杂交瘤技术与单克隆抗体

本文从杂交瘤技术原理、单克隆抗体制备流程及应用现状3个方面,介绍了单克隆抗体技术的研究现状,为实验室工作者研究疾病诊断方法提供参考资料。     

抗兔轮状病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用小鼠骨髓瘤细胞与经兔轮状病毒免疫的ＢＡＬＢ／ｃ系小鼠脾细胞进行融合，融合成功率为２２％。经间接酶联免疫吸附试验和斑点酶联免疫筛选杂交瘤细胞，阳性率为２９％左右。对其中６株强阳性的杂交瘤细胞进行了亚克隆，获得高产亚克隆杂交瘤细胞，用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠生产了腹水，鉴定后选取２株强阳性高效价的杂交瘤细胞，以ＥＬＩＳＡ阻断试验检验其分泌抗体的特异性，以直接ＥＬＩＳＡ测其敏感性，用琼脂双扩散试验鉴定类和亚类     

单克隆抗体杂交瘤技术中成败的原因分析

单克隆抗体技术自1975年问世以来，已在生物一医学领域获得了日益广泛的应用。在兽医界这一技术在动物疾病的快速诊断,病原体精确分型、疫苗制造、检疫、抗原提纯和流行病学研究等方面也已得到应用。 用杂交瘤技术制备单克隆抗体,试验周期长,环节多,所以影响因素也比较多,稍     

杂交瘤技术和单克隆抗体的专利问题

单抗药物已代替重组蛋白药物成为生物技术药品的主导产品.上世纪80年代末以来,利用基因工程手段构建嵌合抗体或人源化抗体为发展治疗性单抗药物带来突破.     

抗绵羊肺炎支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用绵羊肺炎支原体抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取血清抗体阳性免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在聚乙二醇作用下进行融合，产生杂交瘤细胞、用间接ＥＬＩＳＡ法对杂交瘤一长孔上清液进行检测，筛阳性交瘤细胞株。     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

分泌抗犬细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将用犬细小病毒(CPV)免疫的BALB/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用血凝抑制试验(HI)筛选,以有限稀释法克隆3次,得到6株分泌抗CPV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,其中4株分泌IgG_1,2株分泌IgM;6株杂交瘤细胞染色体数目介于96—103之间;在半年传代期间(45代),均能稳定地分泌McAb。将杂交瘤细胞注射BALB/C小鼠诱生腹水,其HI效价介于1:128—1:512之间,置-20℃保存1年,其效价不变。用交又HI法对2株单克隆抗体作特异性分析,该McAb只特异地与CPV发生反应,而不与猫泛白细胞减少症病毒(FPLV)、水貂肠炎病毒(MEV)发生反应。     

抗新城疫单克隆抗体的制备与特异性分析

以蔗糖反透析浓缩及Sephadex G-200层析纯化F48E8和LaSota新城疫病毒(NDV)，取纯化的病毒液免疫接种BALB／c小鼠，将小鼠脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合，经次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT)培养基选择，间接ELISA检测，有限稀释法克隆，筛选出了3株杂交瘤细胞，依次命名为1D4、1D5、16G12。3株杂交瘤细胞的染色体数为80～100，并能稳定传代，其产生的单克隆抗体重链属于IgG1，轻链属于κ链；ELISA检测时仅与NDV发生特异性反应，而与其他常见禽类病毒抗原不出现交叉反应，应用这些单克隆抗体对NDV分离株进行了分群研究。     

分泌抗赭曲霉素A单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用赭曲霉素Ａ（ＯＡ）－ＢＳＡ合成抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ｓｐ２／０细胞融合，通过克隆和ＥＬＩＳＡ法筛选，建立三株泌抗ＯＡ单克隆抗体杂交瘤细胞株（３Ｃ１２，１Ｄ１２和２Ｇ７）。用间接ＥＬＩＳＡ法测定，细胞上清液抗体效价为１２８＾×（３Ｃ１２）和６４＾×（１Ｄ１２和２Ｇ７）腹水抗体效价为１０＾－７（３Ｃ１２，１Ｄ１２）和１０＾－６（２Ｇ７）。三株单抗（ＭｃＡｂ）均属ＩｇＧ类，分泌抗体     

猪瘟病毒C株杂交瘤细胞的构建及单克隆抗体的制备与鉴定

采用猪瘟病毒C株毒（CSFV C strain）免疫BALB/C小鼠,按照常规单克隆抗体制作方法构建并筛选出能稳定分泌抗猪瘟单克隆抗体杂交瘤细胞株4株,分别命名为1C9,1B11,3C8和3G9,经鉴定,4株单克隆抗体腹水效价达到104~106。交叉试验及特异性试验表明,所制备的McAb与鸽新城疫病毒、猪蓝耳病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、鸡减蛋综合征病毒无交叉反应性,均完全针对猪瘟病毒（CSFV）抗原决定簇,具有高度特异性。抗CSFV McAb的成功制备,为进一步研究建立CSFV的快速诊断方法奠定了基础。