化学发光酶联免疫法检测鱼虾中氯霉素残留

化学发光分析法由于不需要外来光源，避免了瑞利散射和拉曼散射等噪声的影响，大大提高了信噪比。再加上灵敏的光电检测技术，使该法具有背景低、灵敏度高、线性范围宽、分析速度快、仪器简单等优点。化学发光分析法是一种有效的微量和痕量分析法，与放射免疫分析（RIA）和酶免疫分析（ELA）相比，检测时间比RIA和ELA快3～8倍，     

沙拉沙星间接竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为建立动物源性食品中沙拉沙星（SAR）残留的快速检测方法,本试验通过对盐酸沙拉沙星进行分子改造和偶联蛋白合成完全免疫原,免疫小鼠制备SAR单克隆抗体。通过棋盘法确定最佳包被原浓度及一抗稀释度,优化确定最佳反应条件,从而建立间接竞争化学发光酶联免疫（ic-CLEIA）检测方法,并通过灵敏度、精密度、交叉反应率、添加回收试验对该方法进行评价。紫外扫描结果显示,完全免疫原偶联成功;制备的SAR单克隆抗体效价达1：4×10⁶;包被原浓度为0.25 μg/mL,抗体稀释比为1：750 000,4 ℃包被过夜,5%脱脂乳封闭,竞争孵育1 h,酶标二抗稀释比为1：10 000,孵育1 h为ic-CLEIA最佳反应条件;建立的ic-CLEIA方法标准曲线呈线性,线性范围为0.0625~10 ng/mL,R²=0.995,灵敏度IC₅₀为1.45 ng/mL;其平均批内和批间变异系数均<10%;除与二氟沙星的交叉反应率达到98.08%以外,与其他氟喹诺酮类药物的交叉反应率均<8%,与其他非氟喹诺酮类药物均无交叉反应;SAR标准溶液的最低检测限（LOD）为0.32 ng/mL,SAR在鸡肉样品中的LOD为0.46 μg/kg;添加回收率在88.3%~106.7%范围内,其变异系数≤12.2%。结果表明,本研究建立的ic-CLEIA方法检测速度快、灵敏度高,适用于动物源性食品中SAR残留的大量检测,为SAR残留检测提供了新的方法。     

呋喃妥因代谢物化学发光酶联免疫检测方法的研究

对呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲(AHD)进行半抗原改造,采用活化酯法将半抗原与卵清蛋白(OVA)偶联为包被原,与标准品竞争AHD单克隆抗体的抗原结合位点,加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗,建立了AHD间接竞争化学发光酶联免疫(CLEIA)检测法,并对化学发光液、包被原与抗体最优稀释度、包被条件、封闭液和竞争时间五项参数进行优化。结果表明:该方法具有良好的特异性,IC50为0.753 ng/m L,在鸡肉组织中的检测限为0.028μg/kg,添加回收率在80.54%~102.64%之间,变异系数均小于10%。与国标中液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)和我国出入境行业标准中酶联免疫检测法(ELISA)相比,不仅降低了检测限,而且操作简便,为动物源性食品中呋喃妥因代谢物的残留提供了准确、便捷的分析检测手段。     

喹诺酮类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

喹诺酮类抗菌药(QNS)又称吡酮酸类或吡啶酮酸类,是一类较新的合成抗菌药[1],该类药物的开发可以追溯到1962年,Lesher从合成抗疟药氯喹中分离出一种副产品———萘啶酸[2],喹诺酮类历经40多年的发展,共开发出了4代喹诺酮类药物,共计50多     

酶联免疫法测定鸡肝中氯霉素残留

运用酶联免疫检测试剂盒测定鸡肝中氯霉素的残留量.氯霉素标准液浓度在 0.025～2 μg/mL范围内线性良好,r=0.995 1,鸡肝中最低检测限为0.10 μg/kg.空白添加阳性样品浓度为0.1、0.5和1.0 μg/kg时,回收率分别为86.9%、89.1%和80.0%,板内变异系数<14.6%,板间变异系数<12.0%;本方法操作简单快捷、灵敏准确、方便实用,可作为鸡肝中氯霉素残留检测的快速筛选方法.     

猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立

为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒（PRV）gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1：2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。     

酶联免疫法快速筛检洗洁精中的氯霉素

建立洗洁精中氯霉素检测方法(酶联免疫法).该方法使用乙酸乙酯提取,过Oasis HLB小柱净化,洗脱溶解后用缓冲液定容,荷兰氯霉素检测试剂盒检测,在1～10 μg/kg浓度范围内,该方法回收率为77％～119％,检测限为1μg/kg.     

抗氯霉素单克隆抗体的制备及其化学发光酶免疫法的建立

以人工合成的氯霉素-牛血清白蛋白(CAP-HS-BSA)免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术获得了一株分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)的杂交瘤细胞5D7,并对其进行效价、亲和力和特异性测定。结果显示,其分泌的抗体亚类为IgG1,间接ELISA检测细胞培养上清效价为1∶512,诱生的腹水经纯化后效价为1∶2×105,亲和常数为3.6×108L/mol;应用上述单抗建立的检测氯霉素的化学发光酶免疫分析法(ci-CLIA),其检测范围为0.001μg/L~10μg/L,检出限达0.0025μg/L,IC50为39.6μg/L,且与L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、青霉素、四环素、庆大霉素等的交叉反应率均小于0.01%,可满足我国对水产品中氯霉素残留检测的要求。     

酶联免疫法检测饲料中氯霉素的方法条件研究

酶联免疫反应检测用试剂盒是利用免疫特异性竞争原理,对饲料中氯霉素的残留进行定量检测。氯霉素作为抗生素广泛应用在养殖领域,主要是添加在饲料中使用,而这种药物长期使用会残留于动物体内,造成动物性食品中氯霉素残留量超标,进而对人体的健康造成危害。文章以酶联免疫方法检测对检测饲料中氯霉素含量加以探讨,试验证明,此方法具有操作简单、灵敏度高、重复性好,检测时间短等特点;标准曲线r值可达到0.9981,回收率≥93.45%,最低检出限≤0.05μg/kg,离散系数(CV值)≤3.6%。     

酶联免疫法检测饲料中氯霉素的探讨

酶联免疫反应检测用试剂盒是利用免疫特异性竞争原理,对饲料中氯霉素的残留进行定量检测.氯霉素作为抗生素被广泛使用在养殖领域,主要是添加在饲料中,而这种药物长期使用会残留于动物体内,造成动物性食品中氯霉素残留量超标,进而对人体健康造成危害.酶联免疫方法对检测饲料中氯霉素含量,试验证明:此方法具有操作简单、灵敏度高、重复性好及检测时间短等特点;标准曲线r值可达到0.998 1,回收率≥93.45 %,最低检出限≤0.05 μg/kg,离散系数(CV值)≤3.6 %.     

Evaluation of the PATHFAST Chemiluminescent Enzyme Immunoassay for Measuring Progesterone in Whole Blood and Serum of Mares

Evaluation of a new chemiluminescent enzyme immunoassay, the PATHFAST assay system (PATHFAST), for measurement of circulating progesterone in mares was performed. Five mares at the mid-luteal stage were administrated a single i.m. injection of prostaglandin F2α analog (PGF2α; cloprostenol 250 μg/ml), and then blood samples were collected from the jugular vein at 0, 15, 30 and 45 min, at one-hour intervals until 24 and at 48 hr via a catheter in the jugular vein. To monitor the physiological changes in circulating progesterone in mares after induced luteolysis, concentrations of progesterone in whole blood and serum samples were measured by PATHFAST. In addition, concentrations of progesterone in serum samples measured by PATHFAST were compared with those measured by radioimmunoassay (RIA) and enzyme immunoassay (EIA). Using PATHFAST, the serum concentrations of progesterone in mares correlated highly with those of whole blood samples (r=0.9672, n=88). The serum concentrations of progesterone as measured by PATHFAST correlated well with RIA (r=0.9654, n=88) and EIA (r=0.9323, n=112). An abrupt decline in circulating progesterone in whole blood samples was observed within 2 hr (50%), followed by a gradual decline until 48 hr later. The results for progesterone in whole blood samples correlated highly with those in serum samples, and the declining pattern paralleled that of the serum samples. These results demonstrated that PATHFAST is useful in the equine clinic as an accurate diagnostic tool for rapid assay of progesterone within 26 min, using unextracted whole blood.     

鸡血清中磺胺二甲嘧啶残留的酶免疫法测定

用直接竞争酶免疫测定法测定磺胺二甲嘧啶（ＳＭ２）在鸡血清中的残留,血清中的ＳＭ２与酶标ＳＭ２竞争酶联板上的抗ＳＭ２抗体的结合位点,最低检出限为５０μｇ／Ｌ。在１００μｇ／Ｌ处,回收率为９１％。对１１种磺胺类和非磺胺类药物进行测定,最大交叉反应只有０．５％。     

氯霉素人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

将氯霉素以重氮化方法使之分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、人血清白蛋白(HSA)载体蛋白连接,三种偶联物选择其中两个分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及ELISA试验熏结果产生了特异性抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与氯霉素反应明显熏与其他类似物交叉反应不明显。     

酶免疫分析测定法诊断奶牛早期妊娠诊断的研究与应用进展

介绍了酶免疫分析测定法的概念、种类、作用机理,及其在奶牛早期妊娠诊断的研究应用和孕酮酶免疫试剂盒的研究与应用。     

雌二醇与孕酮奶样纸片酶免法建立及其临床应用

乳汁雌二醇与孕酮含量是判断母牛卵巢机能状态的重要指标。本试验建立了雌二醇与孕酮奶样纸片酶免法,并用于测定不同定时排卵程序中母牛乳汁雌二醇与孕酮含量,结果表明所建立的方法简便实用,排卵程序中母牛乳汁孕酮、雌二醇含量变化规律与理论分析相符,可以用来判定母牛发情、妊娠及卵巢功能。