36种中草药提取物杀松材线虫活性研究

为了从中草药中寻找高效杀线虫活性物质,本文测定了36种中草药提取物对松材线虫及其卵的毒杀活性。结果表明,牡丹皮、黄连和大黄3种中药的乙醇提取物杀线虫活性较强,以提取物浓度为10 g/L处理松材线虫72 h后,校正死亡率均为100%。3种中药提取物处理松材线虫72 h后半致死浓度（LC50）分别为1.81、0.2638和1.07 g/L。杀卵活性结果表明,3种中药提取物处理72 h后,线虫卵的孵化率均低于20%,虫卵的校正死亡率均高于60%。利用乙酸乙酯和水作溶剂对3种中草药进行初步的杀线活性成分分离的结果表明,牡丹皮的杀线活性物质存在于乙酸乙酯萃取物中,黄连和大黄的杀线活性物质存在于水萃取物中。3种中药的不同萃取物处理松材线虫72 h后的LC50分别为0.712、2.370和0.067 g/L。     

松材线虫生物防治研究进展

本文综述了国内外对松材线虫生物防治的研究报道,提出了目前生物防治松材线虫的研究方向。     

20-(S)-喜树碱7-C-取代衍生物的合成及杀松材线虫活性研究

为研究喜树碱(CPT)类化合物的杀线虫活性,以喜树碱为原料,经烷基化、氧化、酯化等步骤合成了13个7-C-取代的20-(S)-喜树碱衍生物,其中化合物 14 未见文献报道,所有衍生物的结构经红外光谱(FT-IR)、核磁共振氢谱(1H NMR)和液-质联用(LC-MS)等分析手段进行了表征。采用浸渍法测定了化合物对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的毒杀活性。结果表明:与母体化合物喜树碱相比,7-C-取代的20-(S)-喜树碱衍生物具有更强的杀线虫活性,其中化合物7-苄基喜树碱、7-甲酰基喜树碱、7-苯甲酰氧甲基喜树碱在24 h的致死中浓度(LC50值)分别为2.28、2.21和1.37 mg/L,明显高于母体化合物喜树碱的LC50值12.18 mg /L。     

茶皂素杀线虫活性测定分析

 茶皂素(Tea saponin, TS)是由各类茶籽(油茶Thea sinesis或茶Camellia sasauqua)饼粕中提取出来的五环三萜类化合物,具表面活性、生理活性和鱼毒活性以及溶血性等。近10年来,国内有关TS杀虫抑菌活性有较多的研究报道,但未见杀线虫活性方面的报道。     

一株毒杀松材线虫的解淀粉芽孢杆菌活性物质的基本性质

从马尾松林中筛选出的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens JK-JS3菌株对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus具有较高杀线活性。本试验对JK-JS3菌株分泌的杀线活性物质的基本性质进行了研究。结果表明：该菌株产生的杀线组分是可随水分一同蒸发的非蛋白质类物质;其吸收峰在190nm到200nm之间;常温25℃和冷藏4℃下保存60d仍能保持杀线活性;不同温度和pH条件对其杀线组分的活性有影响,加热会降低其活性,碱性条件下具有较高的杀线活性;石油醚、氯仿、乙酸乙酯等有机溶剂不能将其活性物质从粗提液中提取。     

香子含笑中的杀线虫活性成分及其毒力测定

根据活性追踪分离，从香子含笑叶的乙酸乙酯提取物中分离纯化到一个杀线虫的倍半萜。通过质谱、核磁共振的光谱数据，鉴定该化合物为小白菊内酯。生物活性测定结果表明小白菊内酯对所测试的松材线虫和全齿复活线虫具有毒杀作用，浓度200μg／ml对两种线虫进行处理，48h的死亡率分别为70．4％和100％。     

毒杀南方根结线虫的木霉种类鉴定及活性研究

木霉是国际上研究与应用非常普遍的生防真菌之一,具有重要的科研价值和广阔的应用前景。本研究采用形态学鉴定、ITS和β-tubulin序列分析法对4株具有杀线虫活性的木霉菌株进行种类鉴定,结果显示FT311和FT312为绿色木霉(Trichoderma viride),FT1937和FT85为哈茨木霉(T.harzianum)。利用贝氏皿浸没法测定,4株木霉发酵滤液均能显著降低南方根结线虫卵的孵化和2龄幼虫(J2)的活性,其中FT1937和FT85对卵孵化抑制率和J2致死率均达到85%~92%,而FT311能够达到80%~85%,但FT312毒性较低,仅达40%~60%;2株哈茨木霉的活性好于2株绿色木霉;同时观察到发酵液对线虫卵和幼虫体壁有消解作用、抑制和延迟卵孵化,并使幼虫体内空泡化。本研究为根结线虫病害的生防防治提供了更多的木霉资源信息。     

苏云金芽孢杆菌对松材线虫的杀线活性

在室内条件下,测定了17株苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体蛋白对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的杀线活性。通过初筛,发现菌株020、RBT-200701的伴孢晶体蛋白对松材线虫有明显毒杀作用。在测试的浓度范围内（菌株020为6.37-203.9μg/ml;RBT-200701为13.7-438.8μg/ml）,菌株对松材线虫的校正死亡率随其浓度增大而提高;随时间延长杀虫效果提高。020菌株晶体蛋白24h、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为183.20、408.20μg/ml和80.132、25.29μg/ml;RBT-200701菌株伴孢晶体蛋白24、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为368.00、868.00μg/ml和82.73、382.73μg/ml。SDS-PAGE分析发现这2个菌株晶体蛋白的蛋白图谱不同。     

ganA在路德维希肠杆菌杀松材线虫中的功能解析

生防微生物已被用于防控松材线虫病,但其杀线防病的分子机制尚不明确。本研究发现,经路德维希肠杆菌AA4处理后,松材线虫的校正死亡率达85%以上,菌株AA4能够显著减轻松树幼苗上松材线虫病的发生。为了探究AA4抑杀松材线虫的分子机制,本研究采用DNA同源重组技术,构建了菌株AA4 β-半乳糖苷酶基因ganA的敲除突变体,并对ganA在AA4抑杀线虫中的功能进行了解析。研究结果表明,敲除ganA后,突变体菌株抑杀松材线虫与防治松材线虫病的效果均显著降低,菌株的运动性与其在线虫上的定殖能力亦显著减弱。此外,与野生型菌株相比,gan A敲除突变体菌株限制线虫运动的能力显著减弱。因此,gan A可能通过调控AA4定殖松材线虫与限制线虫运动的能力,在AA4抑杀松材线虫中发挥重要功能。     

拮抗南方根结线虫PKS基因的筛选及活性评价

土壤环境中蕴藏着巨大的微生物资源,而99%的土壤微生物不能用传统的纯培养。本研究基于西藏米拉山高寒草甸土壤微生物宏基因组Fosmid文库,采用PCR方法从文库中筛选PKS基因,以南方根结线虫(Meloido-gyne incognita)为靶标测定其杀线活性,并验证温室盆栽防效。从Fosmid文库中筛选得到2个含PKS基因的克隆K99和K82。K99属于Ⅰ型PKS,K82属于杂合PKS/NRPS;K99发酵液、热处理发酵液浸泡南方根结线虫J2 12 h后,杀线活性为100%。温室盆栽防效结果表明,K99的发酵菌液对南方根结线虫的防效为89%。K99能产生一种外分泌有杀线活性的物质,其热稳定性好,具有重要的开发利用价值。     

Antinematodal activity of some Malaysian plant extracts against the pine wood nematode,Bursaphelenchus xylophilus

Methanolic extracts of 79 Malaysian plants representing 42 families were assessed for antinematodal activity against Bursaphelenchus xylophilus using a fungal-feeding assay. Extracts of 27 plants from 19 families showed antinematodal activity, while 52 species were inactive. Five extracts (Sauropus androgynus, Eugenia polyantha, Areca catechu, Piper betle and Piper nigrum) exhibited very strong activity against Bursaphelenchus xylophilus at a minimum effective dose (MED) of 0·625 mg per ball. Strong antinematodal activity (MED: 1·25–2·5 mg per ball) was shown by the extracts of Spondias cyntherea, Codiageum variegatum, Euodia glabra and Cicca acida. Eleven extracts (Carica papaya, Ipomoea aquatica, Ocimum basilicum, Leea gigantea, Pithecellobium jiringa, Crypteronia paniculata, Myristica fragrans, Murraya koenigii, Leucaena leucocephala, Melastoma malabathricum and Morinda citrifolia) demonstrated moderate activity between MED of 5 and 10 mg per ball, and weak activity was observed in seven extracts (Ipomoea batatas, Cymbopogon citratus, Garcinia atroviridis, Psophocarpus tetragonolobus, Tamarindus indica, Allium odorum and Stenochalaena palustris). © 1997 SCI     

松材线虫自然侵染后对不同松树组织结构的影响

 利用滑走切片技术从显微水平研究松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）在自然状态下入侵,对马尾松（Pinus massoniana）和黑松（Pinus thunbergii）显微结构的影响。结果表明,马尾松和黑松的组织结构在感病初期即表现出病变特征,并随感病时间推移病变加剧。马尾松在感病初期皮层薄壁细胞开始木质化,伴有细胞破裂并融合成空腔;至感病中期周皮的栓内层细胞、皮层薄壁细胞以及韧皮部薄壁细胞均发生木质化,细胞内含物增多,甚至形成层细胞也发生一定程度的木质化现象,树脂道因周围细胞破裂而变形;至感病晚期,木材以外所有部分完全被木质化、大量细胞破裂。黑松发病症状与马尾松大致相同但发病时间稍晚,发病程度也较轻,这可能是因为两者对松材线虫病的抗性强弱有差异。同一时期的组织病理学特征在空间上也存有差异,这与松材线虫入侵的位置及其在树体内的分布有关。     

Emamectin benzoate as a candidate for a trunk‐injection agent against the pine wood nematode,Bursaphelenchus xylophilus

In order to develop an effective trunk‐injection agent against pine wood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, an in vitro assay was used to examine the antinematodal activity of 58 commercially available compounds with known modes of action. Among compounds tested, the GABA receptor agonists had better anti‐nematodal activity than compounds influencing glutamate, N‐methyl‐D ‐aspartate, β‐adrenergic, dopamine, muscarinic acetylcholine and nicotinic acetylcholine receptors, as well as those inhibiting acetylcholinesterase, monoamine oxidase, 5‐hydroxytryptamine uptake and Ca²⁺, K⁺, Na⁺ and Cl⁻ channels. Avermectins and milbemycins strongly inhibited propagation of the nematode. Emamectin benzoate proved to be the most active (IC₉₅ 0.050 µM ) being over 140 times more active than the active ingredient of conventional trunk‐injection agents. It is concluded that emamectin benzoate is a strong candidate for an anti‐nematodal trunk injection agent. © 2000 Society of Chemical Industry     

利用RNAi分析松材线虫ncr基因功能

由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)侵染引起的松材线虫病是松属植物的重要病害之一,其繁殖和传播速度快,防治困难。RNAi技术是目前研究植物寄生线虫基因功能的重要手段。本文利用农杆菌介导灰葡萄孢菌表达松材线虫ncr基因的dsRNA(PDH-RH-NCR),并连续多代喂饲松材线虫使ncr基因表达稳定下调后分析其表型。结果表明,在转有PDH-RH-NCR的灰葡萄孢菌上连续培养10代的松材线虫,ncr基因表达量显著下调13倍。ncr基因表达下调后,线虫发育缓慢,繁殖力也显著降低;处理4 d后发育成成虫的百分率为61.75%,显著低于PDH-RH-s GFP(89.75%)和空载体(88.75%)处理;而9 d的繁殖量则较PDH-RH-s GFP和空载体处理分别少2 314和2 347条。松材线虫ncr基因表达下调后,4龄幼虫平均寿命(20.9 d)和体内脂肪量(1.340 nmol)则显著高于PDH-RH-s GFP(15.5 d,0.336 nmol)和空载体(15.2 d,0.323 nmol)处理。通过喂饲法RNAi发现松材线虫ncr基因可能与松材线虫的发育速度、繁殖量、寿命、脂肪积累等表型相关。     

松材线虫伴生细菌宏基因组fosmid文库构建及特征分析

 松材线虫是松材线虫病的病原,且与其伴生细菌之间存在互作。为研究松材线虫和伴生细菌的互作关系,本研究用Nycodenz介质离心和SDS裂解法富集松材线虫的伴生细菌,以酚/氯仿抽提法提取DNA,构建了松材线虫伴生细菌fosmid宏基因组文库。文库克隆的插入片段大小分布在30~45kb,平均长度为40kb。该文库包含19200个克隆,共计包含7680000kb DNA。文库稳定性检测表明插入的DNA片段能够在fosmid质粒中稳定遗传,没有发现插入片段丢失或重排。随机挑选96个克隆进行末端测序,BLAST分析表明:该文库中松材线虫序列占5.2%,细菌序列占64.6%,无同源序列14.6%。对伴生细菌多样性分析表明:Stenotrophomonas为优势种群,Sphingomonas、Cupriavidus和Pseudomonas为次优势种群。该文库的建立为揭示松材线虫与其伴生细菌的互作关系及伴生细菌的生态功能奠定了基础。     

溴甲烷对松木片中松材线虫的熏蒸作用

采用二次正交旋转组合设计,在室内条件下研究了溴甲烷剂量、熏蒸处理时间和处理温度对松木片中松材线虫熏蒸效果的影响。结果表明,溴甲烷剂量是影响熏蒸效果的最主要因子;14、18 ℃和22 ℃条件下处理24 h,松材线虫死亡率达99.9%时的溴甲烷浓度分别为17.92、16.07、14.87 g/m3; 14、18、22 ℃条件下,松材线虫死亡率达99.9%时,溴甲烷浓度和时间乘积,即CT（99.9）分别为192.52、174.705、166.229 g•h/m3。溴甲烷可用于口岸松木片中松材线虫的除害处理。     

4,5,5-三氟-N-(杂芳基甲基)戊-4-烯酰胺的合成及杀线虫活性

植物寄生线虫可能对全球农作物造成严重的危害.本研究设计合成了15个未见文献报道的4,5,5-三氟戊-4-烯酰胺衍生物,并测定了它们的离体活性和在沙土中的活体杀线虫活性,且进一步研究了沙土活体活性较好的化合物在基质中的活体杀线虫活性.离体测试结果表明:部分目标化合物表现出较好的杀线虫活性,其中含呋喃环的化合物B8对南方根...