刺五加苷B对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白及细胞因子mRNA表达量的影响

以仔猪小肠上皮细胞为模型,应用实时荧光定量PCR方法测定相关基因指标,研究刺五加苷B(EB)对仔猪小肠上皮(IPEC-J2)细胞紧密连接蛋白及炎性细胞因子mRNA表达量的影响。结果表明:0.1 mg/m L刺五加苷B显著增强肠道细胞紧密连接蛋白Occludin、Claudin-3、ZO-1和抗炎性细胞因子IL-10和TGF-β的mRNA表达量,且减弱促炎性细胞因子IL-6、TNF-α、INF-γ的mRNA表达量。说明刺五加苷B可通过改变细胞间紧密连接蛋白和细胞因子的表达从而对维持肠道屏障功能的完整性起到促进作用,有益于仔猪肠道的健康发育。     

刺五加内生真菌对刺五加苷B和E含量的影响

[目的]分析内生真菌对刺五加中刺五加苷B,E含量的影响。[方法]以分离自不同产地的刺五加内生真菌为试材．以伤口法回接,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]结果表明,25株内生真菌中有16株为致病菌,9株为非致病菌。其中来自产地吉林省梅河口市刺五加的菌株P116-1a、P109—4、P116-1b和P312—1均不同程度地提高了刺五加茎、根茎中刺五加苷B、E的含量。[结论]刺五加内生真菌可通过产生的代谢物调节刺五加苷B、E的含量。     

维生素A对大豆7S球蛋白致仔猪肠上皮细胞屏障功能损伤的影响

以仔猪肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究对象,用大豆7S球蛋白作为诱导因素,通过检测细胞活力、细胞跨膜电阻(TEER)、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白的mRNA表达情况,探究维生素A(V_A)对大豆7S球蛋白致IPEC-J2细胞屏障功能损伤的影响。结果显示:5.0 mg·mL^-1大豆7S球蛋白导致IPEC-J2活力、TEER与ZO-1、Claudin-1、Occludin的mRNA表达量极显著(P<0.01)降低,而荧光素钠渗透率和细胞培养液中碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、二胺氧化酶(DAO)、肠型脂肪酸结合蛋白1(IFABP1)的含量极显著(P<0.01)升高;添加0.1和1 μmol·L^-1 V_A极显著提高了细胞活力(P<0.01),0.1~10 μmol·L^-1 V_A显著(P<0.05)缓解了大豆7S球蛋白导致的TEER、荧光素钠渗透率、细胞膜完整性相关指标与紧密连接蛋白mRNA表达的变化;10 000 μmol·L^-1 V_A反而加剧了这些影响。总体上,0.1~10 μmol·L^-1 V_A能通过保护细胞活力和细胞完整性、影响紧密连接蛋白的mRNA表达对大豆7S球蛋白导致的IPEC-J2细胞屏障功能损伤发挥保护作用,而10 000 μmol·L^-1 V_A反而加重了这种损伤。     

丙酸对山羊小肠上皮细胞糖异生途径关键基因表达的影响

为探究丙酸对山羊小肠上皮细胞(GIEC)糖异生途径关键基因表达是否有影响,试验分为2个部分:第1部分分为4个处理组,分别添加0、0.75、1.50和3.00mmol/L丙酸培养GIEC,6h后收集细胞提取总RNA;第2个部分分为2个处理组,分别添加0和3.00mmol/L丙酸培养GIEC,培养3、6、12和24h时,收集细胞提取总RNA。通过qRT-PCR对糖异生途径关键基因的mRNA表达量进行测定。结果表明,0.75和1.50mmol/L丙酸对PC、FBP1和PGC1A的mRNA表达量无显著影响(P0.05);1.50mmol/L丙酸可显著增加PCK2的mRNA表达量(P0.05);3.00mmol/L丙酸可显著增加PCK2和PGC1A的mRNA表达量(P0.05),还可上调PC和FBP1 mRNA表达量但无差异(P0.05)。与未处理组相比,3.00mmol/L丙酸在6h时可极显著上调PCK2和PGC1A的mRNA表达量(P0.01),还可增加PC和FBP1的mRNA表达量(P0.05);在12～24h对糖异生途径关键基因没有影响(P0.05)。综上,丙酸可以在山羊小肠细胞中诱导糖异生途径关键基因PCK2、PC、FBP1和PGC1A的mRNA表达,并且PCK2在山羊小肠上皮细胞糖异生途径中发挥关键作用。     

仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养及鉴定

 【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18（ETEC F18）引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1 的CDS区第307位点处的突变（G→A）,建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系（GG、GA和AA）。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上皮细胞分离效率对比表明,后一种消化方式更为有效。进而取出生12 h内未吃初乳的大白仔猪,剖腹剪取其小肠段,使用联酶混合液灌注消化分离得到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团。电镜和CK18免疫荧光染色结果均显示,小肠黏膜上皮细胞纯度达90%以上。经纯化处理,最后获得了FUT1基因型为GG和GA的两种小肠黏膜上皮细胞。仔猪原代小肠黏膜上皮细胞培养周期显示,7代前细胞生长状况良好,形态为典型的上皮细胞样,单层细胞呈铺路石排列,培养至第9代,细胞出现生长停滞、胞体空泡化等现象。【结论】最终获得了FUT1基因型为GG和GA的仔猪原代小肠黏膜上皮细胞。建立了仔猪小肠黏膜上皮细胞分离及培养方法,为后续的细胞建系工作奠定了良好的基础。     

刺五加导管特征及其与刺五加苷B·E含量相关性的分析

[目的]分析不同产地刺五加导管特征及其与刺五加苷B、E含量的相关性。[方法]以不同产地刺五加的1年生根、茎为试材,石蜡切片法制片,测定导管周长、面积,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]刺五加根中导管平均面积、周长分别为986.89μm2、141.08μm,茎中导管平均面积、周长分别为362.48μm2、88.46μm,不同产地刺五加根、茎中导管的周长、面积差异显著。刺五加茎中刺五加苷E含量与茎中导管面积呈显著相关。[结论]导管面积、周长可以作为鉴定刺五加产地来源的指标,茎中导管面积可作为茎中刺五加苷E含量的早期鉴定指标。     

银杏叶提取物对断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障的影响

旨在研究银杏叶提取物(EGB)对断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障的影响。将80头25日龄的"杜×长×大"三元杂交断奶仔猪随机分为2组,每组4个重复,每个重复10头;对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.2%EGB;试验期为28 d;测定断奶仔猪小肠黏膜免疫相关细胞数量、黏膜免疫球蛋白含量和细胞因子含量。结果表明,与对照组相比,日粮中添加0.2%EGB可显著提高断奶仔猪十二指肠、空肠和回肠上皮内淋巴细胞和杯状细胞数量(P0.05),显著提高仔猪十二指肠、空肠和回肠黏膜Ig A、IL-2、IL-4、IFN-γ含量(P0.05)。本试验表明日粮中添加0.2%EGB可提高断奶仔猪小肠黏膜免疫屏障功能。     

新生仔猪小肠上皮细胞体外培养的研究

采用灌肠消化、组织块消化、机械刮取+胰蛋白酶消化和机械刮取+胶原酶消化等4种方法对仔猪小肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cell, IEC)的体外分离培养进行了比较.结果表明,使用机械刮取+胶原酶消化法分离IEC,可简便快速地获得数量大、活性高的小肠上皮细胞,其中原代培养细胞24 h出现贴壁,7～8 d明显增殖,10～12 d贴壁细胞汇合成片,18～21 d细胞呈"铺路石"状;传代培养细胞3 h出现贴壁,3～4 d快速增殖.采用碱性磷酸酶显色反应检测,90%以上的贴壁细胞呈阳性反应.     

刺五加导管特征及其与刺五加苷B&#183;E含量相关性的分析

[目的]分析不同产地刺五加导管特征及其与刺五加苷B、E含量的相关性。[方法]以不同产地刺五加的1年生根、茎为试材,石蜡切片法制片,测定导管周长、面积,HPLC法测定刺五加苷B、E含量。[结果]刺五加根中导管平均面积、周长分别为986.89μm2、141.08μm,茎中导管平均面积、周长分别为362.48μm2、88.46μm,不同产地刺五加根、茎中导管的周长、面积差异显著。刺五加茎中刺五加苷E含量与茎中导管面积呈显著相关。[结论]导管面积、周长可以作为鉴定刺五加产地来源的指标,茎中导管面积可作为茎中刺五加苷E含量的早期鉴定指标。     

槲皮素对仔猪生长性能、肠道抗氧化及免疫相关基因表达的影响

【目的】通过分析不同含量槲皮素对仔猪生长性能、肠道抗氧化指标、炎症细胞因子分泌及紧密连接蛋白基因表达的影响,探究槲皮素在改善仔猪应激综合征的作用。【方法】选取216头健康、初始体质量为(9.5±0.5)kg(杜×长×大)仔猪,随机分为3组(对照组、试验1组和试验2组),分别饲喂基础日粮、基础日粮+200 mg·kg^-1槲皮素日粮和基础日粮+400 mg·kg^-1槲皮素日粮,每组6个重复,每个重复12头仔猪(公、母各6头),试验期为15 d。【结果】1)与对照组相比,试验1组和试验2组均提高了仔猪平均日增重,显著降低了腹泻率。2)与对照组相比,试验1组和试验2组显著提高了仔猪空肠黏膜谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性,显著降低脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。其中,GPx、SOD和CAT活性随着槲皮素添加含量提高而显著增加。3)与对照组相比,试验1组和试验...     

氟化物对体外培养猪小肠上皮细胞的影响

[目的]研究氟对体外小肠上皮细胞的影响。[方法]以小肠上皮细胞为研究对象,对猪小肠上皮细胞进行分离后,添加2.5、5.0、10.02、0.0μg/ml的氟进行培养,测定小肠上皮细胞的增殖率和碱性磷酸酶的活性。[结果]当氟添加量<10.0μg/ml时,细胞的增殖、碱性磷酸酶活性与对照组之间无显著差异;而高氟组(20.0μg/ml)小肠上皮细胞的增殖、碱性磷酸酶活性则受到显著抑制,并且小肠上皮细胞的形态由多角形变为圆形,细胞核溶解,大部分细胞死亡。[结论]该研究为进一步研究氟对体外小肠上皮细胞的危害机理奠定了基础。     

不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响

为探讨不同教槽料对断奶仔猪肠道黏膜免疫相关基因表达的影响,选取90头21日龄体质量[(6.85±0.25)kg)]相近的杜洛克×长白×大约克断奶仔猪,随机分为3组。对照组(CON)饲喂基础饲粮,优质蛋白源组(HP)在基础饲粮中添加优质蛋白原料(基础饲粮中的豆粕蛋白原料用发酵酶解豆粕、酵母提取物和小麦水解蛋白粉代替),优质蛋白源+肠道保护包组(HPP)在基础原料中添加优质蛋白原料和肠道保护包(主要成分为复合酸化剂、植物精油、复合益生菌组合)。试验期14 d。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测仔猪饲喂不同教槽料后,十二指肠、空肠、回肠、结肠黏膜TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10的基因表达量,回肠和结肠黏膜紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达情况。结果显示,与CON组相比,仔猪断奶3 d时,HPP组十二指肠IL-1β及回肠IL-1β、Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量均显著升高(P0.05);仔猪断奶7 d时,HP组和HPP组空肠、回肠TNF-α、IL-10的基因表达量升高(P0.05),并且回肠Occludin、Claudin-1、ZO-1的基因表达量显著升高(P0.05);仔猪断奶14 d时,HPP组空肠TNF-α、IL-1β、TGF-β、IL-10和回肠TGF-β的基因表达量显著升高(P0.05)。可见,断奶仔猪饲喂新型教槽料能够上调肠道黏膜免疫因子相关基因的表达量,增强早期断奶仔猪回肠和结肠黏膜中紧密连接蛋白相关基因的表达量,降低断奶应激对仔猪肠道造成的损害。     

猪源乳酸杆菌对致病性沙门菌、大肠埃希菌黏附仔猪小肠上皮细胞的影响

为了通过仔猪小肠上皮细胞(ZYM SIEC 02)体外培养模型,观察猪源乳酸杆菌对细胞的黏附作用,以及对致病性沙门菌、大肠埃希菌黏附细胞的竞争、排斥和置换作用。采用乳酸杆菌在体外与ZYM SIEC 02共同孵育镜下观察其黏附效果;乳酸杆菌与致病性沙门菌、大肠埃希菌共同黏附ZYM SIEC 02观察其黏附竞争性;用乳酸杆菌预处理ZYM SIEC 02后再加入致病性沙门菌、大肠埃希菌孵育观察其黏附排斥性;用致病性沙门菌、大肠埃希菌预处理ZYM SIEC 02后再加入乳酸杆菌孵育观察其黏附置换性。结果表明：乳酸杆菌可以黏附ZYM SIEC 02,具有剂量效应。乳酸杆菌与致病性沙门菌或大肠埃希菌同时加入细胞一起培养时,能竞争性的黏附细胞且黏附抑制率也具有剂量效应。乳酸杆菌预处理细胞后再加入致病菌,高含量乳酸杆菌（10¹⁰ mL^-1）能使致病菌的黏附率下降。但是,用致病菌预处理细胞后再加入乳酸杆菌,只有高含量的乳酸杆菌可以置换致病菌,而低含量乳酸杆菌却能增加致病菌对细胞的黏附。研究结果为乳酸菌作为微生态制剂用于临床上防治仔猪沙门菌病、大肠埃希菌病,减少食物源性污染和提高食品安全提供试验依据和理论基础。     

低共熔溶剂修饰分子印迹聚合物分离刺五加中的刺五加苷B、刺五加苷E、异嗪皮啶

以刺五加的根茎为原料,采用低共熔溶剂协同微波磁场进行萃取并对其萃取机理进行阐释。并合成了三分子模板印迹聚合物,实现对提取液中刺五加苷B、苷E、异嗪皮啶的同时吸附分离。结果表明：单因素试验得出的最优萃取条件为以氯化胆碱-乙二醇(n（氯化胆碱）∶n（乙二醇）=1∶3,V（氯化胆碱-乙二醇）∶V（H₂O）=5∶5))配制的低共熔溶剂水溶液为提取溶剂,提取料液比为m（刺五加根茎粉末）∶V（低共熔溶剂水溶液）=1 g∶10 mL,微波时间10 min,微波功率400 W。刺五加苷B、苷E、异嗪皮啶的提取率分别为0.282、1.486、0.048 5 mg·g^-1。制备同时富集三者的固相萃取柱,优化固相萃取过程,得出淋洗溶剂为1.0 mL的水,模板分子的损失率分别为10.8%、17.1%、6.9%,洗脱溶剂为2.0 mL V（甲醇）∶V（乙酸）=95∶5的甲醇-乙酸溶液（此时淋洗溶剂为0.25 mL H₂O）,洗脱后刺五加苷B、苷E、异嗪皮啶的回收率分别为92.8%、94.3%、88.4%。     

刺五加多糖对断奶仔猪生长性能和腹泻状况的影响

试验探讨了日粮中添加不同水平的刺五加多糖对30日龄断奶"杜×长×大"三元杂交仔猪生长性能及腹泻状况的影响。结果表明,处理2,3,4,5组(分别饲喂在基础日粮中添加300,600,900,1 200 mg/kg刺五加多糖)末质量、平均日增质量和平均日采食量较处理1组(对照组,饲喂基础日粮)显著提高(P0.05),处理3,4,5组料质量比显著低于处理1,2组(P0.05);处理4,5组各项指标间差异均不显著(P0.05);处理2,3,4,5组腹泻率显著低于对照组(P0.05),处理3,4,5组腹泻频率显著低于处理1,2组(P0.05),处理4,5组间无显著差异(P0.05)。由此可见,断奶仔猪日粮中添加刺五加多糖能提高末质量、平均日增质量和平均日采食量,降低料质量比、腹泻率和腹泻频率,显著改善断奶仔猪生长性能和腹泻状况。综合实际效果和经济成本,断奶仔猪日粮中刺五加多糖最适添加量为900mg/kg。     

二次制粒加工断奶过渡料对仔猪小肠功能的影响

选用360头21日龄断奶仔猪,按饲粮的制粒工艺、原料预处理不同,分成4个处理组,研究二次制粒加工断奶过渡料对仔猪小肠功能的影响.处理组1饲粮普通一次制粒并使用未膨化玉米及豆粕;处理组2饲粮一次制粒、使用膨化玉米及豆粕;处理组3采用二次制粒工艺、使用未膨化玉米及豆粕;处理组4二次制粒、使用膨化玉米及豆粕.结果表明,处理组...     

大豆异黄酮对大鼠小肠上皮细胞生长及葡萄糖和氨基酸吸收的影响

分离培养了SD大鼠的小肠上皮细胞,用3H-TdR掺入法分别检测了0、0.1、1、10、100和1 000 ng&#183;mL-1 2种大豆异黄酮(大豆黄酮和染料木素)对该细胞生长的影响,并测定了细胞碱性磷酸酶活性的变化.同时,利用翻转的离体小肠囊研究了0、0.1、0.5、1和5 μg&#183;mL-1大豆异黄酮对小肠葡萄糖与氨基酸吸收的影响,并检测了小肠黏膜总ATP酶活性的变化.结果显示:100 ng&#183;mL-1的大豆异黄酮(大豆黄酮、染料木素)能够提高该细胞3H-TdR的掺入量和碱性磷酸酶的活性,提示大豆异黄酮可能有促小肠细胞生长的活性;0.1和0.5 ng&#183;mL-1的大豆黄酮和0.5和1.0 ng&#183;mL-1的染料木素对离体小肠葡萄糖的吸收具有促进作用,而对赖氨酸与色氨酸的吸收以及小肠黏膜总ATP酶的活性没有明显影响.     

大豆异黄酮对大鼠小肠上皮细胞生长及葡萄糖和氨基酸吸收的影响

分离培养了SD大鼠的小肠上皮细胞, 用3H TdR掺入法分别检测了 0、0 1、1、10、100和 1 000ng·mL-1 2种大豆异黄酮 (大豆黄酮和染料木素) 对该细胞生长的影响, 并测定了细胞碱性磷酸酶活性的变化。同时, 利用翻转的离体小肠囊研究了 0、0 1、0 5、1和 5μg·mL-1大豆异黄酮对小肠葡萄糖与氨基酸吸收的影响, 并检测了小肠黏膜总ATP酶活性的变化。结果显示: 100ng·mL-1的大豆异黄酮 (大豆黄酮、染料木素 ) 能够提高该细胞3H TdR的掺入量和碱性磷酸酶的活性, 提示大豆异黄酮可能有促小肠细胞生长的活性; 0 1和 0 5ng·mL-1的大豆黄酮和 0 5和 1 0ng·mL-1的染料木素对离体小肠葡萄糖的吸收具有促进作用, 而对赖氨酸与色氨酸的吸收以及小肠黏膜总ATP酶的活性没有明显影响。     

断奶日龄对仔猪小肠黏膜结构的影响

为研究断奶日龄对仔猪小肠黏膜结构的影响,试验分别选用14,21,28日龄[杜×(长×大)]三元杂交断奶仔猪各44头,每一断奶日龄组仔猪按体重、性别、窝别分至4个重复组(栏),每重复11头猪,试验共用试猪132头.分别于断奶当天及断奶后第4天与第7天对屠宰试猪采集1cm空肠中段测定小肠黏膜绒毛高度与隐窝深度.试验结果表明断奶日龄对仔猪小肠黏膜绒毛高度及绒毛高度/隐窝深度比值影响不显著(P＞0.05),但显著降低断奶7天前仔猪小肠黏膜隐窝深度(P＜0.01),表明降低断奶日龄可不同程度地缓解断奶应激对仔猪小肠黏膜结构的负面影响,为早期隔离断奶的实施提供了重要的理论依据.