8和7.4之间的MCT1表达量差异不显著(P0.05);pH 6.8且添加SCFAs条件下,MCT1的表达量显著高于缺乏SCFAs pH 6.8和7.4试验组(P0.05);pH 6.2的MCT4的表达量显著高于pH 6.8和7.4(P0.01),MCT4的表达量显著高于缺乏SCFAs(P0.01),NHE1、NHE2和NHE3表达量显著高于缺乏SCFAs时的表达量(P0.01);随着pH的降低,NHE1、NHE2和NHE3的表达量逐渐上调,而在缺乏SCFAs条件下,GPR41不表达;在添加SCFAs之后,显著激活了GPR41的表达。研究发现SCFAs能够显著加强奶牛瘤胃上皮细胞SCFAs转运蛋白和GPR41的表达量,从而证明细胞对SCFAs的吸收主要依赖于SCFAs转运蛋白和GPR41。     

六味地黄丸对大鼠脂肪细胞生长的影响

〔摘要〕目的探讨六味地黄丸对正常大鼠脂肪细胞生长的影响〔方法将}s只雄性SD大鼠,随机分成3组,即 普通饲料组(正常组)、高脂饲料组(对照组)、六味地黄丸组(实验组),每组2s只、分别于实验的第4周和第8周从每 组中随机取10只大鼠进行麻醉,测量腹围,取脂肪组织等处理,将脂肪组织作细胞形态学观察〔结果六味地黄丸能显 著增加大鼠腹腔脂肪含量,减少单位视野所见的脂肪细胞个数,增加单位视野中脂肪细胞的面积,与正常组及对照组 比较,差异有统计学意义(P相似文献   

浅谈夏季高温奶牛高产的应对措施

我国目前饲养的奶牛主要是耐寒怕热体质,如荷斯坦奶牛。他们适宜的生产温度在5~25℃,最适宜的温度为10~16℃。夏季气温高,空气湿度大,极易造成奶牛产奶量下降,乳中脂肪以及非脂固形物达到最低,直接导致奶牛养殖减效。如何缓解奶牛热应激,保证奶牛稳定高产,已经成为畜牧工作者亟待解决的问题。奶牛品种选育是创造高产奶牛的前提,饲养管理技术是发挥奶牛生产力的关键。     

奶牛酮尿病的防治

奶牛的酮尿病是由于碳水化合物和脂肪代谢紊乱、血中聚集大量酮体而引发,也叫奶牛醋酸血病和酮病,多见于冬春季的舍饲期,特别是饲喂精料多,营养良好的高产奶牛多发。     

浅谈奶牛酮症的治疗

<正>奶牛酮病又称酮血症、酮尿病,是碳水化合物和脂肪代谢紊乱所引起的一种全身功能失调的疾病。其病的特征是酮血、酮尿、酮乳,出现低血糖、消化机能紊乱,乳产量下降,间     

生态环境对奶牛养殖的影响

长久以来,奶牛养殖一直与生态环境有着重要的联系。随着奶牛养殖规模的不断壮大,其造成的环境影响也日益加剧。在面临现今人们对绿色健康生态环境需求的情况下,寻求科学化奶牛养殖技术,对奶牛养殖与生态环境的互利发展有着重要的意义。