抗磷酸酷氨酸抗体的制备

制备抗磷酸酷氨酸抗体。方法；以ＥＤＣ交联法合成磷酸酷所酸牛血清白蛋白；以Ｐ－Ｔｙｒ－ＢＳＡ免疫新西兰兔，抗血清经硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ纤维素柱层纯化；以琼脂糖双扩法测定抗体效坐。结果：得到抗血清效价为１：３２，抗血清与牛血清蛋白交叉反应的效价为１：２。纯化的抗体与磷酸酷氨酸的牛血清白蛋白，磷酸酪氨酸卵清蛋白，磷酸丝氨酸牛血清白蛋白，磷酸苏氨酸牛血清白蛋白反应效价分别为１：３２，１：１６，１：２，１：     

猪生长激素抗独特型抗体的制备及生物活性检测

【目的】以鼠肝细胞为模型,在细胞水平上研究猪生长激素抗独特型抗体的作用机制。【方法】以猪生长激素单克隆抗体1A5-F(ab′)2部分免疫BALB/c鼠,采用杂交瘤细胞技术制备猪生长激素抗独特型单克隆抗体。分离Wistar大鼠肝脏细胞,以其为模型,采用流式分析、激光共聚焦显微镜观察、Western-blot等技术手段,研究猪生长激素抗独特型单克隆抗体的生物活性。【结果】成功制备了3株猪生长激素抗独特型单克隆抗体,分别命名为CG1、CG2、CG3。其中,CG1阳性信号最强,经鉴定,CG1为Ab2β类抗独特型抗体,属于IgG2a亚类。CG1能够以二聚体的形式激活鼠肝细胞表面的生长激素受体,并可激活信号转导蛋白JAK2。【结论】CG1抗体可与鼠肝脏细胞表面的生长激素受体特异性地结合,并可磷酸化信号转导蛋白JAK2。     

抗DDA抗体的制备及其特性研究

制备抗DDA抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附实验(Indrect Competitive Enzyme-linked Immunosorbent Assay,idc-ELISA)方法,以测定海水样品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕(DDT)代谢产物.采用碳二亚胺法,将半抗原DDA分别与载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine semm albumin,BSA)和卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,得到完全抗原.以DDA-BSA为抗原,免疫BALB/c小鼠,制备抗DDA抗体.研究表明,5只鼠产生的抗体对DDA都能产生灵敏的特异性免疫反应,以DDA-OVA为包被抗原,用5#抗体建立间接竞争ELISA方法检测海水样品和海洋贝类中的有机氯农药DDT代谢产物DDA,最低检出限为:10.0 ng·mL-1,海水加标样平均回收率122%,批间变异系数30%,贝类加标样平均回收率为131%,批间变异系数22%.     

PRRSV抗GP5和抗M蛋白抗抗体的制备及免疫作用的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗抗体(Ab2),探讨Ab2在不同的动物体内诱导机体产生免疫作用的研究。用已纯化的抗PRRSV-GP5(GP5-Ab1)单抗和抗PRRSV-M(M-Ab1)单抗免疫哈尔滨大白兔,当免疫血清琼扩效价达1∶16时,则加强免疫1次心脏采血分离血清,分别纯化兔抗抗PRRSV-GP5 IgG(GP5-Ab2)和抗抗PRRSV-M IgG(M-Ab2)血清。用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型3种分别免疫昆明小鼠和未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照。免疫后第21 d分别采集小鼠血清和猪血清,用PRRSV作抗原包被,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的小鼠血清和猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。说明制备的Ab2在不同动物体内均能引起机体产生免疫反应,从而为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。     

132例原发性干燥综合征抗SSA、抗SSB抗体的检测与系统性损害

目的：分析132例原发性干燥综合征(PSS)系统损害与抗SSA、抗SSB抗体之间的关系。方法：采用对流免疫电泳法(CIEE)和免疫印迹(IBT)法检测132例PSS患者血清中抗SSA、抗SSB抗体。结果：PSS患者抗SSA、抗SSB抗体阳性组出现系统性损害发生率75．0％，而阴性组仅为16．7％，两组差异有显著性(P＜0．01)。结论：抗SSA、抗SSB抗体与PSS的系统性损害密切相关，它代表了不同的临床类型，对PSS病情临床评价具有重要的指导意义。     

兔抗甲胺磷多克隆抗体的制备

采用水溶性碳化二亚胺法（EDC），将MTR与牛血清蛋白（BSA）、人血清蛋白（HSA）和鸡卵清蛋白（OVA）共价偶联，分别合成免疫抗原MTP－BSA、MTP－HSA和包被抗原甲胺磷－鸡卵清蛋白（MTP－OVA），用合成的免疫抗原对新西兰大白兔进行免疫，制得抗血清经鉴定确证为兔抗MTP多克隆抗体（polyclonal antibody,PAB)，效价分别为1：15000和1：12000。     

联合检测类风湿因子、抗角蛋白抗体及抗环瓜氨酸多肽抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨类风湿因子（RF）、抗角蛋白抗体（AKA）及抗环瓜氨酸多肽（CCP）抗体联合检测对类风湿性关节炎（RA）的临床诊断价值。方法对83例RA和106例非RA患者用速率散射比浊法检测RF,间接免疫荧光染色法检测AKA,酶联免疫吸附法检测抗CCP抗体,并对3种指标检测进行比较分析。结果3种抗体单独检测对RA诊断的敏感性、特异性分别是：RF为71．1％、74．5％,AKA为49．4％、95．3％,抗CCP抗体为65．1％、94．3％;不同方式联合检测对RA诊断的敏感性、特异性分别是RF＋AKA为34．9％、97．2％,RF＋抗CCP抗体为45．8％、98．1％,RF＋AKA＋抗CCP抗体为28．9％、100％;RF在AKA、抗CCP抗体分别阴性的RA患者中检出率分别为28．6％和34．5％;AKA和抗CCP抗体在RF阴性的RA患者中分别有45．8％和62．5％的阳性率。结论单独检测RF对RA诊断的敏感性最高,特异性最高的是AKA,抗CCP抗体有较高的的敏感性及特异性,3种指标各有优点,可互为补充,联合检测RF、AKA及抗CCP抗体可提高对RA诊断的特异性,有助于早期RA的诊断。     

别藻蓝蛋白标记抗鸡IgG荧光抗抗体的高效制备与鉴定

将别藻蓝蛋白(Allophycocyanin,APC)与抗鸡IgG抗体交联制备荧光抗抗体,用于鸡疫病的间接荧光检测.首先采用羟基磷灰石层析和阴离子交换层析法高效制备APC,然后利用蛋白质交联技术高效制备荧光抗抗体.分别用摩尔比50:1、100:1的交联剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(SPDP)将APC、抗鸡IgG抗体衍生,衍生物以摩尔比1:1液相交联,经高压液相色谱(HPLC)纯化制备出APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体,最后对制备的荧光抗抗体从荧光特性、吸收光谱特性、抗体活性、稳定性及纯度等方面进行鉴定.结果表明,APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体交联效率达95%以上,纯度达电泳纯,红色荧光明亮,抗体活性高,4 ℃保存90 d荧光亮度和抗体活性稳定.研制的APC标记的抗鸡IgG荧光抗抗体可作为通用荧光抗抗体用于鸡传染性疾病的间接免疫荧光检测.     

小麦叶片Rubisco抗体的制备及其应用

利用DEAE TOYOPEARL 650M快流速阴离子交换层析技术,1d内可收集高纯度的Rubisco。以纯化的Rubisco为抗原,免疫新西兰白兔,得Rubisco抗体。以Rubisco抗体建立单向免疫扩散法,定量测定Rubisco含量,研究小麦叶片光合作用日变化过程中Rubisco含量及其活力的变化。结果表明:单向免疫扩散法可用于小麦叶片Rubisco含量的测定。     

抗兔病毒性出血症病毒单克隆抗体的制备

通过抗兔病毒性出血症病毒(RHDV)杂交瘤细胞株的筛选,其中一株连续克隆3次,在培养瓶中传代1个月,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定,分泌单克隆抗体(McAb)性能稳定。杂交瘤细胞株的小鼠腹水滴度为1:1600～1:3200。利用McAb腹水作一抗,经免疫荧光检测RHDV感染的细胞片,可发现细胞核内有特异性荧光颗粒,滴度为1:200。杂交瘤细胞株染色体的分析,染色体数在98±10,符合杂交瘤细胞株的特征。经琼脂扩散法对McAb亚类的分析测定结果与抗鼠IgG和IgG_3出现沉淀线。     

鸡新城疫卵黄荧光抗体的制备及其应用

本试验以鸡新城疫强毒株,采用大剂量连续强化免疫的方法免疫产卵母鸡,获得了含有高效价抗新城疫抗体的鸡卵。在室温条件下,用硫酸葡聚糖钠沉淀的方法,从免疫鸡卵黄液内提取出高效价的、比较纯净的IgG。以异硫氰酸荧光素标记提纯的卵黄IgG所制成的荧光抗体,对人工感染的鸡胚、鸡只和细胞培养物染色检查的结果表明,卵黄荧光抗体具有特异性强、制备方法简便、成本低廉、保存期长而不改变染色性能等优点。因此,本试验所研创的荧光抗体制备法具有广泛的应用和推广价值。     

兔抗褪黑激素高免血清的制备、提取和纯化

运用Mannich法,将褪黑激素(MLT)与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备成完全抗原.经UV-260紫外分光光度仪测定,MLT与BSA的连接比为121.5只新西兰大耳兔用此抗原免疫6次后,ELISA和RIA抗体效价分别平均114000和1150000.抗血清经Na2SO4沉淀和Sephedex-G-200层析后收集纯化抗体,用721分光光度计测其蛋白浓度.通过5-羟色胺阻断试验证明抗体特异性较高.     

抗牛H—Y抗原单克隆抗体的研制试验

Ｈ－Ｙ抗原是位于Ｙ染色体上的基因位点所编码的细胞膜抗原，能直接或间接地诱导原始性腺分化为睾丸，以牛睾丸组织匀浆作为抗原，免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，用杂交瘤细胞技术制备的单克隆缺本６Ｆ，７Ｈ与部分牛精子呈阳性反应。     

兔病毒性出血症(RHD)母源抗体的测定

应用本课题组研究建立的PPA-ELISA简接法,对孕期和产后不同阶段的RHD血清抗体测定,结果表明.仔兔通过胎盘及初乳获得母源抗体;抗体滴度与母兔相当;母源抗体在30天内降至阴性水平。     

7日龄内仔猪肠道吸收猪瘟抗体的初步研究

对27头出生7日龄以内健康的仔猪,采用隔离饲养,全部人工喂养牛奶方法,并在牛奶中添加不同剂量的猪瘟抗体,喂养不同时间,以空白和肌肉注射作对照,利用间接血凝试验（IHA）方法测定其仔猪血清猪瘟抗体效价的变化。结果表明,随着猪瘟抗体剂量的增加,仔猪血清猪瘟抗体效价增高;在相同剂量的组别中,随着饲喂猪瘟抗体日龄的延长,吸收总量的增加,但吸收比例逐渐降低,效价也降低。该试验说明,初生仔猪消化道吸收猪瘟抗体与吃乳乳中抗体剂量和饲喂时间有关,但口服肠道吸收不全,而肌注后仔猪血清很快达到和维持较高水平。     

家蚕微孢子虫抗体免疫荧光检测方法的建立及应用

通过制备家蚕微孢子虫总蛋白多克隆抗体,建立了多克隆抗体免疲荧光检测方法（IFA）,并利用此方法特异性地检测出了体外培养细胞系（家蚤胚胎细胞系BmE—SWUI）中处于不同发育阶段的家蚤微孢子虫。结果在细胞爬片中可观察到呈较强的黄绿色荧光微孢子虫以及在BmE—SWU1细胞中的寄生分布情况,还可看到孢子极丝的弹出等现象。IFA检测方法鉴别诊断家蚕微粒子虫具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好、操作简便等特点,可以广泛应用于微孢子虫形态学、流行病学以及蛋白质的定位等研究领域。     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

鸡抗TMV的I_gY抗体的制备和血清学试验

从烟草花叶病毒(TMV)免疫母鸡的蛋黄中提取免疫球蛋白I_gY。试验结果表明,免疫后10天,抗体就达较高滴度(1:1024)。停止免疫后14个月,滴度仍保持在1:64。在琼脂糖凝胶扩散试验中,当PH7.0,NaCl浓度为3.5—5%时,可获得最理想沉淀线。以碱性磷酸酶(AKP)标记抗体I_gY成功地检测出了TMV。用一种病毒免疫兔和母鸡可取得两种抗体(I_gG和I_gY),必将有助于间接酶标的研究。