脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响

[目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL~(-1))处理24 h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR分析凋亡与自噬相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、P62和Atg7 mRNA表达,Western blot技术检测凋亡与自噬相关蛋白表达情况。[结果]与对照组相比,Chemerin处理卵巢颗粒细胞后,细胞中ROS和MDA含量显著上升(P0.05),SOD和GSH-px活性极显著降低(P0.01)。凋亡相关基因Bax和Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著升高,P62和Atg7 mRNA等的表达也显著上调(P0.05)。[结论]Chemerin可通过调控相关基因的表达诱导牛卵巢颗粒细胞凋亡并伴随自噬的发生。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导PC12细胞凋亡及对相关基因Bcl-2、Bax、Bid mRNA和蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9表达水平的影响。[方法]用不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·m L~(-1))对PC12细胞染毒24 h,采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量PCR、Western-blot等方法,研究DON对PC12细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。[结果]不同浓度的DON均可诱导细胞凋亡,各试验组细胞凋亡率均极显著高于对照组(P0.01),并随着染毒剂量的增加而升高,在1 000 ng·m L~(-1)时达到峰值;与对照组相比,各试验组Bax mRNA表达水平和Bax/Bcl-2值均极显著增加(P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01),而Bid mRNA表达水平在DON浓度超过250 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01);Western-blot检测结果显示,各试验组cleaved-Caspase 9蛋白表达量均极显著高于对照组(P0.01),而cleaved-Caspase 3蛋白表达量在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著增加。[结论]DON能够诱导PC12细胞发生凋亡,凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid及蛋白Caspase3、Caspase9等参与了DON诱导PC12细胞凋亡的调控。     

β-伴大豆球蛋白通过p38/JNK MAPK信号通路引起IPEC-J2细胞损伤

采用细胞体外培养技术,研究不同浓度7S(β-伴大豆球蛋白)对IPEC-J2(猪小肠上皮细胞)的影响。实验分为6组,A(对照组)、B(1 mg·m L~(-1)7S)、C(5 mg·m L~(-1)7S)、D(10 mg·m L~(-1)7S)、E(5 mg·m L~(-1)7S+1μmol·L~(-1)SP600125)、F(5 mg·m L~(-1)7S+1μmol·L~(-1)SB202190),24 h后,用CCK-8法检测细胞存活率,收集细胞用ELISA法检测NO、5-HT、IL-6和IL~(-1)0含量,用Western blot法检测p-JNK、p-p38、Bcl-2蛋白表达量,用PCR法检测Bad、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和Caspase-3 m RNA相对表达量。检测结果表明:C组和D组的IPEC-J2细胞活性极显著降低(P 0. 01),E组和F组的细胞活性显著高于C组(P 0. 05),说明7S促进炎性细胞因子NO、5-HT和IL-6的分泌,降低IL~(-1)0的分泌,添加抑制剂使细胞因子NO、5-HT和IL-6分泌减少,IL~(-1)0的分泌增多;同时7S促进p-JNK、p-p38蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达,添加抑制剂可抑制p-JNK、p-p38蛋白表达,使Bcl-2蛋白表达增高。Bcl-2/Bax m RNA比值随7S浓度增加而降低,Bax/Bcl-xl比值随7S浓度增加而升高,Caspase-3 m RNA相对表达量随7S浓度增加而升高。添加抑制剂后Bcl-2/Bax比值增高,Bax/Bcl-xl比值降低,Caspase-3 m RNA降低。结果表明,7S通过p38/JNK MAPK信号通路引起仔猪肠上皮细胞损伤。     

谷氨酰胺对高温应激奶牛乳腺上皮细胞凋亡及Bcl-2、HSP70表达的影响

为探讨谷氨酰胺预处理抗高温应激损伤的作用,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的奶牛乳腺上皮细胞,分为对照组、谷氨酰胺组、高温组、谷氨酰胺+高温组,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡、荧光定量PCR检测Bcl-2基因和HSP70基因的表达水平、比色法分析Caspase-3活性。结果显示,奶牛乳腺上皮细胞经谷氨酰胺预处理后,HSP70 mRNA表达量极显著增加(P 0. 01),提高了热应激状态下细胞的热耐受性和存活力;与高温组相比,谷氨酰胺+高温处理组Bcl-2 mRNA表达量在热恢复0、6、12 h分别提高3. 23倍(P 0. 05)、2. 49倍(P 0. 05)、1. 89倍(P 0. 05),Caspase-3活性分别下降68. 04%(P 0. 01)、40. 89%(P 0. 05)、52. 06%(P 0. 01)。综上,谷氨酰胺预处理促进了奶牛乳腺上皮细胞Bcl-2和HSP70表达,缓解了高温应激引起的Caspase-3活性上升,抑制了热应激所致的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。     

小花棘豆中毒对和田羊卵巢损伤的研究

以小花棘豆(Oxytropis glabra DC)中毒和田羊母羊为研究对象,通过复制和田羊小花棘豆亚慢性中毒模型,对其卵巢的病理变化和超微结构变化进行观察,检测其氧化应激和细胞凋亡情况,Real-Time q PCR法检测繁殖基因mRNA的表达量,Western Blot检测其蛋白表达量。结果发现,小花棘豆中毒和田羊卵巢指数极显著升高(P0.01),而且卵巢表面卵泡数极显著下降(P0.01),镜检表明中毒和田羊卵巢中初级卵母细胞溶解、消失,间质血管扩张,原位末端标记(TUNEL)发现中毒和田羊卵巢细胞和卵泡颗粒细胞发生凋亡,中毒和田羊卵巢Bax基因mRNA表达量极显著升高(P0.01),Bcl-2基因mRNA表达量极显著下降(P0.01)。小花棘豆中毒和田羊血清和卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性极显著下降(P0.01),丙二醛(MDA)含量极显著升高(P0.01);血清中雌二醇(E2)和孕酮(P4)含量均极显著下降(P0.01)。卵巢中FSHR和LHR mRNA表达量均极显著下降(P0.01),其蛋白表达量均显著下降(P0.05)。研究结果表明,小花棘豆中毒可导致和田羊卵巢病理性损伤,抑制相关繁殖基因表达,促使细胞凋亡,从而抑制和田羊机体生殖功能。     

线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用.取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性.与对照组相比,125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.01),具有剂量-效应关系.说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一.     

鹅卵泡颗粒细胞凋亡与卵黄E_2和P_4水平关系的研究

以产蛋期扬州鹅为试验素材,取排卵前F1-F4卵泡、最小排卵前卵泡(SPF)、小黄卵泡(SYF)和闭锁卵泡,利用HE染色、透射电镜和流式细胞术分析鹅卵泡颗粒细胞凋亡,采用放射免疫分析法检测各级卵泡的卵黄雌激素(E2)和孕激素(P4)水平,探讨鹅卵泡颗粒细胞凋亡与卵黄E2和P4水平的关系.结果表明:①闭锁卵泡的颗粒细胞表现出明显的凋亡特征;②在卵泡选择过程中,E2水平显著上升,P4水平略有上升;③卵泡从排卵前阶段逐渐发育至F1卵泡的过程中,E2水平逐渐降低,而P4水平急剧升高;④闭锁卵泡的卵黄E2水平极显著低于各级正常卵泡,而P4水平极显著高于除F1卵泡外的其他各级卵泡;⑤正常卵泡的颗粒细胞凋亡指数与E2水平呈正相关(r=0.514),与P4水平呈负相关(r=-0.744).     

卵泡刺激素剂量依赖性表达基因的筛选

为开发能高效检测卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)制品生物活性的新方法,选取猪卵泡颗粒细胞,利用转录组测序技术对比FSH处理组(40 m IU/m L)和空白对照组细胞中基因的表达情况,分析并获得大量受FSH调控的候选基因,运用荧光定量聚合酶链式反应验证FSH处理后显著上调的基因,并进一步利用FSH浓度梯度(0、20、40、60、80、100 m IU/m L)处理卵泡颗粒细胞。结果显示,基因OLR1、LHCGR、SCARA5和S100A12的表达量呈现FSH浓度依赖性升高。在3倍递增的FSH浓度梯度(0、1、3、9、27、81、243、729 m IU/m L)下观察各基因表达量的变化,发现在0~243 m IU/m L的FSH浓度范围内,LHCGR基因的表达量与FSH浓度呈高度线性相关(R2=0.982)。因此,可通过检测FSH刺激条件下细胞中LHCGR基因的表达量,来评估FSH制品的生物学效价。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体(shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306)及1条阴性对照载体(shRNA-NC),利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染sh-RNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48hshRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组(P0.05),故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);转染后24～48h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。     

基于Illumina测序筛选牛卵泡发育相关的上调表达基因

为研究牛卵泡发育过程中促进卵泡生长成为优势卵泡的重要调控因子及其表达模式,采集牛卵巢上的最大卵泡(8～10 mm)与第二大卵泡(5～8 mm),通过测定卵泡液中雌二醇(E_2)与孕激素(P)的水平,确定优势卵泡(DF)和从属卵泡(SF)。刮取DF和SF中的颗粒细胞,提取其总RNA并建立文库,通过Illumina平台进行测序。用SOAP V2.0软件将测序获得的序列与牛参考基因组数据库进行比对,获得mRNA序列;用DESeq 2软件对获得的mRNA进行差异表达分析,并对其中表达上调的基因进行GO分析及KEGG信号通路分析;最后通过实时荧光定量PCR对筛选出的具有代表性的上调表达基因进行验证。通过测序共获得32 346个基因,其中在DF颗粒细胞中表达显著上调的基因有194个。GO分析结果显示,这些表达上调的基因共分为3大类33组,其中参与生物学过程(Biological process)的基因占60.6%;与细胞组分(Cellular component)相关基因占21.2%,其中31个基因参与了细胞质功能;与分子功能(Molecular fuction)相关的基因占18.2%,其中18个基因参与金属离子结合。KEGG信号通路分析共发现4条通路,其中基因富集最为显著的是轴突导向通路。实时荧光定量PCR结果表明,细胞色素P450 19A1基因(CYP19A1)在DF颗粒细胞中的相对表达量极显著高于SF(P0.01),硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、脑表达X2(BEX2)和丝氨酸蛋白酶35(PRSS35)基因在DF颗粒细胞中的相对表达量显著高于SF(P0.05),与Illumina测序表达趋势一致。综上,PRSS35、CYP19A1、BEX2和TXNIP在牛卵泡的发育过程中可能会起促进作用,最终引起卵泡排卵。     

甘加藏羊发情周期不同阶段血浆生殖激素分泌规律

为研究甘加藏羊发情周期血浆中生殖激素的分泌变化规律,选取24只处于发情周期内的甘加藏羊,采集甘加藏羊发情周期不同阶段的血液,采用酶联免疫分析法(ELISA)检测甘加藏羊发情周期血浆中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮(P)和雌激素(E)的分泌变化。结果显示,FSH含量在发情期最高,为3.406 m IU/m L,发情后期降低至2.492 m IU/m L,间情期又开始升高,至发情前期达2.727 m IU/m L,发情期含量极显著高于发情后期、间情期和发情前期;LH含量在间情期最高,为4.377 m IU/m L,发情后期显著低于间情期和发情前期;P含量在发情前期最高,为18.039 ng/m L,发情期降至16.196 ng/m L,发情后期缓慢升高,间情期达17.127 ng/m L,发情前期极显著高于发情期与发情后期;E含量在发情前期最低,为29.625 pg/m L,发情期升高(36.035 pg/m L),发情后期达到最高,为38.573 pg/m L,间情期又降低(35.531 pg/m L),发情后期极显著高于发情期、间情期以及发情前期,发情期与间情期极显著高于发情前期。     

Caspase-3和Bcl-2／Bax在胆管癌组织中的表达及与临床病理特征的相关性研究

目的：探讨相关凋亡蛋白Caspase-3、Bcl-2／Bax在胆管癌组织中的表达及与胆管癌病理类型以及肿瘤分期的关系。方法：采用免疫组化链霉素抗生物素-过氧化物酶复合物法（SP法）检测胆管癌组织38例标本中Caspase-3、Bcl-2／Bax的表达,结合临床病理资料进行回顾分析。结果：①18例胆管高分化腺癌组织中,Caspase-3阳性检出率为50．00％（9／18）,11例低分化腺癌中,Caspase-3阳性率为18．18％（2／11）,Caspase-3在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;Caspase-3蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。而与患者年龄、性别、肿瘤大小关系无统计学意义（P〉0．05）。②18例胆管高分化腺癌组织中Bcl-2阳性检出率为16．67％（3／18）,11例低分化腺癌中,Bcl-2阳性率为54．54％（6／11）,Bcl-2在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;Bcl-2蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。余无明显差异（P〉0．05）。③18例胆管高分化腺癌组织中,Bax阳性检出率为44．44％（8／18）,11例低分化腺癌中,Bax阳性率为9．09％（1／11）,Caspase-3在高、低分化腺癌之间阳性率差异具有统计学意义（P〈0．05）;另外,Bax蛋白表达与胆管癌的分化程度、有无淋巴结或远处转移及临床分期相关（P〈0．05）。结论：胆管癌中Caspase-3、Bcl-2／Bax蛋白表达可能与胆管癌的发生发展有关;检测Caspase-3和Bcl-2／Bax的表达对胆管癌的预测有一定的参考价值。     

脑源性神经营养因子在猪卵泡中的表达

以猪卵泡期和黄体期的不同直径(<3 mm,3~6mm,>6mm)卵泡颗粒细胞和卵泡液为研究对象,采用RT-PCR、ELISA技术检测脑源性神经营养因子(BDNF)在不同直径猪卵泡的颗粒细胞和卵泡液中mRNA和蛋白的表达情况。结果表明:BDNF在不同直径的卵泡颗粒细胞和卵泡液中均有表达。各个直径的卵泡颗粒细胞之间表达差异显著,各个直径卵泡液中的含量差异显著。大卵泡颗粒细胞表达量最低,小卵泡液中的含量最低。卵泡期和黄体期卵巢上,中等卵泡中颗粒细胞和卵泡液中BDNF的表达量差异显著。     

白术多糖对环磷酰胺致雏鸡肝脏细胞凋亡中线粒体通路的影响

试验旨在从线粒体介导的细胞凋亡通路,探讨白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的雏鸡肝脏损伤的影响。试验选取1日龄岭南黄鸡240羽,随机分成4组:对照(Control)、环磷酰胺(CTX)、白术多糖(PAMK)以及白术多糖环磷酰胺联合组(PAMK+CTX)。试验结束后,采集雏鸡肝脏组织,用于形态学观察及线粒体介导的细胞凋亡通路相关基因mRNA表达量和蛋白表达水平检测。光镜结果显示,环磷酰胺诱导雏鸡肝脏组织细胞形态结构不完整、肝细胞索排列紊乱、空泡化。电镜结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织细胞线粒体明显受损,并发生细胞凋亡。从分子水平探讨线粒体介导的细胞凋亡通路结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织中促凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和p53 mRNA表达量显著升高(P0.05),抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达量显著降低(P0.05)。白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Bax的mRNA表达量显著降低(P0.05),Bcl-2 mRNA表达量显著升高(P0.05)。此外,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。研究结果表明,环磷酰胺可诱导雏鸡肝细胞凋亡,白术多糖可通过调节线粒体通路相关基因表达抵抗环磷酰胺诱导雏鸡肝细胞凋亡,对雏鸡肝脏产生保护作用。     

线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用。取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250μg.mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性。与对照组相比,125、250μg.mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),具有剂量-效应关系。说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一。     

大鼠自发性乳腺肿瘤中Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

通过130只(雌雄对半)Sprague-Dawley(SD)大鼠进行自发性乳腺肿瘤造模,并研究自发产生的乳腺肿瘤组织的病理变化及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukmia-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(B cell lymphoma/leukmia-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)在乳腺肿瘤中的蛋白和m RNA表达变化。造模结果显示共有14只雌性大鼠发生乳腺肿瘤,对总体而言肿瘤的发病率为10.77%(14/130);由于雄性大鼠未见乳腺肿瘤,在雌性大鼠中肿瘤的发病率为21.54%(14/65)。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色病理切片观察确定肿瘤分型分别为乳腺纤维腺瘤7例,乳腺腺癌3例,乳腺乳头状癌2例,乳腺浸润性导管癌2例。免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结果显示,对照组(n=5)Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达量分别为9.75±0.04、8.13±0.35和6.60±0.04,而这3个因子在良性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为8.16±0.16、9.14±0.22和4.43±0.1。另外,其在恶性病变组(n=7)的蛋白表达量分别为6.49±0.32、9.24±0.81和3.03±0.10,与对照组相比,Bax和Caspase-3在病变组的表达极显著减少(P0.01),而Bcl-2在病变组中的表达与对照组相比也显著增加(P0.05),且正常对照组Bcl-2/Bax比值小于1,而在良性组和恶性组则均大于1。荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RTFQ-PCR)结果通过相对定量计算显示,Bax、Bcl-2和Caspase-3在各组中的m RNA的表达量变化与蛋白表达一致,相比差异有高度统计学意义(P0.01)。综上所述,自发性乳腺肿瘤在雌性大鼠中的发病率较高,且病变类型多样,而雄性发病率为0;且Bcl-2、Bax和Caspase-3与大鼠自发性乳腺肿瘤的发生有着密切的联系,从而为临床乳腺肿瘤的诊断、治疗和预后提供了新的思考方向。     

运动对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

通过研究不同运动强度对心肌细胞凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响,探讨了运动对心肌细胞凋亡的作用机制。将大鼠分为3组(正常对照组、一般游泳有氧训练组和力竭性过度训练组)并建立运动模型;采用实时荧光定量PCR技术观察心肌细胞中凋亡基因Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达;采用Western blot方法观察Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,一般游泳有氧训练组大鼠调控基因Bcl-2表达显著增加,对细胞的凋亡起到一定的抑制作用;而力竭过度训练组中心肌细胞相关调控基因Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3的表达升高促进凋亡。因此推定超负荷的运动会加重大鼠心肌细胞的凋亡,凋亡的发生可能与调控基因Bcl-2、Bax和Caspase-3有关。     

高精料日粮诱导奶牛乳腺应激和凋亡中血管紧张素转化酶2的作用

[目的]本试验在已有研究血管紧张素系统(RAS)在乳腺中保护作用的基础上,对该家族的主要成员血管紧张素转换酶2(ACE2)在对抗高精料所致奶牛乳腺氧化应激、炎性损伤及细胞凋亡中的作用及机制进行了探讨。[方法]6头健康的泌乳期荷斯坦奶牛,随机分为对照组[m(精)∶m(粗)=4∶6]和高精料组[m(精)∶m(粗)=6∶4],采用单栏、定时、定量饲喂。饲喂20周后,活体取乳腺组织,进行如下试验:1)测定乳腺组织中氧化应激指标·OH水平及TNOS、SOD活性;2)ELISA法测定炎性指标TNFα、IL-1β和凋亡指标Caspase-3、Bax、Bcl-2;3)Western blot分析乳腺组织中ACE2和ACE蛋白的表达;ELISA法测定AngⅡ和Ang1-7的含量。[结果]高精料长期饲喂,奶牛乳腺组织中·OH自由基水平显著升高(P0.05),SOD活性降低,TNOS活性降低显著(P0.05);炎症因子TNF-α和IL-1β水平均显著升高(P0.05);促凋亡蛋白Caspase-3和Bax水平显著升高(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2水平显著降低(P0.05);乳腺组织中AngⅡ浓度(P0.05)和ACE蛋白表达水平极显著升高(P0.01),ACE2蛋白表达水平降低(P0.05),但Ang1-7浓度显著降低(P0.05)。[结论]长期饲喂高精料可导致奶牛乳腺自由基激活、炎症因子释放、细胞凋亡,乳腺局部损伤。乳腺局部组织中RAS处于激活状态,2条轴互相拮抗,表现为AngⅡ水平升高,ACE2水平降低。     

Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响

为明确Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的作用,采用荧光定量PCR和ELISA方法研究了Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用,且在一定范围内呈剂量依赖性。100 nmol/L Kisspeptin-10(Kp-10)处理颗粒细胞24 h后,显著增加了孕酮的分泌(P0.05),而10 nmol/L和1 000 nmol/L Kp-10处理组对孕酮的分泌无显著影响(P0.05)。100 nmol/L Kp-10可显著提高孕酮合成的关键基因3β-HSD和St AR的mRNA表达水平(P0.01)。研究结果提示,Kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌,推测这一作用可能通过上调孕酮合成关键基因表达来实现。     

WNT6基因对蛋鸡卵泡颗粒细胞的影响及机制研究

[目的]本文旨在研究WNT6基因在蛋鸡卵泡发育过程中的生物学功能及其作用机制。[方法]以300日龄海兰蛋鸡为研究对象，检测WNT6 mRNA在不同组织中表达特征。对体外培养的鸡卵泡颗粒细胞进行敲减和过表达WNT6基因后，用CCK-8试剂盒检测细胞增殖，ELISA检测细胞培养基中的孕酮(P4)含量，荧光定量PCR检测卵泡刺激素受体(FSHR)和StAR、CYP11A1等基因表达水平。设立卵泡刺激素(FSH)浓度梯度处理体外培养的蛋鸡卵泡颗粒细胞，研究FSH对WNT6及WNT通路相关基因表达水平的影响。[结果]WNT6 mRNA在蛋鸡卵泡颗粒细胞内特异表达，在处于卵泡选择关键时期的小黄卵泡颗粒细胞内具有最高表达水平；与对照组相比，过表达WNT6极显著促进颗粒细胞增殖(P<0.01),极显著提高颗粒细胞P4合成量(P<0.01),并显著提高FSHR、CYP11A1、StAR、CYP19A1和HSD3B1基因表达水平(P<0.05);相反，敲减WNT6后颗粒细胞增殖被抑制(P<0.01),P4合成量极显著显著减少(P<0.01),并显著降低FSHR、CYP11A1...