基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成分检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成分检测技术,为动物源性成分的检测提供新思路。进行动物源性成分DNA快速提取,针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增,制备LFB对羊源性成分核酸扩增物进行检测。结果表明:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。建立的羊源性成分PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

肉中猪源性成分Real-time PCR定量检测技术

【目的】建立一种快速、准确的肉中猪源性成分定量检测方法。【方法】首先从GenBank数据库中筛选猪特异性的微卫星DNA,根据微卫星DNA核酸序列设计引物,对常见10种动物基因组DNA进行PCR扩增,通过有无扩增产物判断筛选的微卫星DNA对猪源性成分的特异性。然后根据微卫星DNA核酸序列,设计特异性引物和探针,建立猪源性成分Real-time PCR检测方法,采用双标准曲线分别对猪源性成分和总动物源性成分进行定量,计算猪源性成分的百分含量。【结果】筛选到猪特异性微卫星DNA（Accession EF172428）,根据其序列设计的引物SEQ-sus2-F/R只能从猪基因组DNA中扩增出目的条带,其他动物的基因组均无目的条带扩增。建立的Real-time PCR检测方法灵敏度为0.02 ng/25 μL反应体系。该方法能够准确检测出混合DNA样品中猪源性成分和混合肉样品中猪源性成分,百分误差分别约为1.32%和1.06%—7.12%。【结论】本研究利用Real-time PCR技术建立的定量猪源性成分的检测方法可以用来检测猪源性成分在混合样品中的百分含量。     

饲料中羊源组织成分的PCR检测

应用Chelex-100快速提取动物基因组DNA的方法,并根据羊线粒体基因的核苷酸序列设计1对引物,通过对分离的DNA进行PCR扩增、基因克隆及核苷酸序列分析,实现了对动物源性饲料中羊组织成分的检测.结果显示,该方法对羊组织DNA检测的敏感性可达20.16 pg/μL,当肉骨粉样品中含有质量分数为0.050%的羊源性成分时仍能检出,整个过程约需3 h.     

肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用

为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确性和适用性进行分析。结果表明,该方法可以快速实现对高山鸡肉、乌鸡肉、芦花鸡肉、白羽鸡肉和野鸡肉基因组DNA的特异性扩增,而对猪肉、牛肉、羊肉等的DNA均没有扩增,可稳定检出的鸡源性成分最低质量分数为0.1%。在9份标识有鸡肉成分的市售样品中,7份检出鸡源性成分,有2份样品的鸡源性成分检测结果为阴性。本研究建立的实时荧光RAA方法操作简单,反应迅速,特异性强,灵敏度高,为肉制品中鸡源性成分的检测提供了技术保障。     

基于TaqMan实时荧光PCR检测肉制品中羊源性成分

随着动物源性产品(农产品、食品和饲料)中掺假造假事件不断增多以及动物来源性疾病的传播风险逐渐加大,作为保障食品安全和维护消费者权益的高效检测手段,动物源性成分的定性和定量检测技术已成为国内外的研究热点。本研究通过比对分析8种动物的线粒体全基因组序列筛选出羊源性成分特异性的引物和探针组合进行基于实时荧光PCR技术的羊源性成分鉴定。结果表明,所研发的羊源性成分检测的引物和探针具有高度的特异性,同时具有较好的灵敏度(可检测到1 pg的DNA)。羊肉制品中羊源性定量检测试验结果说明,此方法具有较好的定量检测能力。综上所述,以此引物和探针为基础的检测方法适用于羊源性食品和农畜产品的动物源性成分检测。     

肉制品中羊源性成分PCR检测方法的建立及其应用

根据羊特异性线粒体DNA片段,设计合成一对引物,并以生、熟羊肉为材料,建立了肉制品中羊源性成分的PCR检测方法,并用于生、熟羊肉的鉴定。PCR扩增产物DNA片段大小为295 bp。用Sau3AⅠ限制性内切酶进行酶切鉴定,酶切产物为204 bp和91 bp。PCR产物和酶切产物的片段大小与预期目标相符,其检测灵敏度达到0.225 pg DNA。合成的羊源性DNA引物可以扩增出羊肉的目的 DNA片段,而对马、狗、驴、兔和猪等14种动物DNA无扩增效果。利用该法对83份羊肉制品进行鉴定,检出率为100%。结果表明,该法快速简便,且具有较高的特异性和敏感性,可用于市售牛肉制品中牛源性成分的鉴定。     

应用微卫星标记技术鉴别鸡、鸭、鹅源性成份

应用微卫星标记技术鉴别商品中常见禽源性成份。采集市售鸡、鸭、鹅的组织和内脏作为试验对象,提取基因组DNA。从GenBank中初选3种动物的微卫星标记,设计引物,用PCR-凝胶电泳检测方法筛选出每种动物种间特异的微卫星标记。试验结果表明:在鸡、鸭、鹅源性成份中,鉴定鸡源性成份可采用鸡的微卫星标记MCW 174,扩增的目的片段为261 bp或270 bp;鉴定鹅源性成份可采用鹅的微卫星标记EU833383,扩增的目的片段为479 bp或490 bp;鉴定鸭源性成份首先采用鸭的微卫星标记AMU70,扩增的目的片段为252 bp,264 bp或271bp,然后采用鹅的微卫星标记EU833383,无扩增条带出现。该方法成功的应用于鸡的处理样品和鸭的熟食类样品的检测。该方法具有准确快速、简便的优点,适用于鸡、鸭、鹅源性成份的鉴别。     

猪·牛·羊源性成分实时等温扩增检测方法的建立

[目的]建立一种快速检测猪、牛、羊动物源性成分的实时荧光环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法。[方法]针对猪、牛、羊物种ND1、COXⅠ、cytB特异性基因分别设计LAMP引物,通过实时检测荧光强度判断反应结果。[结果]猪、羊源性成分的检测灵敏度为10 pg,牛源性成分的检测灵敏度为1 pg。对模拟掺杂肉制品检测时,掺杂猪肉、牛肉、羊肉的检出限为0.01%。[结论]该研究所建立的LAMP法特异性强、灵敏度高,能有效地对肉制品掺杂的猪、牛、羊源性成分进行检测,可作为肉类鉴别的一种快速检测方法。     

一种从动物源性化妆品中快速提取DNA的方法研究

为了达到从分子水平上检测化妆品动物源性成分的目的,本研究建立了一种从化妆品中提取动物源性基因组DNA的方法。该方法使用Chelex-100结合玻璃奶提取化妆品中的基因组DNA,具有污染小、操作简单、快速、高效等优点。分别利用紫外分光光度计、普通PCR和DNA测序等方法对提取DNA的质量进行检测,结果表明DNA浓度和纯度均能达到后期分子检测要求。说明本方法提取的DNA适用于在分子水平上检测化妆品的动物源性成分。     

基于TaqMan探针的实时荧光LAMP检测肉制品中鸭源性成分研究

本研究建立1种基于TaqMan探针的实时荧光环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）(TaqMan—LAMP)检测方法,用于肉制品中鸭源性成分的快速鉴别。以鸭线粒体cytb基因的保守序列设计特异性引物,优化并建立基于TaqMan探针的实时荧光LAMP检测方法,对该方法进行特异性、灵敏度试验;同时与《GB/T38164—2019常见畜禽动物源成分检测方法 实时荧光PCR法》作比较,对市售肉制品进行检测,验证本方法的准确性。所建立的TaqMan-LAMP检测方法特异性强,仅鸭肉基因组DNA呈现特异性扩增曲线,30 min内完成检测,灵敏度为0.001%(w/w),重复性好,批次内变异系数CV为1.99%,对47份肉制品进行检测,检测结果与国标法相比,相对敏感性、特异性和符合率均为100%。本研究建立的鸭源性成分TaqMan-LAMP检测方法检测快速、特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于肉制品中鸭源性成分的快速检测。     

从猪毛囊中快速提取基因组DNA的有效方法

采用酚仿抽提法提取猪毛囊中的基因组DNA,并以此为模板进行猪骨形态发生蛋白7基因(BMP7)片段的扩增鉴定,优化建立一种快速、简单提取动物基因组DNA的方法。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,从猪毛囊中提取的基因组DNA纯度、质量浓度较高,能满足PCR扩增需要。提取DNA所用猪毛囊数量以10根为好。用毛囊提取动物基因组DNA简便、经济,能够在短期内获得群体基因组DNA,且不会对动物造成损伤。     

利用PCR技术鉴别畜禽肉中禽源性成分研究

为了建立一种快速、特异的禽源性成分检测方法,以线粒体16S r RNA基因序列为靶位点设计鸡、鸽、鹌鹑特异性引物,以常见畜禽肉(包括羊肉、牛肉、猪肉、兔肉、鸽肉、鹌鹑肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉等)DNA为模板,进行PCR扩增和特异性检测。结果表明,筛选的引物能够有效地对动物源性成分进行检测,方便简洁,可快速鉴别畜禽肉食品中含有的鸡源性、鸽源性、鹌鹑源性成分。     

饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR检测方法及其应用

 【目的】建立鉴定饲料中牛、羊、猪、鸡源性成分的PCR方法,进一步完善现有的动物源性饲料检测方法。【方法】根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16S rRNA基因序列选用了一对通用引物,初步检测出含有动物源性成分的样品;然后针对牛、羊、猪、鸡4种动物线粒体mtDNA中的保守序列,分别选用了4对特异性引物对检测出的样品进行PCR扩增,扩增的目的片段大小分别为271、274、149和266 bp。【结果】通过利用通用引物、优化PCR反应体系及其条件,建立了从未知样品中简便而快速的检测出是否含有动物源性成分的PCR方法;利用所选的针对不同动物的特异性引物,建立了鉴定牛、羊、猪、鸡这4种动物源性成分的方法,此方法最低检测限可达0.1%。【结论】建立的检测饲料中动物源性成分的方法操作简便,价格低廉,结果准确,可靠,可作为饲料中动物源性成分的鉴定方法之一。     

鸭呼肠孤病毒的RT-PCR检测方法的建立

为快速检测临床鸭呼肠孤病毒的感染情况,根据鸭呼肠孤病毒σC蛋白的基因序列设计1对特异性PCR引物,并以呼肠孤病毒基因组为模板,建立了鸭呼肠孤病毒的特异性RT-PCR检测方法。采集江苏省多地疑似呼肠孤病毒感染病料,提取基因组DNA进行RT-PCR扩增,产物经测序鉴定后判断建立的方法对临床样品的检出率。结果显示,该方法可以特异性扩增鸭呼肠孤病毒σC基因保守区438 bp的序列,与其他鸭病毒无交叉反应,最低可检测1 fg基因组DNA,对于临床样品检出率为100%。该方法可以用于临床快速诊断鸭呼肠孤病毒感染。     

基于多重PCR技术同时检测肉制品中6种动物源性成分

为建立一种检测肉制品中6种动物源性成分(牛、羊、鸡、猪、鸭和驴等)的多重PCR方法,比较了3种DNA提取方法,设计筛选了6对引物并对其特异性进行验证,同时对影响多重PCR扩增效率的因素(引物比例、退火温度和镁离子浓度等)进行优化。结果表明:试剂盒法为最佳的DNA提取方法;多重PCR法最优反应条件:引物比例为牛∕羊∕鸡∕鸭∕猪∕驴=2∕1∕1∕0.5∕1∕1,退火温度为58.6℃,镁离子浓度为3 mmol∕L,各动物源性成分DNA最低检出限为0.1 ng。该方法具有特异性强、灵敏度高、简单快捷等优点,可用于肉制品中6种动物源性成分的同时检测。     

甘蔗黑穗病菌DNA提取及PCR检测

本研究利用尿素混合液直接从甘蔗黑穗病菌孢子提取基因组DNA进行PCR检测鉴定,经过反复试验,建立了一种简便、快速的检测鉴定方法。利用建立的方法对12个甘蔗黑穗病样品进行病菌基因组DNA提取,将甘蔗黑穗病菌特异性引物进行PCR检测,均扩增出大小为420 bp的预期DNA片段条带。PCR扩增产物经克隆测序,与GenBank数据库中的甘蔗黑穗病病原菌序列比对,同源性达99%。     

植物检疫性有害生物蔗扁蛾的PCR快速鉴定

基于PCR分子检测技术,建立了进境植物检疫性有害生物蔗扁蛾(Opogona sacchari)快速、准确的鉴定方法。该方法对待检样品的基因组DNA经PCR扩增后进行凝胶电泳图分析,实现对待检样品的准确鉴定,检测时间缩短至8 h内,检测基因组DNA质量浓度限度为1 ng/μL,最适检测限为10 ng/μL以上。