乌头愈伤组织诱导中抗褐化剂的筛选

以乌头的叶片为外植体,在愈伤组织的诱导阶段,以低无机盐浓度1/2MS为基本培养基,加入KT 1mg/L、2,4-D 1mg/L、NAA0.1mg/L,考察了不同浓度配比的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)、AC(活性碳)、Vc(维生素C)对乌头愈伤组织诱导的作用效果及褐化率。结果表明,0.04%的PVP在乌头愈伤组织诱导阶段为最佳抗褐化剂。     

鱼腥草愈伤组织诱导及褐化抑制的研究

以鱼腥草叶片为外植体,比较不同植物生长调节剂、抗褐化剂和光照条件对愈伤诱导率及褐化率的影响.结果表明,MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1有利于鱼腥草愈伤组织的诱导;抗坏血酸(Vc)、聚乙烯吡哆烷酮(PVP)对抑制外植体褐变均有作用,其中,PVP效果最佳,最适浓度为2 g·L-1.光照条件对鱼腥草褐变的影响较大,培养初期暗培养,能显著地抑制外植体的褐变.     

金钱树愈伤组织的诱导及其褐化的防止

试验结果表明,采用培养基MS+NAA1mg/L+6-BA2mg/L,对金钱树的老熟叶片进行培养,35天后其愈伤组织的诱导率高达80%。在继代培养中,采用液体培养对防止愈伤组织的褐化效果最佳,在培养基中添加1g/L的活性炭,采用N6培养基而不用MS培养基,对防止愈伤组织的褐化也有较好的效果。     

椰子愈伤组织诱导与防褐变技术研究

利用椰子成熟胚和幼花序研究了愈伤组织诱导和控制褐变的方法。结果表明:椰子幼花序比成熟胚诱导愈伤组织的速度快且效果好。在幼花序愈伤组织的诱导中,以佛焰苞长度为16.5 cm的幼花序诱导效果最好。在Y3培养基中添加浓度为25 mg/L的2,4-D时,愈伤组织的诱导率最高。加入2.5 g/L活性炭和5 g/L的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)对于培养物褐变有良好的抑制作用。     

喜树愈伤组织诱导与抑制褐化的研究

[目的]筛选喜树外植体的最佳诱导培养基,研究抑制外植体及继代愈伤组织褐化的方法。[方法]以喜树的幼叶和种胚作为外植体,通过测定过氧化物酶和多酚氧化酶的活性,从外植体选择、培养基种类、激素配比、添加物的处理等方面进行愈伤组织的诱导和抑制外植体及继代愈伤组织褐化的研究。[结果]幼叶外植体的最佳诱导培养基为:SH+NAA2.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L;种胚外植体的最佳诱导培养基为:MS+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L。抑制幼叶外植体褐化的方法为:增加外植体大小,吹干培养基表面水分。抑制愈伤组织继代培养褐化的方法为:最佳诱导培养基附加30mg/L抗坏血酸和5g/L活性碳;1次继代后,将质地致密的愈伤组织转移到MS培养基上培养。[结论]该研究为喜树的遗传转化和植株再生提供理论基础。     

香蕉愈伤组织诱导培养中褐化抑制剂的筛选

为解决香蕉愈伤组织诱导培养过程中的外植体的褐化现象,分别用AgNO3(10,20 mg·L-1),AC(1,2,3 g·L-1),PVP(1,2 g·L-1),VitC(100,200 mg·L-1)等防褐化剂,对香蕉的愈伤组织诱导进行防褐化研究。结果表明:外植体培养10 d后,所有防褐化处理实验组的褐化率均低于对照组,说明在愈伤组织诱导的早期,不同的防褐化剂均有一定的防褐化效果;随着培养时间延长,不同的防褐化处理逐渐出现差异,在愈伤组织诱导培养40 d后,活性炭的防褐化效果最好,其中1 g·L-1活性炭的褐化率仅为20%,效果最佳。     

珍稀濒危植物掌叶木愈伤组织诱导与褐化抑制研究

以掌叶木[Handeliodendron bodinieri (Lévl.) Rehd.]的叶片、茎段为外植体,在含有不同植物激素的培养基上诱导愈伤组织。结果表明,最佳诱导培养基为MS+2,4-D1.0mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L,最佳增殖培养基为3/4B5+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+VC0.1%。2,4-D与NAA联合使用利于诱导率的提高;适量的6-BA、KT利于愈伤组织质量的改善;6-BA加KT的双因子组合没有单因子的诱导效果显著;采用B5培养基代替MS培养基,且将大量元素降为3/4,外加VC0.1%,并进行暗培养,能有效抑制愈伤组织的褐化。     

降低皂质芦荟诱导愈伤组织褐化的初步研究

对降低皂质芦荟诱导愈伤组织褐化情况的研究表明,外植体接种前进行预处理对控制诱导愈伤组织的褐化有一定的帮助。其中,以在PVP(2 g/L)溶液中浸泡15 m in的效果最为显著;暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的生长;培养基中附加抗氧化剂和吸附剂对愈伤组织的褐化有不同的作用效果,抗氧化剂要优于吸附剂。以收获愈伤鲜重为基础,考察其抗褐化能力为:L-谷氨酰胺(5 mg/L)>AgNO3(15 mg/L)>Vc(2 mg/L)>PVP(0.5 mg/L)>柠檬酸(5 mg/L)>Na2S2O3(10 mg/L)>空白>活性炭(10 mg/L)。     

马尾树愈伤组织的诱导与褐化控制研究

[目的]为保护和开发利用马尾树资源提供科学的理论依据。[方法]以MS为基本培养基,用IBA和6-BA以及不同浓度配比的抗褐化剂AC、VC和Na2S2O3诱导马尾树愈伤组织。[结果]在诱导过程中马尾树愈伤组织的褐化现象很突出,接种几小时后外植体周围即出现褐化物质。以冬芽和春芽为外植体时,这些抗褐化剂均不起作用。以嫩叶为外植体时,抗褐化剂AC起显著作用。3种抗褐化剂组合使用时,仅AC的作用显著,而VC和Na2S2O3的作用不显著。仅在以嫩叶为外植体的培养中诱导出了愈伤组织。MS+IBA 1.5mg/L+6-BA2.5 mg/L+AC3.0 g/L最适于马尾树嫩叶愈伤组织的诱导。[结论]马尾树的嫩叶可用于诱导愈伤组织,这为马尾树的细胞培养奠定了基础。     

蓖麻花药愈伤组织增殖及防褐化研究

褐化很大程度上限制了蓖麻花药增殖培养研究,本研究通过改变蓖麻花药愈伤组织的培养基成分、添加防褐剂来建立高效增殖体系,最终确定蓖麻花药愈伤增殖最佳培养基为1/2MS+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L+NAA 0.3 mg/L+ZT 5.0 mg/L+脯氨酸750 mg/L+酸性水解酪蛋白750 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+维生素C 400 mg/L+活性炭0.6 mg/L,pH值=5.8。     

福建柏组织培养体系的建立及优化

【目的】探究福建柏不同外植体再生过程中最适激素配比,为建立福建柏组织培养体系提供技术支持。【方法】以福建柏鳞叶和茎段作为外植体,在饱和洗衣粉液浸泡20 min和体积分数75%酒精浸泡30 s条件下,研究体积分数0.1% HgCl₂浸泡不同时间(5,8,10,12,15 min)后的消毒效果;以福建柏鳞叶和茎段为材料,通过单因素试验,研究生长素（NAA和2,4-D）对不同外植体愈伤组织诱导的影响,再通过正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA不同配比对外植体愈伤组织诱导的影响;以福建柏愈伤组织为材料,采用正交试验研究NAA、2,4-D、6-BA、KT对愈伤组织继代增殖的影响;以福建柏带芽茎段为材料,研究细胞分裂素6-BA对芽诱导和萌发的影响;以福建柏分化苗为材料,采用正交试验研究6-BA、2,4-D、KT对分化苗继代生长的影响;以福建柏无根苗为材料,研究无根苗扩增繁殖的效果。【结果】（1）福建柏鳞叶最适消毒配方为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 10 min,污染率为16.67%;茎段为体积分数75%酒精30 s+体积分数0.1% HgCl₂ 15 min,污染率为23.33%。（2）鳞叶愈伤组织诱导最适配方为MS培养基+NAA 2.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,诱导率为81.67%;诱导出的愈伤组织白色近透明,长势良好。而茎段为MS培养基+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L,诱导率为78.33%,诱导出的愈伤组织淡绿色,长势良好。（3）愈伤组织最适增殖配方为MS基本培养基+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+KT 0.5 mg/L,增殖质量为1.984 g,褐化率23.33%。（4）芽诱导萌发最适配方为MS基本培养基+6-BA 2.0 mg/L,平均诱导芽数2.05个,平均萌动数1.70个,分化率100%。（5）分化苗生长和扩繁的最适配方为1/2MS基本培养基+2,4-D 0.5 mg/L+KT 1.0 mg/L,平均生长长度为2.241 cm,无褐化,扩繁成活率为95.50%,扩繁系数为3.18。【结论】福建柏以带芽茎段作为芽增殖再生途径外植体,鳞叶作为愈伤组织再生途径的外植体进行组织培养效果最佳,长势好且稳定。     

异质养分环境下不同家系福建柏光合特性及酶活性的差异

【目的】探究在不同异质养分环境下,福建柏［Fokienia hodginsii (Dunn) Henry et Thomas］不同家系幼苗叶片光合特性和酶活性差异及变化趋势,为福建柏新品种培育提供理论依据和数据支持。【方法】以福建柏9个1年生家系（454,464,467,474,490,493,500,534,541）幼苗为研究对象,采用盆栽试验,设置氮（N）、磷（P）、钾（K）3种不同异质养分环境,以同质养分环境为对照,研究福建柏各家系幼苗叶片的光合特性、荧光参数及酶(超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT))活性和丙二醛（MDA）含量对不同养分斑块的响应差异。在此基础上,计算不同家系福建柏幼苗叶片光合特性、荧光参数及酶活性和MDA含量的表型可塑性指数。【结果】（1）N、P异质斑块下,福建柏幼苗叶片的净光合速率（P_n）、气孔导度（G_s）和蒸腾速率（T_r）均高于同质养分斑块和K异质斑块,493家系在N异质斑块、541家系在P异质斑块中的P_n均最高。K异质斑块和同质养分斑块下,福建柏幼苗叶片胞间CO₂浓度（C_i）明显高于N、P异质斑块,N异质斑块下大部分福建柏家系幼苗叶片WUE较高。（2）在N异质斑块中,不同家系福建柏幼苗叶片的初始荧光值（F_o）和PSⅡ最大光化学量子产量（F_v/F_m）均较高,PSⅡ实际光化学效率（Yield）和光合电子传递速率（ETR）呈极显著正相关,N、P异质斑块中各家系Yield和ETR均较高。各斑块下福建柏家系PSⅡ 的潜在活性（F_v/F_o）无明显的变化规律,同一家系的F_v/F_o峰值在各种斑块间差异较大,其中500家系的F_v/F_o在各斑块之间差异显著,534家系的F_v/F_o在各斑块间无显著差异。（3）在P异质斑块中不同家系福建柏幼苗叶片POD活性均最高,在N异质斑块中大部分家系幼苗叶片POD活性较同质养分斑块有一定提升,在K异质斑块下福建柏家系幼苗叶片POD活性较同质养分斑块无明显规律。N、P异质斑块中,各家系福建柏幼苗叶片SOD和CAT活性均高于同质养分斑块,K异质斑块中POD、SOD和CAT 3种酶活性与同质养分斑块差异不大。N、P异质斑块中,福建柏幼苗叶片MDA含量均明显低于同质养分斑块,而K异质斑块中MDA含量则明显高于N、P异质斑块。（4）福建柏家系幼苗叶片荧光参数的表型可塑性指数均值最低,为0.29,光合特性的表型可塑性指数均值为0.52,而酶活性和MDA含量的表型可塑性指数均值为0.57。光合生理整体表型可塑性指数最高的是464家系,最低的是490家系。【结论】福建柏各家系幼苗叶片对N、P异质环境表现出较好的适应性,K异质环境对福建柏幼苗叶片光合作用强度和酶活性有一定的抑制作用;9个家系中,464家系具有较高的光合生理可塑性。     

君迁子组培体系的建立及优化

【目的】建立君迁子（Diospyros lotus L.）组培快繁体系并进行优化,为君迁子组培苗的生产应用提供技术支持及理论依据。【方法】以污染率、褐化率、成活率为考察指标,设置体积分数10% H₂O₂消毒10,20,30 min和体积分数2% NaClO消毒5 min+体积分数10% H₂O₂消毒10 min 4个处理,筛选君迁子外植体适宜的消毒方法;分别以君迁子萌动芽、春梢、腋芽和休眠芽作为外植体,筛选最合适的外植体材料;分析DKW、（1/2N）MS、1/2MS、MS培养基对组培苗启动培养的影响,筛选组培苗生长的最适培养基;增殖培养中,激素ZT、6-BA均设0,1.0,2.0,3.0,4.0 mg/L 5个水平,IAA设0.05,0.1,0.2 mg/L 3个水平,筛选组培苗继代增殖最适激素配比;最后分析不同质量浓度IBA（0,1.0,2.0,3.0 mg/L）对组培苗生根的影响。【结果】君迁子外植体最适的消毒方法为体积分数2% NaClO消毒5 min+体积分数10% H₂O₂消毒10 min;最佳外植体材料为萌动芽,其成活率可达60.00%;在（1/2N）MS培养基上组培苗生长更加健壮,启动培养效果较好;增殖培养最佳的激素配比为3.0 mg/L ZT+0.1 mg/L IAA,在此处理下,组培苗2级愈伤占比79.00%,显著高于其余处理,2级和3级株高占比分别为55.33%和44.67%,长势均匀且主茎粗壮,其增殖系数达5.83;君迁子生根培养较为适宜的IBA质量浓度为1.0 mg/L,生根率可达83.33%。【结论】初步建立了较为完整的君迁子组培体系,有助于柿砧木无性系产业化扩繁的推进。     

地涌金莲不同部位外植体多酚氧化酶活性及总酚含量分析

通过对比分析地涌金莲原变种与红苞变种外植体PPO活性及总酚含量的差异,为组织培养适宜外植体的选择提供理论依据。结果表明,地涌金莲原种与红苞变种不同部位总酚含量存在显著差异,均表现为雄蕊最高,其中原变种为21.42 mg·g~(-1),红苞变种为20.64 mg·g~(-1),且均显著高于其他部位;红苞变种叶片及叶脉总酚含量分别为9.43mg·g~(-1)和2.32 mg·g~(-1),显著高于原变种的4.67 mg·g~(-1)和0.72 mg·g~(-1),而红苞变种雌花子房壁总酚含量为4.96 mg·g~(-1),显著低于原变种的9.44 mg·g~(-1),其余8个部位的总酚含量在2变种间无显著差异;原变种叶片及叶脉的PPO活性分别为971.5和542.8(0.01△A·g~(-1)·min(-1)),显著高于红苞变种的277.2和428.5(0.01△A·g~(-1)·min(-1)),其他部位的PPO活性两者无显著差异。表明总酚含量及PPO活性均较低的花苞片、雄花子房是地涌金莲组织培养较理想外植体材料。     

日本白鲫BMP15和GDF9基因片段的克隆及组织表达分析

根据斑马鱼GDF9、BMP15基因的保守序列设计引物,采用RT PCR方法扩增获得日本白鲫GDF9、BMP15基因片段。日本白鲫GDF9基因片段长778 bp,编码145个氨基酸;BMP15基因片段长811 bp,编码270个氨基酸。氨基酸序列分析表明日本白鲫GDF9与斑马鱼的同源性最高,为78%,与其他物种的同源性在58%~78%之间;日本白鲫BMP15与斑马鱼同源性最高,为80%,与其他物种的同源性在30%~80%之间。系统进化树分析显示,鱼类的GDF9基因独立聚成一支,其中日本白鲫的GDF9基因与斑马鱼的GDF9基因聚成一支;鱼类的BMP15基因独立聚成一支,其中日本白鲫的BMP15基因与斑马鱼的BMP15基因聚成一支。半定量PCR结果显示,BMP15 mRNA在脾脏、肝脏、鳃、脑、心脏、肌肉、肾脏、卵巢中均有表达,其中卵巢中表达量最高;GDF9 mRNA在肝脏、脑、心脏、肌肉、卵巢中均有表达,而在脾脏、鳃、肾脏中表达量极低或不表达,在卵巢中表达量最高,为进一步研究日本白鲫GDF9与BMP15基因的结构与功能奠定了基础。     

草鱼JAK2基因片段序列的克隆及其组织表达分析

通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)法从草鱼肝脏中首次克隆获得草鱼JAK2基因的片段序列。该片段序列长671 bp,编码223个氨基酸,氨基酸序列分析表明草鱼JAK2基因片段与其他物种的相似性在70%～91%之间;系统进化树显示,鱼类的JAK2独立聚成一支,草鱼与斑马鱼聚成一支,与鳜鱼和墨绿凹鼻鲀聚成的一支再聚成一支。实时荧光定量PCR分析表明,草鱼JAK2基因在肝脏、肌肉、脑、心脏、脾脏和肠系膜脂肪组织中均有表达,其中在肝脏组织中表达量最高,显著高于其他组织(P<0.05),其次是肌肉、脑、脾脏和肠系膜脂肪组织,在心脏组织中表达量最低,且显著低于其他组织(P<0.05)。本研究为进一步研究草鱼JAK2基因的结构和功能奠定了基础。研究亮点:JAK2基因在鱼类上的研究报道甚少。本研究首次克隆了草鱼JAK2基因片段序列;且发现JAK2基因在肝脏组织中表达量最高,心脏组织中表达量最低,为草鱼JAK2基因的结构及其信号转导等生理功能的深入研究奠定了基础。     

2种德国鸢尾组织培养体系的建立

【目的】探索2个德国鸢尾品种金娃娃、黑骑士的组织培养条件,为2种鸢尾的种苗产业化和推广应用奠定基础。【方法】以金娃娃、黑骑士2种鸢尾的幼嫩花葶为材料,研究不同外植体、消毒方法和培养基对2种鸢尾不定芽诱导、增殖及生根的影响。【结果】2种鸢尾的花茎节能直接诱导出不定芽,故其为组织培养的最佳外植体;金娃娃外植体以75%(体积分数)乙醇浸摇3s、0.1%(质量分数)HgCl2消毒6min的处理污染率和死亡率均较低;黑骑士则以75%乙醇浸摇5s、0.1%HgCl2消毒8min的效果较好。初代培养中,MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA是2种鸢尾不定芽诱导的最佳培养基,在该培养基中,金娃娃和黑骑士的不定芽诱导率均最高,分别为86.4%和73.5%。继代培养中,MS+4.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA是不定芽增殖的最佳培养基,在该培养基中,金娃娃和黑骑士的增殖系数最高,分别为12.71和8.64。2种鸢尾不定芽生根培养时以培养基MS+0.1mg/L 6-BA+2.0mg/L NAA效果最好。【结论】建立了2个德国鸢尾品种金娃娃、黑骑士的最佳组织培养体系,在该体系下不定芽诱导率、增殖率高,生根情况良好。     

He-Ne激光辐照对灯盏花组培体系的影响

【目的】研究He-Ne激光辐照不同时间对灯盏花组织培养的影响,为灯盏花的开发利用提供参考。【方法】以灯盏花的种子、无菌培养苗、叶片、愈伤组织及芽为材料,用He-Ne激光辐照不同时间(种子分别为0(CK),0.5,1,5,10min;叶片分别为0(CK),2,4,6,8min;愈伤组织分别为0(CK),1,2,3,4,5,6,7,8min;分化芽分别为0(CK),0.5,1,2,3,6min;根分别为0(CK),0.5,1,2min),分析He-Ne激光辐照对各组织的影响,筛选最佳辐照时间。【结果】He-Ne激光辐照1min能够提高灯盏花种子活力;诱导愈伤组织初期,较适宜的辐照时间是2min,继代后以辐照8min的愈伤组织生长最好;愈伤组织增殖培养时,辐照4min效果最佳;诱导芽辐照3min较适宜;生根培养以辐照2min较好。【结论】一定量的He-Ne激光能够提高灯盏花种子的萌发率、出愈率及愈伤组织诱导芽和生根效果。     

马占相思开放式组培体系的建立

【目的】研究基本培养基和不同质量浓度植物生长调节剂在开放组培条件下对马占相思(Acacia mangium)芽诱导、增殖和生根的影响,为建立马占相思开放式组培体系提供技术支持。【方法】以马占相思含饱满腋芽的带叶茎段作为外植体,研究MS、1/2 MS、1/4 MS和1/8 MS培养基加入不同质量浓度6-BA(0.5,1.0,1.5 mg/L)对马占相思芽诱导的影响;采用L₉(3⁴)正交试验设计,探讨不同质量浓度6-BA (1.5,2.0,2.5 mg/L)、IBA (0.1,0.5,1.0 mg/L)和IAA (0.10,0.25,0.50 mg/L)组合对马占相思芽增殖的影响;同时,研究不同质量浓度IBA (0.5,1.0,1.5, 2.0 mg/L)和NAA (0.1,0.5,1.0 mg/L)组合对马占相思组培苗生根的影响。【结果】马占相思最佳芽诱导培养基为1/8 MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 g/L百菌清,芽诱导率为91.87%;影响马占相思增殖的生长调节剂主次顺序为6-BA>IAA >IBA,最佳增殖培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+0.25 mg/L IAA+0.2 g/L百菌清,增殖倍数为3.38;马占相思最佳生根培养基为2.0 mg/L IBA+1.0 mg/L NAA+0.2 g/L百菌清,生根率为80.00%。【结论】初步建立了马占相思开放式组培技术体系,为马占相思无性系产业化扩繁提供了一种新方法。     

黄体期和卵泡期小尾寒羊KiSS-1与RFRP-3组织表达研究

为分析KiSS-1和RFRP-3基因在小尾寒羊不同繁殖时期(黄体期和卵泡期)下丘脑、垂体、性腺轴各组织中的表达差异,阐明这2个基因在绵羊发情转换中的表达模式,以常年发情的小尾寒羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,对比分析了KiSS-1和RFRP-3基因在黄体期和卵泡期的小尾寒羊下丘脑—垂体—性腺轴各组织中的表达差异。结果表明:1)KiSS-1和RFRP-3基因在下丘脑、垂体、卵巢等10种组织中均有表达;2)黄体期和卵泡期下丘脑中KiSS-1基因表达量均显著高于其他组织(P0.05),卵泡期下丘脑和松果体中KiSS-1基因表达量均显著高于黄体期(P0.05);3)黄体期和卵泡期下丘脑和卵巢中RFRP-3基因的表达量均显著高于其他组织(P0.05),且卵巢中RFRP-3基因在黄体期的表达量显著高于卵泡期(P0.05)。综上,研究发现KiSS-1和RFRP-3基因在绵羊发情调控中均发挥重要作用,KiSS-1促进发情而RFRP-3抑制发情。