农杆菌介导高羊茅基因转化体系的建立

以高羊茅(FestucaarundinaceaSchrebb)品系宾哥(Bingo)为材料,建立了农杆菌介导的基因转化方法。高羊茅种子在9mgL-12,4-D作用下,获得胚性愈伤组织。愈伤组织经农杆菌侵染,在30和50mgL-1的潮霉素浓度梯度下筛选,得抗性愈伤组织。组织化学染色法证实,uidA基因在抗性愈伤组织中表达:抗性愈伤组织在分化培养基中分化得到转基因植株。PCR、Southern杂交法证实外源基因已导入到高羊茅植株中。图5参37。     

提高根癌农杆菌介导的香石竹遗传转化效率的研究

以无菌苗叶片为外植体,在根癌农杆菌介导下建立并优化了香石竹5个品种的遗传转化体系。预培养2d可明显提高转化率;香石竹品种间在转化上存在差异;培养基中添加20μmol的AgNO3抑制不定芽的分化。转化植株在含25mg·L-1卡那霉素的生根培养基上培养,生根率为72 1%,GUS检测结果55%的转化植株呈蓝色,PCR扩增表明阳性率为32 2%,Southern杂交证实外源基因已整合到植物基因组中。     

农杆菌介导的山苍子遗传转化体系的构建

目的 筛选适合山苍子愈伤组织分化的激素比例,研究其对抗生素的耐受性,构建山苍子遗传转化体系。 方法 以山苍子无菌苗茎段诱导的愈伤组织为试验材料,研究不同激素浓度配比对山苍子愈伤组织诱导不定芽及不定芽生根的影响,探讨愈伤组织对潮霉素和头孢霉素的临界筛选浓度,并通过农杆菌介导法将外源基因导入山苍子愈伤组织中。 结果 筛选出诱导愈伤组织不定芽分化培养基为：MS + 2.0 mg·L−1 6-BA + 0.01 mg·L−1 IBA + 0.05 mg·L−1 TDZ,分化率为16.67%～36.67%;不定芽生根培养基为1/2MS + 0.5 mg·L−1 IAA,生根率为97.33%。遗传转化初期筛选抗性愈伤组织的潮霉素浓度为5 mg·L−1（约7～10 d）,通过逐步增加潮霉素浓度至30 mg·L−1进行筛选培养,头孢霉素最适浓度为300 mg·L−1。采用农杆菌介导法将外源基因转入愈伤组织中,并设计PCR引物进行鉴定,共检测16株抗性苗均含有目的条带,表明目的基因已插入山苍子基因组中,转化率为0.67%。通过Southern检测表明,目的片段已插入山苍子愈伤组织中。 结论 初步建立山苍子再生及遗传转化体系,且已获得多个基因的抗性愈伤组织,为进一步开展基因功能研究及遗传改良提供技术支持。     

根癌农杆菌介导的淡紫拟青霉遗传转化体系的建立

基于根癌农杆菌介导的遗传转化方法,选择植物线虫生防真菌淡紫拟青霉的分生孢子为受体,建立以G418为筛选标记遗传转化体系.通过优化遗传转化条件,达到较高的转化效率:1000～2400个转化子·10-6分生孢子.对转化子进行PCR验证,表明T-DNA已整合到淡紫拟青霉的基因组中,表型测定发现转化子的遗传表现稳定.农杆菌介导淡紫拟青霉突变体库的建立,为进一步筛选对植物线虫致病性高的突变体、了解淡紫拟青霉的侵染过程和侵染机制提供基础,对培育更优良的植物线虫生防菌株,开发高效生防制剂等具有重要的意义.     

农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹

以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为OD600=0.05的EHA105中侵染20min后,在25℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55mg.L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3～5cm后,在生根培养基上经过20～30天的诱导,可产生1～8条根,获得再生植株。经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。     

农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织遗传转化体系

【目的】优化杜仲叶片愈伤组织的再生体系,研究愈伤组织对抗生素和抑菌剂的敏感性,探索影响农杆菌介导杜仲愈伤组织遗传转化的最适转化因子水平,构建农杆菌介导的杜仲愈伤组织瞬时转化体系,使杜仲成年植株外植体为受体的遗传转化成为可能,为杜仲基因功能的研究与定向改良奠定基础。【方法】以杜仲成年植株叶片为材料诱导愈伤组织,通过添加不同浓度植物生长调节剂与大量元素的MS培养基进行不定芽的诱导与增殖,确定最适培养基。在此基础上,在培养基中添加不同浓度抗生素及抑菌剂,研究愈伤组织对其敏感性。以获得的叶片愈伤组织受体系统为基础,通过L_(16)(4~5)的正交试验,探索不同转化因子对农杆菌介导叶片愈伤组织遗传转化的瞬时转化效率的影响,建立最适瞬时转化体系。使用获得的瞬时转化体系对愈伤组织进行遗传转化操作,筛选抗性芽,对抗性芽进行GUS组织化学染色与PCR检验。【结果】再生体系优化的结果表明,3/4大量元素浓度的MS培养基能够促进杜仲愈伤组织不定芽的诱导及生长;愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,诱导率为83%±10. 0%;不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,平均伸长长度为(2. 47±1. 33) cm。抗生素与抑菌剂敏感性试验表明,遗传转化的选择培养基中,抑菌剂头孢霉素的最适浓度为200 mg·L~(-1),筛选用的抗生素卡那霉素最适浓度为70 mg·L~(-1)。转化因子的正交试验表明,最适的农杆菌介导杜仲叶片愈伤组织遗传转化的转化因子组合为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天。使用最适瞬时转化体系对约200个愈伤组织进行遗传转化操作,共筛选获得3个抗卡那霉素的抗性芽; GUS组织化学染色显示GUS基因在抗性芽中得到了表达,PCR检测证明这些抗性芽中存在NPTⅡ基因。【结论】杜仲叶片愈伤组织诱导不定芽的最适培养基为3/4MS+0. 27μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA,不定芽复壮的最适培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA。农杆菌介导的杜仲叶片愈伤组织瞬时转化体系为:预培养5天、侵染10 min和共培养3天,筛选培养基为3/4MS+0. 054μmol·L~(-1)NAA+4. 4μmol·L~(-1)6-BA+200 mg·L~(-1)Cef+70 mg·L~(-1)Km。利用此体系共获得3个抗性芽,PCR分析和GUS组织化学染色都表明T-DNA已整合到抗性芽基因组中。     

影响农杆菌介导的柑桔基因转化早期主要因素的研究

以柑桔中的枳壳，金桔，柠檬，红江橙为对象，农杆菌为载体，研究了转化早期影响效率的主要因素。结果表明：（１）抑菌用抗生素种类与浓度对不同品种柑桔上胚轴出芽率有一定影响，外植体形态学下端垂直放入培养基的放置方式比水平放置所需卡那浓度高；（２）外植体与农杆菌共培养时间３天为宜，共培养３天时各品种Ｇｕｓ阳性外植体所占比例大小依次为枳壳，金柠檬，红江橙；（３）酚类化合物的添加对Ｇｕｓ阳性率有促进作用，红江橙     

多胺物质对农杆菌介导欧美杨107遗传转化影响的研究

利用多胺对携带植物表达载体pBI121的农杆菌EHA105进行活化,之后侵染欧美杨107的叶环.GUS瞬时表达分析表明多胺活化使农杆菌的侵染效率增强,腐胺和亚精胺处理分别为对照的2.4倍和1.8倍.可见使用多胺活化农杆菌有助于提高杨树的转化率.     

Factors influencing Agrobacterium-mediated embryogenic callus transformation of Valencia sweet orange (Citrus sinensis) containing the pTA29-barnase gene

Valencia sweet orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck) calluses were used as explants to develop a new transformation system for citrus mediated by Agrobacterium tumefaciens. Factors affecting Agrobacterium-mediated transformation efficiency included mode of pre-cultivation, temperature of cocultivation and presence of acetosyringone (AS). The highest transformation efficiency was obtained with a 4-day pre-cultivation period in liquid medium. Transformation efficiency was higher when cocultivation was performed for 3 days at 19 degrees C than at 23 or 28 degrees C. Almost no resistant callus was obtained if the cocultivation medium lacked AS. The transformation procedure yielded transgenic Valencia plants containing the pTA29-barnase gene, as verified by PCR amplification and confirmed by Southern blotting. Because male sterility is a common factor leading to seedlessness in citrus cultivars with parthenocarpic characteristics, production of seedless citrus genotypes by Agrobacterium-mediated genetic transformation is a promising alternative to conventional breeding methods.     

伯乐树ISSR分子标记体系的建立

从浙江省庆元县等地采集23份野生伯乐树单株叶片为试验材料,采用单因素对比试验和正交优化试验研究了模板DNA、Taq DNA聚合酶的用量,以及Mg~(2+)、dNTP、引物浓度和退火温度对PCR扩增的影响,建立伯乐树适宜的ISSR-PCR扩增体系,即20μL体系中含90ng模板DNA,1×PCR buffer,1.0mmol/L Mg~(2+),0.15mmol/LdNTP,0.5μmol/L引物,0.75U Taq DNA聚合酶,退火温度为50℃。     

冰糖脐橙皮中果胶提取方法研究

实验分别采用混合盐析和乙醇沉淀的方法对从冰糖脐橙皮中提取果胶的条件进行研究与探讨,通过实验分别得出最佳提取条件,并比较2种工艺方法的优缺点。     

以胡柚作中间砧嫁接外来脐橙试验研究

胡柚适应性强、生长快、结果早、丰产性能好,耐旱、耐寒能力强。以胡柚作中间砧嫁接外来脐橙,嫁接后的脐橙表现出生长快、结果早、耐寒性能提高,脐橙果形品质没有多大变化,中间砧的胡柚及嫁接脐橙周围的胡柚固酸比明显提高。     

幼龄柑橘果园套种芽用矮化香椿栽培技术

幼龄柑橘果园套种香椿是增加果农前期经济收益的有效办法。本文从香椿品种选择、整地施肥、栽植技术、田间管理技术、病虫害防治、收获等方面,总结出广西省南宁市区域幼龄柑橙果园套种芽用矮化香椿栽培技术,为南宁市及相似生态区域的柑橘类种植生产实践提供参考,以提高果农收入和促进产业的发展。     

公路景观评价指标体系建立方法的研究

探讨构建指标体系应遵循的几个主要原则,在此基础上阐述构建公路景观指标体系的基本思路,以景观三元论的理论为基础,建立公路景观的评价指标体系,从理论的角度构造了确定指标体系的定量方法,使指标体系定性分析与定量分析有机结合起来。     

12个脐橙品系高接试验

报道１２个脐橙品系高接树的生长、嫁接亲和力、抗逆性、产量和果实品质，最后讨论了发展脐橙应注意的问题。     

Seasonal,tissue and age influences on frequency and biodiversity of endophytic fungi of Citrus sinensis in Iran

A total of 4,009 endophytic fungal isolates were recovered from healthy leaves, bark and xylem of Citrus sinensis in different seasons and age‐classes. Corresponding to those factors, the majorities of fungal isolates were recovered from leaves, 2‐yr‐old trees and winter, respectively. Fungal isolates were initially categorized based on cultural and morphological characters, and representatives of each morphotype were subjected to molecular identifications based on ITS‐rDNA and β‐tubulin sequences. All isolates obtained in this study belonged to the phyla Ascomycota and Basidiomycota assigned to 30 fungal taxa. The most abundant fungal species were Alternaria spp. Species diversity indices of Margalef richness and Shannon–Wiener revealed a high diversity of fungal taxa recovered from leaf and during winter. Frequency (%) of fungal endophytes was highest in winter followed by summer, autumn, and spring significantly, whereas the corresponding sequence was winter, autumn, summer and spring for the diversity of endophytic fungi. Overall, the results of this study based on the community and diversity of endophytic fungal species in C. sinensis showed that the type of plant tissue, season of sampling and age of tree play a driving role on their abundance while their diversity was mainly dependent on the type of plant tissue, season of sampling than on the age of tree.     

冰糖橙成年态节间茎段遗传转化体系的建立

以柑橘成年态材料作为外植体进行遗传转化试验对遗传改良性状的早期评估是非常有利的,尤其是无核的品种如冰糖橙。本试验旨在建立一套冰糖橙成年态节间茎段再生及遗传转化体系,材料取自温室中嫁接于枳上的成年态植株。结果表明：新改良消毒处理可将外植体死亡率从27.2%降低为0,成活率从60%升高到80%左右;当采用MS＋2ip 2 mg.L-1＋2,4-D 2 mg.L-1共培培养基及MS＋6-BA 3 mg.L-1再生培养基进行不定芽的诱导时,不定芽再生率最高为47.89%,在进行转化试验时,再生培养基需加入30 mg.L-1卡拉霉素和500 mg.L-1头孢霉素;采用3种方法将不定芽嫁接到14 d枳橙砧木上,其中微型嫁接中＂改进的‘⊥’压法＂可使嫁接成活率达到90%;通过上述方法,本试验将chit42基因转入冰糖橙中,并通过PCR检测,表明目的基因的成功导入,其转化率达到了7.6%。     

椪柑高效示范园建设初报

当阳市以椪柑为主的柑桔基地发展迅速,目前基地面积已达1.54万hm2,由于面积扩展迅速,建园后管理滞后,经营效益普遍未达到预期目标要求,为了提高柑桔建园后的总体经营水平,实现早果、丰产、高效,促进我市柑桔产业健康发展,笔者在柑桔重点发展区半月镇燎原村(林业局椪柑基地)开展了椪柑园高效示范,从整地、定植、整形、拉枝、施肥、间种、保花保果等环节规范操作,科学经营,通过4a经营实践,取得良好示范效果。