不同获能方法对冻融塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同获能方法对塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,冻融塔里木马鹿精子随机分为4组,用钙离子载体、肝素、咖啡因和 Percool 离心4种方法进行精子获能的诱导,利用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用 SDS-PAGE 分离精子膜蛋白,进行 Western blotting 免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平.结果显示,冻融精子经4种精子获能方法处理后,肝素诱发的精子获能率显著高于钙离子载体组和 Percool 组（P ＜0．05）.钙离子载体组、肝素组和咖啡因组精子蛋白酪氨酸磷酸化水平高于 Percool 组和对照组.另外,冻融精子随着上游处理及肝素诱导获能的进行,检测到分子量分别为14,25~30,40,47,55 ku 的酪氨酸磷酸化蛋白,这些蛋白的酪氨酸磷酸化水平在获能60~120 min 期间相对较高,而且此时精子获能率及超激活运动精子比例也显著提高（P ＜0．05）.结果提示,肝素可以较好的诱导马鹿精子获能,马鹿精子获能与蛋白酪氨酸磷酸化相关.     

牛精子体外获能前后元素变化的研究

 本文应用x射线能谱技术，对获能前后精子质膜表面（头部、中段）和内部（顶体内、中段线粒体内）的元素进行了分析测试。结果表明，牛精子用肝素+咖啡因体外获能后，头部、中段质膜表面的Na、Al、S、K含量升高，Cl、Ca含量降低；顶体内Na、Mg、Si、P和Fe含量降低，而Ca、K、Cl和S含量升高；精子中段线粒体内Na、P、Si、Cl和Ca升高，而Mg、S、K和Fe却降低。获能过程中精子顶体内Na/Ca、Na/K、Cl/Ca、Cl/K和Na/Cl的浓度比分别为42.13、12.43、15.36、45.31和2.74；而摩尔比又分别为73.42、21.13、17.37、4.99和4.23。本文并对可能的获能机理进行了讨论。     

不同品系小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精的研究

采用小鼠精子冷冻、冻融精子体外受精的方法,进行小鼠保种、引种、生物净化及品系标准化的可行性研究,并初步探究小鼠精子冷冻的影响因素。实验选用同一年龄5种不同品系小鼠分别进行精子冷冻、复苏,并比较各品系冷冻效果及冻融精子的体外受精(IVF)率。结果显示,冷冻后各品系小鼠精子复苏存活率约在15%～50%之间;冻融小鼠精子体外受精结果随遗传背景的不同差异显著,受精率分别为:KM小鼠68.4%、ICR小鼠30.3%、DBA/2J小鼠47.2%、C57BL/6J小鼠6.8%、BALB/cA小鼠25%。冻融精子IVF得到的胚胎可以耐受体外培养。     

利用流式细胞仪评价不同防冻液对猪冻融精子成活率及凋亡状况的影响

人工采取5头优质大白猪精液,利用BTS稀释液和添加氨基—钠—十二烷基硫酸脂(OEP)、十二烷基硫酸钠(SDS)及卵黄所组成的防冻液稀释后,冷冻程控仪制成细管冻精,采用荧光显微镜及流式细胞仪对冷冻复苏后精子质膜完整率和凋亡状况进行测定,目的在于比较不同检测方法评估猪冻融精子活率的差异性,探讨OEP、SDS对猪冻融精子质膜完整率和凋亡状况的影响。结果表明,Annexin-V/PI染色流式细胞术能准确测出猪冻融精子质膜完整率及处于凋亡状态的数量,同Annexin-V/PI染色流式细胞术相比,利用SYBR-14/PI染色荧光显微镜法往往高估冻融精子的死亡率。各处理组间冻融精子质膜完整率及凋亡数量存在一定差别,添加OEP防冻剂的实验组早期凋亡精子的比例显著低于对照组(P<0.05),而正常活性精子的比例(46.5%)显著高于对照组(37.2%)(P<0.05),结果提示:OEP对维持冻融精子质膜完整性、抑制冻融精子凋亡起到较好作用。     

冻融过程诱导精子凋亡及抗冻保护剂的研究进展

精子凋亡广泛存在于精液冻融过程,冷应激或氧化应激刺激及获能样变化均可引起精子凋亡。产生凋亡样变化的精子其结构、线粒体功能、膜电位、DNA完整性和参与凋亡反应的蛋白均发生变化,导致精子死亡率升高,活率下降。简述了冻融过程中精子凋亡的成因及抗冻保护剂的研究进展,以期为进一步提高冻融后的精子质量提供理论参考。     

金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因表达的影响

[目的]探究金雀异黄酮对冻融猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及获能相关基因的影响,为丰富猪精子冷冻保存技术的理论基础及后续开展蛋白酪氨酸激酶抑制剂对冻融猪精子获能影响研究提供参考依据.[方法]采集猪精液后,设精液冷冻对照组(CK组)、100.0 μmol/L金雀异黄酮冷冻处理组(G组)和鲜精组(F组),使用Western blo...     

校正的BO液培养法对牛精子体外获能的影响

本试验校正了利用肝素和咖啡因使牛精子体外获能的传统的BO液配方及培养方法;利用去透明带仓鼠卵的穿透试验和顶体的台盼兰——姬姆萨双重染色技术检查了该方法对获能的影响,发现校正的BO液培养法缩短了预培养时间,增强了获能效果。     

母牛抗精子抗体与繁殖性能的关系

本试验用Kibrick和F-D试验法分别测定了母牛体内抗精子抗体的效价,结果处女牛普遍低;屡配不孕牛高;而怀孕牛中只有少数偏高。一些不孕牛经两种方法同时测定,其结果相似。对一组不孕牛同时测定了发情时子宫粘液和血液中的抗精子抗体,发现子宫粘膜(液)中同样可产生和存在着类似抗体。5头阳性不孕牛,分别用4头无血缘关系的公牛精液进行试验,其结果相似,没有发现精液的来源不同(公牛的血型)与这些牛的不孕有什么相关。     

维生素B12对牛冷冻精液精子质量的影响

牛精液冷冻前于精液然释中添加ＶＢ１２为试验组,不添加ＶＢ１２的对照组。冷冻结果表明：试验组冻精解冻后精子活力,顶体完整率分别对照组提高１６．１１％,１５．９％,精子畸形率与ＧＯＴ活性明显下降;精子存活时间处长。说明ＶＢ１２在牛精液冷冻中对牛了形态结构具有保护作用。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温(-196℃)对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著升高(P<0.05),较未添加保护液组显著降低(P<0.05),GR的活性则显著低于鲜精组(P<0.05),但显著高于未添加保护液组(P<0.05);添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH-PX活性较鲜精组显著降低(P<0.05),较未添加保护液组显著升高(P<0.05),GR活性则显著高于鲜精组(P<0.05),但显著低于未添加保护液组(P<0.05)。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

超低温冷冻对俄罗斯鲟精子抗氧化酶活性的影响

为了探讨超低温（-196℃）对精子的损伤机理,采用试剂盒测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）和谷胱甘肽还原酶（GR）等酶活性。结果表明,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,添加抗冻保护液冷冻后的精浆中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著升高（P〈0．05）,较未添加保护液组显著降低（P〈0．05）,GR的活性则显著低于鲜精组（P〈0．05）,但显著高于未添加保护液组（P〈0．05）;添加抗冻保护液冷冻后的精子中SOD、CAT、GSH—PX活性较鲜精组显著降低（P〈0．05）,较未添加保护液组显著升高（P〈0．05）,GR活性则显著高于鲜精组（P〈0．05）,但显著低于未添加保护液组（P〈0．05）。这说明超低温冷冻对俄罗斯鲟精子的抗氧化系统产生了较大影响,成为影响精子活力的一个重要原因。     

氯离子等营养因子对精子获能影响的研究进展

介绍了精子获能的基本生物学过程,论述了氯离子对精子获能的影响及其机理,初步探讨了食盐在动物饲粮中过量使用可能产生的危害性。     

超低温冷冻保存对西伯利亚鲟精子酶活性的影响

为西伯利亚鲟(Acipenser baerii)精子超低温冷冻保存体系优化及冷冻精子保存效果提供理论支撑,以西伯利亚鲟新鲜精子为对照,研究超低温冷冻保存(-196℃)条件下精子中总ATP酶(ATPase)、谷胱甘肽还原酶(GR)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等的酶活性变化。结果表明:超低温冷冻前后西伯利亚鲟精子内的GR酶活性从(23.36±1.69)U/mL升至(94.61±4.13)U/mL,差异显著;CK酶、LDH酶、SDH酶、CAT酶及SOD酶的酶活性均显著降低,分别从(6.64±0.58)U/mL、(6 695.78±123.47)U/L、(24.91±1.63)U/mL、(112.33±6.38)U/mL、(61.99±4.15)U/mL降至(5.27±0.23)U/mL、(4 388.32±93.28)U/L、(17.45±0.94)U/L、(67.58±3.87)U/mL、(46.38±2.54)U/mL;总ATP酶从冻前的(18.77±1.23)U/mL降至(16.32±0.87)U/mL,差异不显著。超低温冷冻保存对西伯利亚鲟精子酶活性均有显著影响。     

不同糖类对蓝狐精子常温及冷冻保存特性的影响

人工采取6只优质芬兰雄性蓝狐精液,利用含有不同性质糖成分的Tris-卵黄-柠檬酸钠-甘油稀释液稀释后,常温保存及制成细管冻精,荧光免疫方法检测蓝狐鲜精液常温保存及冷冻复苏后冻融精子的质量,目的在于比较不同性质糖在蓝狐精子常温及低温冷冻保存中的作用。结果表明,常温保存时,果糖、木糖及海藻糖试验组精子活力、质膜完整率及顶体完整率较高,与对照组差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);超低温冷冻保存时,果糖、海藻糖稀释液有利于提高冻融精子质量,活力(44.6%、43.7%)与对照组(35.6%)差异显著(P<0.05),质膜完整率(50.6%、51.2%)、顶体完整率(53.2%、54.1%)与对照组间(39.6%、43.5%)差异极显著(P<0.01),而其他糖分试验组与无糖对照组差别不显著(P>0.05)。结果提示:果糖、木糖、海藻糖亦可作为蓝狐精液常温保存的稀释液成分,而果糖、海藻糖为蓝狐精液超低温冷冻保存较理想的保护剂     

钙离子对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力影响

研究主要探究钙离子(Ca2+)对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力的作用。利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测、蛋白免疫印迹测定不同Ca2+浓度对精子活力指标及蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,并对精子样品的酪氨酸磷酸化蛋白的分布情况进行观察。结果显示,当Ca2+浓度≤1.0mmol/L时,精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平增高;然而,当Ca2+浓度≥3.0mmol/L时,则明显抑制精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平,尤其分子量约为27和34kDa的高丰度蛋白磷酸化程度明显降低(P0.05)。高浓度Ca2+(4.0mmol/L)明显抑制鞭毛处蛋白酪氨酸磷酸化。因此,细胞外钙离子对猪精子活力和蛋白磷酸化起到重要调节作用,低浓度Ca2+促进精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化,高浓度Ca2+(≥3.0mmol/L)抑制精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化。本研究初步明确了Ca2+浓度对猪精子蛋白磷酸化及精子活力的影响,为进一步研究精子获能提供参考。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

硒对公鸡抗氧化和生殖激素及精子活力的影响

【目的】为寻找有机硒在家禽良种产业中应用提供理论基础。【方法】将144只30周龄健康蛋用种公鸡随机分为4个处理,每处理6个重复,每重复6只鸡,分别饲喂含不同浓度硒元素日粮(0、0.3、0.6、0.9mg/kg),试验期56d,于试验期末,采精测精子活力,取血液测抗氧化和生殖激素指标。【结果】日粮添加0.9mg/kg硒可显著提高种公鸡血浆抗氧化酶活性(P0.05),降低丙二醛(MDA)含量(P0.05);0.6mg/kg硒组可显著提高血浆黄体生成素和睾酮水平(P0.05),0.9mg/kg硒组卵泡刺激素水平显著高于其他各处理组(P0.05)。0.6mg/kg和0.9mg/kg硒组精子活力显著高于对照组(P0.05)。【结论】日粮添加酵母硒可增强种公鸡抗氧化能力,提高生殖激素水平和精子活力。硒浓度为0.6～0.9mg/kg时效果最佳。     

冷冻保存对藏獒犬精子超微结构的影响

为观察藏獒犬精子冷冻保存后超微结构变化,随机取新鲜与冷冻-解冻后的犬精子制备扫描电镜和透射电镜标本.结果表明:超低温保存造成精子结构不同程度的损伤,主要表现为精子头颈部发生部分或全部断裂,质膜消失,顶体外膜泡状化,环状沟模糊、消失或呈锯齿状,颈部肿胀,线粒体结构模糊.