牡丹芍药组间远缘杂交胚珠拯救研究

为了研究牡丹芍药杂交胚珠离体萌发中的影响因素,分别用芍药粉玉奴’和牡丹‘凤丹白’为亲本进行远缘杂交,人工授粉后第9 d,10 d,11 d,12 d,13 d,14 d,15 d剥取整排胚珠,接种于不同的初代培养基上,在常规培养条件下进行初代培养,而后转入不同处理的继代培养基上继续培养。在常规培养条件下培养原代培养物,并在具有不同处理的继代培养基上继续培养。结果显示,胚珠的胚龄明显影响离体培养效果,但在后续继代培养中材料相继全部死亡。在不同培养基筛选中,发现正交胚珠初代培养45 d后,培养基MS+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1或IBA 0.5mg·L-1的胚珠萌发指标相对较好;反交胚珠初代培养60 d后,培养基MS+NAA 0.5 mg·L-1+IBA 0.2 L-1或IBA 1.0mg·L-1胚珠萌发指标相对较高。     

早熟葡萄种子培养和胚培养

结果表明:果实成熟前一周取样的种子培养后胚长1560μm,成熟期及成熟后一周取样的仅为953μm及830μm。培养基中蔗糖浓度在2—20％范围内浓度越低,效果越好。胚培养时培养基由加入GA,IA-A及IAA+KT均能促进胚的萌发,但对幼苗的生长有不同影响,在添加GA的培养基上幼苗生长正常。种子培养过程中胚不能自然萌发,种子培养后再结合胚培养可使胚萌发率达73.2％,不经种子培养而直接进行胚培养的,胚萌发率仅为5.6％。     

芍药属组内组间杂交及部分后代核型分析与SSR鉴定

以芍药品种‘朱砂判’为母本,分别与6个芍药组品种和4个牡丹组品种进行杂交,并综合利用核型分析和SSR分子标记法对部分杂交后代进行杂种鉴定,筛选出亲和性较好的远缘杂交组合,并确定杂交后代早期鉴定方法,为芍药属新品种培育提供参考。结果表明:1)芍药组内近缘杂交亲和性好,平均结实率均在5粒/朵以上;芍药组内远缘杂交亲和性较差,但仍有一定结实;芍药组间远缘杂交表现出不亲和性,仅杂交组合‘朱砂判’בDao Da Chen’有较少结实。2)核型分析表明:组内远缘杂交后代ZC4、ZC5、ZC6、ZC7为三倍体(2n=3x=15);从50对芍药SSR引物中筛选出7对多态性引物进行扩增,结果显示杂交后代ZC4、ZC5、ZC6、ZC7含有父母本特异性条带,结合核型分析证明ZC4、ZC5、ZC6、ZC7为真杂种。以上结果表明:组内远缘杂交中‘朱砂判’与‘Garden Peace’、‘Pink Teacup’、‘Cream Delight’杂交均有一定结实,组间远缘杂交中‘朱砂判’בDao Da Chen’可打破杂交不亲和性;SSR分子标记技术可用于芍药属植物杂交后代的早期鉴定。      

毛白合的胚培养

为毛百合杂种胚培养选择适宜培养期及培养基。用亲本毛百合进行了胚培养适宜日期及适宜培养基的筛选试验。试验表明毛百合授粉后３９ｄ剥取的胚在ＭＳ附加０．０００１￣０．０１ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的培养基上就可诱导成幼苗。形成胚时间越长，诱导成活率也越高。这为以毛百合为亲本的种间杂交提供了获得杂种胚的方法和依据。     

芍药属叶片解剖结构的研究

观察了芍药属(Paeonia L.)8种、变种及15个品种叶片的解剖结构,结果表明:(1)本属植物叶片上的气孔位于下表皮,属无规则型。其长宽比值可作为种、变种的特征性状。(2)星状晶簇异细胞仅存在于本属牡丹组植物中。因此,晶簇异细胞可作为芍药属分组的解剖学依据。(3)本属野生种类由于长期生活于高山林下灌丛中,形成了其阴性叶的基本结构。因此,引种驯化时应避免强光条件下栽培。此外,发现本属植物叶片栅栏薄壁细胞的形态,不仅有柱状,还有分枝状及不规则型,是其适应荫蔽环境,充分利用太阳光能的结果。     

丁香和连翘属间杂种胚的离体培养

丁香和连翘是我国东北，特别是哈尔滨的主要观赏灌木之一，为了提高其观赏利用价值，于１９９１年在黑龙江省森林植物园开展了丁香与连翘属间杂试验。以不同白丁香单侏为母本与东北连翘进行了远缘杂交。采用带种皮和不带种皮两种材料，取不同时期杂种胚进行离体胚培养。研究结果表明：不同白丁香单株与东北连翘杂交亲合力差异很大。以白丁香５号为最佳；以杂交授粉后５０ｄ左右取不带种皮胚进行幼胚离体培养效果最佳，此时幼胚容易成     

四种药剂柱头处理对芍药属远缘杂交授粉结实率的影响

为提高芍药属远缘杂交结实率,对3类5个远缘杂交组合进行柱头处理,即:1)牡丹组革质花盘亚组内杂交:‘凤丹白’ב芳纪’,紫斑牡丹ב雪映桃花’;2)革质花盘亚组和肉质花盘亚组杂交:紫牡丹ב日月锦’,卵叶牡丹×黄牡丹;3)牡丹组和芍药组间杂交:紫斑牡丹ב红艳争辉’。各组合采用4种处理方式:2.0%,3.5%,5.0%KCL溶液处理柱头;1.5%,3.0%,4.5%NaCl溶液处理柱头;25、50和75mg/L GA3处理柱头;花粉培养液处理柱头,比较不同授粉方式对结实率的影响。结果表明:1)KCL溶液效果优于NaCl溶液,3.5%KCl效果最好;2)所有组合结实率最高值均出现在GA3处理中,GA325mg/L最为稳妥;3)最佳培养液配方为蔗糖100g/L+H3BO30.08g/L+CaCl220mg/L,但花粉培养液处理仅对革质花盘亚组内杂交组合‘凤丹白’ב芳纪’组合有促进作用。     

虾脊兰种子胚培养的最适培养基研究

将虾脊兰的种子接种到添加了马铃薯提取液、复合维生素作为添加物的不同有机物的培养基上，研究不同蔗糖浓度下有机添加物的效应。结果显示，单独添加有机物的促进效应，在10g/L蔗糖浓度下比在20g／L蔗糖浓度下更利于虾脊兰种子的萌发和生长，但生长指数和对照比较差异不显著，说明维生素或马铃薯提取液单独加入培养基效果不明显。两种添加物一起加入，对种子萌发和成苗的促进效应明显高于单独添加物的效应，生长指数高于单一添加物的生长指数，且差异显著，与对照的差异也显著。在10g/L蔗糖浓度下，两者同时添加的促进效应最好。故虾脊兰种子胚培养的最适培养基为VW＋15％椰子汁＋5％香蕉＋10％马铃薯汁＋1粒／L复合维生素胶囊＋1％蔗糖。     

芍药属植物生殖器官的研究进展

被子植物的生殖器官包括花、种子和果实,其中花和种子在植物的有性繁殖过程中发挥重要作用。芍药属植物不仅具有突出的观赏价值和药用价值,还具有较高的油用价值。本文对芍药属植物种子、花器官的发育及化学成分、花粉形态及活力与柱头可授性等方面的研究进展进行综述,以期为亳芍花及种子的生理解剖学研究和育种工作的开展提供参考。     

芍药种胚启动培养及丛生芽诱导研究

为探究芍药种胚启动培养、丛生芽诱导及增殖过程中的主要影响因素,以芍药种胚为外植体,研究不同发育阶段的种胚(授粉后65,75,85,95d)、暗培养时间(0,4,8d)以及3种激素(1.0mg·L^-16-BA、0.5mg·L^-1GA₃、0.2mg·L^-1NAA)对芍药种胚启动培养的影响;同时研究6-BA(0.5mg·L^-1和1.0mg·L^-1)与GA₃(0.5mg·L^-1和1.0mg·L^-1)的激素组合对种胚丛生芽初步诱导的影响;也探究不同浓度的6-BA(1.0,2.0,3.0,4.0mg·L^-1)与1.0mg·L^-1GA₃组合对种胚丛生芽二次诱导以及不同浓度的CH(0,0.3,0.5g·L^-1)对种胚丛生芽增殖成苗的影响;本试验还以子叶节为外植体,接种在种胚丛生芽最适的诱导及增殖的培养基中,对种胚丛生芽及...     

朝鲜淫羊藿种胚组培研究

【目的】建立朝鲜淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai）种胚组织培养快繁体系,筛选其适宜的组织培养条件。【方法】以朝鲜淫羊藿种胚为外植体,研究外植体最佳消毒方式;在1/2MS基础培养基上,采用L₉(3⁴)正交试验设计,探讨6-BA、NAA、IBA和蔗糖对种胚愈伤组织诱导的影响,筛选适宜培养基,并分析不同激素组合对愈伤组织增殖、丛生芽增殖及幼芽生根的影响。【结果】朝鲜淫羊藿的最佳消毒方式为：利用体积分数0.1% HgCl₂对种子表面消毒8 min,再对种胚消毒5 s,该条件下种子存活率为71.11%;诱导种胚愈伤组织的适宜培养基为1/2MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA+30 g/L蔗糖,诱导率为47.78%;愈伤组织增殖的适宜培养基为1/2MS+0.5 mg/L KT+0.3 mg/L NAA,增长率为172.67%;丛生芽的适宜增殖培养基为1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA,增殖系数为2.78;0.5 mg/L NAA的生根效果最好,生根率为43.33%。【结论】建立了朝鲜淫羊藿种胚适宜的组织培养体系,在该体系下,组培苗长势良好,但生根效果需进一步研究。     

黄山松成熟胚培养与植株再生技术研究

以黄山松(Pinus taiwanensis Hayata)成熟胚为试验材料,进行离体培养与植株再生条件的初步研究。结果表明,黄山松成熟胚外植体表面灭菌以75%的乙醇处理1 min,3%的次氯酸钠处理10 min为适宜;愈伤组织诱导培养基以MS + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.2 mg·L^-1 NAA为最佳;适宜的不定芽分化培养基为DCR + 1.0 mg·L^-1 6-BA + 0.05 mg·L^-1 NAA;不定芽伸长以DCR + 0.1 mg·L^-1 6-BA + 0.05 mg·L^-1 NAA为适宜;生根培养基以1/2 DCR + 2.0 mg·L^-1 IBA + 0.05 mg·L^-1 NAA为适宜。建立的植株再生体系为黄山松种质资源的保存、遗传改良及优质种苗繁殖等研究提供了参考。     

5种橐吾属植物种子特征及其分类

【目的】比较长白山5种橐吾属植物种子特征,为橐吾属植物分类学与栽培繁育研究提供理论依据。【方法】利用形态观察法、电镜扫描法及传统石蜡切片法,对5种橐吾属（蹄叶橐吾、‘紫筋’橐吾、白毛橐吾、合苞橐吾、‘戴斯德蒙娜’齿叶橐吾）植物种子的外观特征、显微结构和解剖特征进行比较,最后用聚类分析的方法进行分类。【结果】供试橐吾属植物种子的颜色、形状、大小、千粒质量等外观特征差异明显,除合苞橐吾种子颜色一致外,其他4种种子均有深色条纹;在扫描电镜下5种橐吾种子侧面、脐部与喙部为纵条纹型和负网纹型纹饰,不同橐吾间纹饰特征均有不同;供试种子横切面为椭圆形、近圆形或多角形,由外至内依次为外果皮、中果皮、种皮、胚乳、子叶,不同种间各部位特征存在差异。聚类分析中5种橐吾种子聚为3类,其中蹄叶橐吾与‘紫筋’橐吾未被聚为一类,二者的所有形态与解剖结构指标均存在显著差异（P<0.05）。【结论】合苞橐吾种子的体积与果皮厚度等解剖指标均最大,是限制其种子萌发的原因之一;‘紫筋’橐吾可能是一个新变种;5种橐吾种子的形态与解剖结构特征存在明显差异,可作为橐吾属植物分类鉴别与探究其演化关系的重要依据。     

枸杞胚细胞悬浮培养系统建立的研究

以宁夏农科院选育的新品种宁杞 1号 3年生树为试材 ,对影响枸杞胚细胞悬浮培养及其再生系统建立的培养基与激素配比进行了研究。结果表明 ,以人工授粉后 18d的幼果 ,剖取成熟胚作为外植体 ,选择 MS+6 BA1.0 mg/ L+IBA0 .5 m g/ L 培养基诱导愈伤组织 ,经单细胞悬浮培养建立了稳定的细胞系 ;MS+6 BA0 .2mg/ L 培养基较为适宜枸杞胚状体萌发成苗 ,该再生苗转移到 MS+NAA0 .2 mg/ L 生根培养基上 ,诱导生根并获得完整植株 ;共移栽成活 14株 ,成活率达 38.8%。     

长角豆组织培养繁育技术研究

【目的】探讨长角豆"卡苏达"(Ceratonia siliqua L.‘Casuda’)的组织培养快速繁育技术,为其在我国的成功引种及种质资源保存奠定基础。【方法】以引自西班牙的长角豆"卡苏达"种子为外植体,培养无菌苗后,取其茎段作为组培材料,在筛选出初代基本培养基的基础上,又进行了继代增殖培养基和生根诱导培养基的筛选,最后对长角豆组培生根苗进行了炼苗和移植。【结果】长角豆种子无菌苗在DKW+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+25g/L蔗糖的增殖培养基上生长最好;最适继代增殖培养基为DKW+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+60mg/L L-赖氨酸+25g/L蔗糖;最佳生根培养基为1/2DKW+0.4mg/L IBA+20g/L蔗糖,生根率为93.33%,生根苗移栽后的平均成活率达到92.36%。【结论】成功建立了长角豆的组织培养再生体系,为长角豆"卡苏达"的快速繁育提供了技术支持。     

黄芽白与红菜薹杂种后代的细胞遗传学特征

将白菜型油菜不同栽培种‘红菜薹’和‘黄芽白’进行正反交获得杂种一代,再经过多代自交获得高世代杂种。观察杂种后代形态学特征(叶型、株高、分枝数等）、育性特征（花粉育性、自交结实率）和花粉母细胞减数分裂染色体行为特征。结果表明经过多代自交,杂种后代各性状趋于稳定,正反交杂种形态有较大差异,而高世代杂种与杂种一代相比,形态没有明显变化。杂种后代花粉育性和自交结实率都比较高,花粉可育率均达到90%以上,但与双亲相比仍然稍差。杂种后代花粉母细胞减数分裂比较正常,但仍有少数细胞出现异常染色体行为。杂种后代减数分裂终变期染色体联会主要以形成环状和棒状的二价体为主,但也形成四价体等其他染色体构型。杂种后代中平均形成二价体的数目在6.7～8.2,最多全部20条染色体形成10个二价体,其中形成环状二价体和棒状二价体的比例相差不大。除了形成二价体外,部分花粉母细胞还形成少数四价体。与亲本相比,杂种后代染色体联会出现较多的非同源联会,平均每个细胞形成二价体的数目比亲本少,而形成四价体的数目比亲本多。在减数分裂后期Ⅰ,同源染色体分开并移向细胞两极,减数分裂后期Ⅱ,染色单体分开最终形成四分体。在此过程中,绝大多细胞染色体行为正常,但有个别细胞出现后期Ⅰ染色体不均等分离,有些细胞同源染色体分开时形成染色体桥;有些细胞在减数分裂Ⅱ中期和后期出现落后染色体。此杂种后代减数分裂过程较正常,探明杂种后代的减数分裂特征可为白菜型油菜杂交育种提供理论依据。     

天麻种子的抗惊厥作用研究

【目的】研究天麻种子的抗惊厥表现及可能的作用机制。【方法】以SPF级ICR小鼠为研究对象,用戊四氮(PTZ)构建小鼠惊厥模型,以80 mg/kg卡马西平为阳性对照,体积分数0.5%羧甲基纤维素钠溶液为空白对照,通过检测小鼠脑中γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、一氧化氮(NO)、Na~+-K~+-ATP酶(Na~+-K~+-ATP)、天冬氨酸(Asp)、五羟色胺(5-HT)含量的变化,分析天麻种子高、中、低(900,450,225 mg/kg)3个剂量对模型小鼠惊厥发作行为的影响,观察不同处理组小鼠脑皮层及海马组织的病理学表现,免疫组织化学方法测定组织中c-fos蛋白和TLR4蛋白的表达水平。【结果】与空白对照组相比,PTZ模型组发生惊厥的小鼠及死亡率高达100%,其脑组织中GABA、5-HT、Na~+-K~+-ATP含量降低,Glu、Asp、NO含量升高,脑皮层及海马组织中的c-fos、TLR4蛋白表达水平升高,海马神经元受损。天麻种子高、中、低3个剂量组和卡马西平组均可改善PTZ所致的上述指标变化,可延长惊厥小鼠的潜伏期,缩短惊厥持续时间,减少惊厥次数,降低惊厥强度及死亡率。3个天麻种子组中尤以高剂量组效果最为明显。【结论】天麻种子具有良好的抗惊厥作用,能对抗由PTZ诱发的小鼠惊厥,其作用机制与卡马西平相似。     

紫果云杉天然种群种实性状表型多样性研究

【目的】系统揭示紫果云杉(Picea purpurea)天然种群种实表型分化程度和地理变异规律,为其种质资源保存和遗传改良提供科学依据。【方法】以青海泽库、甘肃天水及四川省若尔盖、九寨沟、阿坝、红原、壤塘、理县、小金和松潘县境内的10个紫果云杉天然种群为研究对象,每个种群选择30个单株,每个单株采集60枚球果,测定其中30枚球果的球果长、球果宽(中央直径)、种鳞长、种鳞宽、种翅长、种翅宽(最宽端),并计算球果长宽比、种鳞长宽比和种翅长宽比,采用巢式方差分析比较种实表型性状在群体间和群体内单株性状值的差异;通过计算变异系数和分化系数,分析种实表型性状的离散程度和分化程度;采用相关性分析检验各种群种实表型性状间的相关关系,最后依据平均欧氏距离对10个种群进行聚类分析。【结果】紫果云杉9个种实性状在种群间、种群内均存在极显著差异(P0.01);10个种群各种实表型平均变异系数从大到小依次为:壤塘(29.45%)阿坝(22.48%)九寨沟(17.93%)松潘(17.76%)红原(17.39%)小金(17.03%)泽库(16.48%)若尔盖(15.66%)理县(15.10%)天水(13.95%);紫果云杉球果、种鳞、种翅的表型分化系数均值分别为46.17%,27.06%和40.42%,变异系数分别为15.11%,19.70%和21.02%,其中以种鳞的变异系数和表型分化系数均相对较小,表明其性状最为稳定;种实表型性状在种群间和种群内均具有丰富的多样性,种群间表型分化系数均值小于种群内变异(62.12%),为37.88%;除球果宽与种鳞长宽比以及种翅长宽比与球果长宽比、种鳞长、种鳞宽、种鳞长宽比的相关性不显著外,紫果云杉其余种实性状间均呈极显著相关关系;通过聚类分析可以将紫果云杉的10个种群大致划分为3组:壤塘、阿坝和小金种群为一组,天水、理县、若尔盖、松潘、九寨沟和泽库种群为一组,红原种群单独为一组。【结论】紫果云杉种实表型多样性较高,各个性状均存在丰富的遗传变异。     

结球甘蓝类钙调蛋白基因 CML48和 CML50在不同胁迫下的表达分析

为探究结球甘蓝类钙调蛋白（CMLs）响应不同胁迫时的功能,丰富CMLs参与钙信号网络调控,为CMLs参与植物逆境途径及其功能的研究提供依据。以结球甘蓝ZG为材料,克隆得到 CML48和 CML50基因,序列分析表明 CML48开放阅读框（ORF）为672 bp,含4个内含子,编码223 aa,分子量为25.28 ku; CML50开放阅读框ORF为1 095 bp,编码364 aa,分子量为38.06 ku,含3个内含子;均为亲水蛋白,均含有2个EF-hand结构域;系统发育树表明 CML48和 CML50均与甘蓝处于同一进化枝,与白菜、油菜的亲缘关系最近。qPCR表明 CML48和 CML50在干旱(PEG6000)、盐胁迫(NaCl)、低温(4 ℃)、高温(37 ℃)、H₂O₂、脱落酸（ABA）、水杨酸（SA）和茉莉酸甲酯（MeJA）等不同胁迫处理下,在叶和根中的表达均有上调,且 CML50的表达量均显著高于 CML48, CML48在茎尖中高度响应高温胁迫,而在根中不响应高温和H₂O₂胁迫。初步说明 CML48和 CML50在根和叶中均可响应上述8种非生物胁迫。