不同地理株柔嫩艾美耳球虫(E.tenela) 杂交虫株(F1)的培育

通过用单卵囊接种技术培育了山东株(S)和黑龙江株(H),然后将山东株(S)和黑龙江株(H)的柔嫩艾美耳球虫的孢子化卵囊同时喂给雏鸡,收获卵囊,提取基因组DNA,再利用RAPD技术对它们基因组DNA进行分析,分析了19株柔嫩艾美耳球虫卵囊的DNA分子,确定了1株为山东株和黑龙江株的杂交株(F1)。这一研究结果为深入研究球虫的免疫机制奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫野外抗药性虫株的RAPD分析

用RAPD方法对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）的8个分别来源于黑龙江、北京、四川、甘肃和广东的中山、新会、东莞以及广州近郊的江村镇的野外分离虫株和2个药物敏感性虫株进行了遗传多态性分析。同时用9种抗球虫药物即马杜霉素（5mg/kg）、盐霉素（60mg/kg）、莫能霉素（120mg/kg）、拉沙菌素（90mg/kg）、克球多（150mg/kg）、常山酮（3mg/kg）、氯氢苯乙氰（1mg/kg）、尼卡巴嗪（125mg/kg）和球痢灵（125mg/kg）分别对8个野不进行抗药性试验，8个虫株对上述药物均有不同程度的抗药性。RAPD分析表明：10个样品都有相似而清晰的主带，每个泳道有5－13条带不等，大小为0.18-2.10kb。它们之间的相似率（SI）大于40.58%，最大的为90.72%，这种相似率属种内变异水平。根据SI值可把10个样品划分为3个类群：广东虫株类群，群内比较，平均SI值为76.60%；广东省外虫株类群，群内比较的平均SI值72.14%；敏感株类群，其间的SI值为89.27%。在另一方面，广东株与广东省外株、敏感株之间比较，其SI的平均值分别仅为63.03%和47.25%，说明柔嫩艾美耳球虫抗药性虫株之间有遗传差异法。     

鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗药性虫株的种内多态性研究

应用RAPD技术进行柔嫩艾美耳球虫4个单一抗药性虫株与1个敏感株的基因组DNA多态性分析，发现4个抗药性虫株及敏感株之间的相似值均大于99%；OPAO3引物对抗盐霉素株扩增出一条约500bp的特异条带，OPH02引物对抗克球粉株和抗盐霉素株均扩增出了约1kb的第三条主带，这些特异条带的出现很可能与球虫抗药性基因有关，有可能用于抗药性虫株的诊断与鉴定。     

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验

柔嫩艾美耳球虫毒害艾美耳球虫变位艾美耳球虫交叉免疫试验黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所，２００２３２）鸡感染球虫后会产生一种抵抗再次感染的免疫反应，这种免疫反应具有种的特异性，即感染某种球虫不能保护抵抗另...     

柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性研究

为探讨柔嫩艾美耳球虫杂交株对亲本株的免疫保护性,本研究用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)杂交株及其亲本广州株、长春株、黑龙江株分别对AA肉鸡进行免疫和攻虫,通过OPG计数、粪便计分、盲肠病变计分、增重测定和保护率等指标评价免疫保护效果。结果表明E.tenella杂交株对其亲本广州株、长春株、黑龙江株的感染具有较强的免疫保护效果,保护率分别为83.9%、79.1%和81.2%;杂交株免疫肉鸡的盲肠病变计分和粪便计分显著低于广州株、长春株和黑龙江株(p0.05)。杂交株免疫后的肉鸡再用亲本株攻虫,采血进行CD4+T、CD8+T细胞检测,结果杂交株能引起两种T细胞数量增加,表明CD4+T、CD8+T细胞在球虫免疫中起着重要作用。     

五种不同来源柔嫩艾美耳球虫耐药性虫株的检测

五种不同来源柔嫩艾美耳球虫耐药性虫株的检测秦建华，赵月兰，田勇，张明勇（张家口农业高等专科学校０７５１３１）国外，近年来对鸡球虫的耐药性进行了大量研究，为合理选择和正确使用抗球虫药以防治球虫病奠定了良好的基础。我国在这方面研究较少，实际用药过程中十分...     

不同地理株及其杂交株柔嫩艾美耳球虫细胞免疫水平研究

本文首先培育了5个不同虫株柔嫩艾美耳球虫(Emeria tenella):3个不同地理株吉林株[J]、山东株[S]、黑龙江株[H]和2个杂交株F1(山东株×黑龙江株)、F2(F1×吉林株).将300只AA肉鸡鸡雏随机分成6组,每组50只,12日龄时分别用不同株柔嫩艾美耳球虫进行免疫,首免剂量为1 × 104卵囊.24日龄时攻虫,剂量为1×104卵囊.攻虫后10日龄时翼下静脉采血1 mL检测学液中的CD4 ,CD8 的数量,以此判断柔嫩艾美耳球虫的细胞免疫功能,结果证明:杂交株柔嫩艾美耳球虫CD4 ,CD8 的数量远远高于其它组,F2组更高.各组的CD4 ,CD8 的数量依次为F2＞F1＞S＞H＞J. CD4 ,CD8 的数量的比值也不同.即各组的细胞免疫功能不同,从数值上反应出,F2株细胞免疫水平最高,其次是F1,再次是山东株,黑龙江株和吉林株最低.     

柔嫩艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定柔嫩艾美耳球虫（Eimenatenella）早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个／羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×10^4个／羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以存活率、增重、肠道病变记分、血便数量、卵囊减少率为观测指标。对免疫保护效果较好的3个免疫剂量进行重复试验,同时设置商品化球虫疫苗对照组,免疫方法、试验周期、试验指标同第一批试验。结果显示：攻虫后,不免疫攻虫组出现5％死亡,而各免疫组来出现死亡;各免疫组卵囊减少率在61．57％～69．52％;200～2000免疫组的增重与不免疫不攻虫组差异不具备显著统计学意义（P〉0．05）;600～2000免疫组的肠道病变记分和血便数量均明显少于不免疫攻虫组（P〈0．05）。用600、800和1000进行重复试验,三个免疫组攻虫期间均来出现死亡,而不免疫组和疫苗对照组均出现5％死亡;三个免疫组的增重均明显高于不免疫攻虫组和疫苗对照组（P〈0．05）;早熟株免疫组的肠道病变记分和血便数量明显低于不免疫攻虫组（P〈0．05）,而疫苗对照组与不免疫攻虫组的相当（P〉0．05）;卵囊减少率在66.30％-78．75％,高于疫苗对照组的51．82％。结果表明,该柔嫩艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,不同免疫剂量均能诱发鸡产生免疫保护力,其中600、800和1000个／羽的免疫效果均优于疫苗对照组,可考虑以600个／羽作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

五种不同地理株柔嫩艾美耳球虫免疫保护性比较

用五个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella），即：广州株、保定株、长春株、北京株、沈阳株，对12日龄雏鸡分别进行免疫攻虫。通过OPG计数，粪便计分，盲肠病变计分，增重测定，计算保护率。结果发现不同地理株球虫的免疫保护率有明显差异，广州株80．2％〉保定株73．2％〉长春株68．4％〉北京株63．8％〉沈阳株51．0％。其中广州株比其他虫株有显著保护率（P〈0．01）。免疫后的雏鸡抽血进行CD4^＋、CD8^＋T细胞检测，结果各株均能引起两种T细胞数量增加，表明CD4^＋、CD8^＋T细胞在球虫免疫中起着重要作用。     

鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株的抗药性研究

使用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)西宁株(Et XN)感染13日龄岭南黄肉鸡,进行该虫株对轻灭(地克珠利,Diclazuril)、马度米星铵预混剂(Maduramicin Aminonium Premix)、球痢灵(磺胺氯吡嗪钠,Sulfachoropyridazine)、球迪2000(盐酸氯丙啉,Amprolium Hydrochloride)4种药物的抗药性研究。以相对卵囊产量(ROP)、病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫活性百分数(POAA)、抗球虫指数(ACI)作为指标进行综合判定。结果表明:该虫株对马度米星铵预混剂具有轻度抗药性,对球痢灵具有中度抗药性,对轻灭和球迪2000具有完全抗药性。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性

选择130只21日龄雏鸡，研究了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利（Diclazuril)、马杜霉毒（Maduramicin)、氯羟吡啶（Clopidol)、氯苯胍（Robenidine)和氨丙啉（Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组，其中每株球虫均设5个感染用药组，1个感染不用药组，另设1个不感染不用药组，每组10只鸡。以POAA，RLS，ROP，ACI作为指标。结果表明，2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药，对地克珠利敏感或轻度抗药，对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示：目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉，对氯羟哟啶应慎用，对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。     

不同地理株柔嫩艾美耳球虫对地克珠利敏感性试验

进行了3个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫(吉林株、山东株、黑龙江株)对地克珠利饮水剂的敏感性试验.分别给予试验组鸡1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,感染后饮水给予地克珠利药物治疗.结果表明,3株球虫的敏感性不同,其敏感顺序为:山东株＞黑龙江株＞吉林株.由此可见,柔嫩艾美耳球虫不同地理株间存在对地克珠利的敏感性差异.     

应用ELISA检测紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株虫苗抗体

将无球虫雏鸡随机分为2组,在9日龄和16日龄分别进行首免和二免。用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗球虫抗体的变化情况。结果显示,雏鸡的抗体水平动态变化整体呈上升趋势,并且在二免后第11天出现峰值(0.398),其后稳定地维持在较高水平;对照组抗体水平稳中有降。抗体水平动态变化表明,紫外线减毒柔嫩艾美耳球虫YL株有较强的免疫保护力。     

鸡柔嫩艾美耳球虫西宁株生物学特性研究

为了解柔嫩艾美耳球虫西宁株的生物学特性,采用费勒鹏氏法收集西宁某鸡场鸡粪中的球虫卵囊,经单卵囊收集和繁殖法扩繁柔嫩艾美耳球虫西宁株,并进行了该虫株卵囊形态、卵囊形状指数、孢子化时间、潜隐期和繁殖指数的观察和测定.结果表明,虫株卵囊为长卵圆形,平均大小为20.08 μm×16.55 μm,卵形状指数为1.21,最短孢子化时间为18 h,潜伏期为114 h,每个卵囊的繁殖指数为6.34.以平均增重、病变记分和死亡率为指标进行了该虫株的致病性研究,显示该虫株有致病性,感染组与不感染对照组的体重相比有显著差异(P<0.05),各感染组平均病变记分与不感染对照组的相比,差异极显著(P<0.01).     

柔嫩艾美耳球虫耐药株与鸡3种球虫的同工酶的研究

对不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物敏感的柔嫩区美耳球虫、布氏匀美耳球虫和堆型艾耳球虫的孢子化卵囊,采用聚安凝胶垂直板电泳,进行了乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、葡萄糖磷酸异构酶（ＧＰＩ）和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）等同工酶华不同离子载体抗生素具有抗药性的柔嫩艾美耳球虫和药物同工酶酶谱可以反应出球虫种间差异;而柔嫩艾耳球虫抗性虫株的ＬＤＨ酶谱是２条带,敏感虫株是３条带,抗性株比敏感株     

柔嫩艾美耳球虫YL株抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株 ( YL t)对 1 4日龄雏鸡进行感染 ,检测了该虫株对 4种常用抗球虫药 (马杜拉霉素、地克珠利、克球粉和氯苯胍 )的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性 4个等级。结果表明 ,该虫株对马杜拉霉素有轻度抗药性 ,对地克株利有完全抗药性 ,对克球粉和氯苯胍无抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫早熟株的内生发育及其致病性

为了给鸡球虫早熟弱毒疫苗的开发提供依据,对柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella) 北京株经10 代早熟选育获得的早熟株的内生发育研究发现,其第2 代裂殖生殖发育较快,第2 代裂殖体含裂殖子较少,提前进入配子生殖,从而造成卵囊“早熟”。该早熟株致病性大大下降,经口感染10×104 个/只的致病性仅相当于剂量0.1×104 个/只亲本毒株的致病性。该虫株可作为研制早熟弱毒苗用虫株。     

柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性研究

利用人工感染试验,研究柔嫩艾美耳球虫洛阳分离株的致病性。结果表明,随着感染剂量的提高,其死亡率上升,平均增重下降、平均病变记分提高,半数致死量(LD50)为3.248 7×104个/只。为洛阳地区防控其柔嫩艾美耳球虫所病提供了依据。