一氧化氮(NO)对仔猪睾丸支持细胞微管的影响

为阐明一氧化氮(NO)对睾丸支持细胞(sc)微管的影响,利用硝普钠(SNP)作为NO供体.通过细胞活性检测、免疫荧光、酶活检测、免疫印迹等方法检测NO对培养仔猪睾丸支持细胞微管结构和分布的影响.结果表明,低浓度NO能维持支持细胞的活力和微管正常的结构;高浓度NO能提高Sc内p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的活性,降低抗氧化酶的活性、破坏细胞内微管的结构和分布.降低细胞的分泌功能.实验证明,SNP通过使睾丸支持细胞NO的水平升高从而降低细胞内抗氧化能力,并通过p38MAPK级联,使细胞内微管发生解聚化.破坏微管的结构,从而降低细胞的分泌功能.     

β-氯氰菊酯通过氧化应激诱导睾丸支持细胞发生去分化

氯氰菊酯（cypermethrin,CYP）对于生殖系统具有损害作用,但对睾丸支持细胞的影响仍不清楚。本研究以β-氯氰菊酯（β-CYP）为实验药物,用维生素E（VE）作为抗氧化剂,以成年雄性小鼠（Musculus）为实验材料,通过灌喂方式给药,处理35d,免疫组化检测睾丸中增殖细胞核抗原（PCNA）、间隙连接蛋白43（CX43）的表达,并检测小鼠睾丸总抗氧化能力的变化。结果发现,β-CYP可明显增加睾丸支持细胞中PCNA的表达（P〈0.05）,减少CX43的表达,降低睾丸总抗氧化能力（P〈0.05）;加入VE后,睾丸支持细胞中PCNA的表达减少;CX43的表达量增加;睾丸总的抗氧化能力增强（P〈0.05）。结果表明,β-CYP能够通过氧化应激使支持细胞去分化,从而抑制精子的生成,造成精子生成能力下降。     

外源NO对镉胁迫下长春花质膜过氧化ATP酶活性及光合特性的影响

为了解镉胁迫下外源NO对地被植物生理响应的调控机制,采用盆栽试验研究了外源NO（SNP）对镉胁迫下长春花幼苗生长、活性氧代谢、质膜ATP酶活性及光合特性的影响。结果表明,外施100μmol·L^-1SNP能缓解25mg·kg一镉胁迫对长春花幼苗生长的抑制,增加叶长、叶宽、株高、基径和生物量。与镉胁迫相比,施用SNP能够降低叶片和根系中丙二醛（MDA）、过氧化氢（H2O2）含量和过氧根离子自由基（O2^-·）产生速率,提高过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及还原型谷胱甘肽（GSH）含量。SNP能显著缓解镉胁迫对叶绿素a（Chla）、叶绿素b（Chlb）和总叶绿素的抑制,提高叶片净光合速率（Pn）、气孔导度（Gs）、蒸腾速率（Tr）和气孔限制值（Ls）,降低胞间CO2浓度（G）和瞬时光能利用效率（LUE）。同时,外源NO能诱导叶片和根系中质膜H＋-ATPase和Ca2＋-ATPase活性提升到正常水平（对照）。但外施100μmol·L-1 NO分解产物NaNOx或SNP相似物Na3Fe（CN）6对镉胁迫则无明显缓解作用。因此,外源NO可通过提高活性氧清除能力,增加叶绿素含量,增强质膜ATP酶活性,从而提高叶肉细胞光合能力,加强离子跨膜运输和信号转导,缓解镉胁迫对细胞质膜的损伤。     

一氧化氮对小鼠卵母细胞自发成熟的影响及作用机制

为研究一氧化氮（NO）供体硝普钠（nitroprusside sodium，SNP）对小鼠卵母细胞体外自发成熟的作用，并进一步探讨NO影响卵母细胞体外自发成熟的可能机制，我们采用了体外细胞培养方法和放射免疫分析法（RIA）。细胞培养研究结果显示，NO供体SNP（1mM）能够延迟卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs) 自发成熟过程中GVBD的发生，抑制PB1的释放。放射免疫分析（RIA）实验结果表明，1mM SNP能够显著的升高COCs内cGMP的水平，而可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）抑制剂ODQ（10μM）能够消除SNP对cGMP水平升高的促进作用。同时10μM ODQ还能够逆转SNP对卵母细胞自发成熟的抑制作用，而PKG抑制剂KT5823（1μM）却不能够逆转SNP对COCs自发成熟的抑制作用。以上结果说明NO是通过激活sGC，提高细胞内cGMP水平来发挥其作用的，但cGMP下游的PKG信号通路并不参与NO调控的COCs自发成熟过程。     

NO对石斛类原球茎内源激素水平及生物碱积累的影响

以杂交石斛类原球茎为材料,硝普钠（SNP）为NO的供体,研究了SNP处理对石斛类原球茎的内源激素水平及生物碱积累的影响。结果表明,SNP处理促进了类原球茎生物碱的积累,处理组类原球茎的生物碱含量比对照提高了41.89%,但类原球茎生长受到一定的抑制; SNP处理刺激类原球茎内源激素水平升高,同时苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性显著增强,从而调控石斛类原球茎生物碱的积累;通径分析表明,多种内源激素通过相互作用调控石斛类原球茎生物碱的积累,水杨酸（SA）对生物碱含量的直接正效应排在首位。     

外源一氧化氮对NaCl胁迫下番茄幼苗叶绿素荧光特性的影响

通过水培试验, 研究了外源NO供体硝普钠（SNP）处理对100 mmol·L-1 NaCl胁迫下番茄幼苗叶绿 素荧光特性的影响。结果表明, 外源NO提高了盐胁迫下番茄幼苗叶片的最大荧光（Fm）、PSⅡ最大光化学效率（Fv/Fm）、PSⅡ潜在活性（Fv/Fo）、表观光合电子传递速率（ETR）、实际光化学效率（ΦPSⅡ）、光化学荧光猝灭系数（qP）和光化学速率（Prate）, 降低了初始荧光（Fo）、非光化学荧光猝灭系数（qN）、天线热耗散速率（Drate）和PSⅡ激发能压力（1-qP）, 同时降低了激发能在两个光系统间的分配不平衡性。表明外源NO通过减少过剩激发能的耗散, 提高光合电子传递效率, 可有效缓解盐胁迫对番茄PSⅡ系统的伤害, 进而在缓解盐胁迫中发挥重要作用。     

外源一氧化氮对镉胁迫下长春花质膜过氧化、ATPase及矿质营养吸收的影响

重金属污染已成为全球范围的主要问题之一,其中土壤镉（Cd）污染已成为当今社会普遍关注的问题。镉是植物生长发育的非必需元素,极小浓度即可产生较大危害。一氧化氮（NO）是一种氧化还原信号分子和活性氮（RNS）, 参与植物对重金属镉胁迫的应答。长春花（Catharanthus roseus）是我国广泛栽培的兼具园林绿化和抗癌药源等有重要价值的多年生草本花卉植物。为了解镉胁迫下外源NO 对园林地被植物生理响应的调控机制,采用盆栽试验研究了外源NO（硝普钠SNP）对镉胁迫下长春花幼苗生长、 活性氧代谢、 质膜ATPase酶和5'-核苷酸酶活性以及矿质营养元素吸收的影响。结果表明, 25 mg/kg 镉胁迫严重抑制长春花幼苗的生长,显著增加地上部和根系镉的富集量,抑制对大量元素和微量元素的吸收。施加0.45、 0.90、 1.80 mg/kg 的SNP显著降低镉从根系向地上部的转运,缓解因镉胁迫对钾（K）、 钙（Ca）、 镁（Mg） 和 铁（Fe）、 铜（Cu）、 锌（Zn） 吸收产生的抑制效应,降低镉胁迫的毒害作用,促进植物生长。镉胁迫下,丙二醛（MDA）含量和活性氧（O2和H2O2）水平显著升高。施加低浓度 SNP 能够显著缓解细胞质膜过氧化,降低硫代巴比妥酸反应产物（TBARS）堆积,且对抗氧化酶和ATPase酶具有相同作用。添加0.45、 0.90、 1.80 mg/kg 的SNP 可提高镉胁迫下长春花地上部和根系的抗氧化酶［过氧化氢酶（CAT）、 超氧化物歧化酶（SOD）、 过氧化物酶（POD）］活性与抗氧化物（还原型谷胱甘肽GSH）含量,诱导质膜H+-ATPase、 Ca2+-ATPase和 5-AMPase 活性提升到正常水平（对照CK）。添加1.80 mg/kg 的SNP对镉毒害的缓解作用最有效,而添加3.60、 7.20 mg/kg 的SNP的处理则无明显效果。     

大豆异黄酮植物雌激素调节大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的机理

通过检测cAMP的浓度、cAMP依赖性的蛋白激酶A(PKA)活性、睾酮的含量及芳香化酶活性的变化，体外研究了大豆异黄酮调节大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的机制。结果显示：大豆异黄酮能够提高cAMP的含量和PKA的活性，同时抑制了芳香化酶的活性，最终导致间质细胞分泌睾酮增加。提示大豆异黄酮植物雌激素促进睾酮的分泌主要是通过激活间质细胞cAMP／PKA信号通路，并且抑制芳香化酶活性，从而降低睾酮向雌二醇的转化而实现的。     

外源一氧化氮对NaCl胁迫下番茄幼苗活性氧代谢的影响

研究了在100 mmol/L NaCl胁迫下,外源NO供体硝普钠（SNP）处理对耐盐性不同的2个番茄品种（沪番‘1480’和沪番‘2496’）幼苗叶片活性氧（ROS）水平和保护酶活性的影响。结果表明,外源NO提高了盐胁迫下SOD、POD、CAT和APX活性,AsA和GSH含量以及脯氨酸和可溶性糖含量,降低了MDA含量和O2- 产生速率;与耐盐品种‘1480’相比,NO处理对盐敏感品种‘2496’效果更明显。表明外源NO通过促进盐胁迫下保护酶活性、抗氧化剂和渗透调节物质的提高,降低ROS水平,缓解NaCl胁迫对番茄幼苗生长的抑制作用,增强植株的耐盐能力。     

HSP60对天祝白牦牛原代培养的支持细胞增殖的影响

HSP60对动物的睾丸发育、精子发生起着重要的调控作用。支持细胞是睾丸内唯一与生精细胞直接发生联系的体细胞,对精子发生、成熟等过程有直接影响。为研究HSP60对白牦牛睾丸支持细胞增殖的调控作用,本试验通过组合酶消化法分离培养白牦牛原代支持细胞,通过差速贴壁法和Tris-HCL低渗缓冲液进行纯化处理,运用免疫荧光染色和Feulgen染色鉴定细胞,经流式细胞仪检测得到96.2%高纯度支持细胞。构建HSP60过表达载体p IRES2-EGFP-HSP60,合成靶向siRNA沉默HSP60,瞬时转染支持细胞后,经qPCR检测发现过表达组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均上调,沉默组HSP60 mRNA在24、48、72 h等时间点均下调。MTS试验检测细胞的增殖情况,过表达HSP60组中的支持细胞增殖效率各时间点均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组中支持细胞的增值率各时间点均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。qPCR检测细胞增殖标志基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA),结果表明,过表达HSP60组的cyclin D1基因在48 h时的表达显著高于空白对照组和空质粒组,PCNA基因的表达在24、48、72 h时均显著高于空白对照组和空质粒组;沉默HSP60组cyclin D1基因和PCNA基因的表达在24、48、72 h时均低于空白对照组和阴性对照组,但差异不显著。综上,HSP60在白牦牛睾丸支持细胞增殖调控中的作用是正向调控。本试验结果为进一步研究HSP60对白牦牛睾丸发育和精子发生的影响奠定了理论基础。     

NO对低温胁迫下玉米种子萌发及幼苗生理特性的影响

以4℃模拟低温胁迫状况,研究了外源一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）对低温胁迫下玉米种子萌发、幼苗生长和生理特性的影响。结果表明,低温胁迫下,玉米种子萌发和幼苗生长受到抑制,叶片丙二醛（MDA）含量和相对电导率显著上升,叶片相对含水量、脯氨酸含量和叶绿素含量显著降低。不同浓度的SNP均能显著提高低温胁迫下玉米种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数;促进低温胁迫下玉米幼苗的生长;抑制低温胁迫下玉米幼苗叶片MDA含量的上升,降低叶片质膜相对透性,增加相对含水量、脯氨酸含量和叶绿素含量。表明外源NO可缓解低温胁迫对玉米种子萌发及幼苗生长的抑制作用,缓解低温胁迫引起的膜脂过氧化,保护细胞膜免受或减少损伤,提高植物抗低温胁迫的能力。在SNP不同的使用浓度中,以100μmol·L-1SNP对低温胁迫的缓解效果最佳,当SNP浓度过低和过高时均达不到理想的效果。     

Molecular action mechanism against apoptosis by aqueous extract from guava budding leaves elucidated with human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) model

Chronic cardiovascular and neurodegenerative complications induced by hyperglycemia have been considered to be associated most relevantly with endothelial cell damages (ECD). The protective effects of the aqueous extract of Psidium guajava L. budding leaves (PE) on the ECD in human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) model were investigated. Results revealed that glyoxal (GO) and methylglyoxal (MGO) resulting from the glycative and autoxidative reactions of the high blood sugar glucose (G) evoked a huge production of ROS and NO, which in turn increased the production of peroxynitrite, combined with the activation of the nuclear factor kappaB (NFkappaB), leading to cell apoptosis. High plasma glucose activated p38-MAPK, and high GO increased the expressions of p38-MAPK and JNK-MAPK, whereas high MGO levels induced the activity of ERK-MAPK. Glucose and dicarbonyl compounds were all found to be good inducers of intracellular PKCs, which together with MAPK acted as the upstream triggering factor to activate NFkappaB. Conclusively, high plasma glucose together with dicarbonyl compounds can trigger the signaling pathways of MAPK and PKC and induce cell apoptosis through ROS and peroxynitrite stimulation and finally by NFkappaB activation. Such effects of PE were ascribed to its high plant polyphenolic (PPP) contents, the latter being potent ROS inhibitors capable of blocking the glycation of proteins, which otherwise could have brought forth severe detrimental effects to the cells.     

一氧化氮改善铁胁迫玉米光合组织结构及其活性

一氧化氮(NO)影响植物生长发育过程及其机制是近年来的研究热点,在植物生长发育的多个层面起着重要的作用。以硝普钠(SNP)为一氧化氮发生剂,液体培养20.d龄的玉米幼苗叶片为实验材料进行研究,结果表明,NO可完全逆转玉米幼苗由缺铁引起的脉间失绿现象,极显著地提高叶片叶绿素含量。电镜观察结果证实,NO促进了玉米叶片叶肉细胞和维管束鞘细胞中叶绿体的发育,叶绿体数量增多且体积增大,基质片层和基粒数量明显增多且结构完好。同时,NO促进了缺铁玉米类囊体膜色素蛋白复合体的装配并显著提高了光合链的电子传递速率,使叶片光合活性得到极显著增加。     

外源NO对不同作物种子萌发、幼苗生长及抗氧化酶活性的影响

以浓度分别为0、0.01、0.1、1.0 mmol/L的硝普钠（Sodium nitroprusside, SNP; NO供体）处理玉米、小麦、花生、小白菜、萝卜、黄瓜的种子和幼苗,研究了以上几种浓度的SNP对作物种子萌发和幼苗生长及抗氧化酶活性的影响。结果表明:SNP对多数种子萌发影响表现为低浓度（0.01 mmol/L和0.1 mmol/L）促进,高浓度（1.0 mmol/L）抑制,其中对萝卜发芽率的促进作用最显著;低浓度SNP可有效促进植物幼苗地上部的生长,其中对小麦、黄瓜的促进效果最显著,同时可显著促进根系的伸长,其中对萝卜的促进效果最显著,且对植物幼苗生长的影响与作物种类有关;SNP对多数植物的根系活力有明显的促进作用,其中对萝卜的促进效果最显著;适宜浓度的SNP可以提高作物CAT、POD和SOD活性以及可溶性蛋白含量,并降低MDA含量,不同作物SNP的适宜浓度不同,其中0.1 mmol/L SNP对多数作物处理效果最好。     

Miyabenol A inhibits LPS-induced NO production via IKK/IkappaB inactivation in RAW 264.7 macrophages: possible involvement of the p38 and PI3K pathways

The anti-inflammatory effect of miyabenol A, a stilbene isolated from Vitis thunbergii, on lipopolysaccaride (LPS)-induced nitric oxide (NO) production in RAW264.7 macrophages was studied. Miyabenol A inhibited NO production (EC 50: 2.7 muM) and iNOS protein and mRNA expression in a parallel concentration-dependent manner. LPS-evoked NF-kappaB nuclear translocation and associated IkappaB degradation were abrogated by miyabenol A treatment. Phosphorylations of IKKalpha/beta, ERK1/2, JNK p38 MAPK, and Akt were observed in LPS-stimulated cells; nevertheless, miyabenol A selectively blocked IKKalpha/beta, p38, and Akt phosphorylation. Furthermore, LPS-stimulated IKKalpha/beta and Akt phosphorylation was abolished by p38 inhibitor SB203580. Wortmannin (a PI3K inhibitor) also attenuated LPS-induced IKKalpha/beta phosphorylation, although to a less extent than SB203580, but failed to affect p38 phosphorylation. These observations suggested that PI3K/Akt might lie downstream of p38 MAPK to coregulate LPS-induced IKKalpha/beta phosphorylation. Taken together, miyabenol A acted via interfering with p38 MAPK-related signal pathways to down-regulate IKK/IkappaB activation and NO production.     

Effect of application of exogenous nitric oxide at different critical growth stages in alleviating Fe deficiency chlorosis of peanut growing in calcareous soil

This study was to investigate peanut response to application of nitric oxide (NO) at different growth stages and the effects of NO application on peanut yield and quality in calcareous soil. Sodium nitroprusside (SNP, a NO donor) solution was poured into calcareous soil at sowing, seedling, flowering, and podding stages, respectively, or at each aforesaid critical stage. Results showed that NO application increased the content of active Fe and leaf chlorophyll, which improved the photosynthesis of peanut; enhanced the ability of resistance to oxidative stress by decreased the accumulation of O₂^??, H₂O₂, and MDA and increased the activity of antioxidant enzymes. Nitric oxide increased the content of soil available Fe and root FCR activity, which can promote peanut absorb more Fe from the calcareous soil. What's more, peanut plants may pump a large amount of H⁺ from root cell membrane to consume in neutralization of HCO₃^?, and decrease the pH in apoplast, cytoplasm, and xylem, finally balance the mineral elements (Fe, Ca, Mg, Zn, and Cu) uptake and distribution. These results indicated that NO could improve peanut growth and development, increase peanut yield and quality. Furthermore, the application of NO at sowing or seedling stage did the most obvious effect on alleviating chlorosis of peanut in calcareous soil.     

外源NO对采后绿芦笋木质化和抗氧化能力的影响

为探讨NO处理对采后绿芦笋木质化合成的调控机理。以0.2mmol/L的硝普钠为一氧化氮供体,以蒸馏水处理为对照,研究了NO对采后绿芦笋总酚、木质素含量;木质素合成关键酶(苯丙氨酸解氨酶、肉桂醇脱氢酶、过氧化物酶、多酚氧化酶);抗氧化能力(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率、超氧阴离子自由基(O2.-)清除率、羟基自由基(·OH)清除率)及膜透性的影响,结果表明,与对照相比,NO处理可延缓采后绿芦笋木质素含量和膜透性的增加,抑制肉桂醇脱氢酶和多酚氧化酶活性,增强抗氧化能力,诱导过氧化物酶活性增强,但对苯丙氨酸解氨酶活性和总酚含量的影响不显著。说明NO处理是通过抑制肉桂醇脱氢酶和多酚氧化酶活性、提高抗氧化能力而延缓采后绿芦笋的木质化进程。研究结果可为NO在绿芦笋保鲜中的应用提供理论依据和技术方法。     

The chalcone flavokawain B induces G2/M cell-cycle arrest and apoptosis in human oral carcinoma HSC-3 cells through the intracellular ROS generation and downregulation of the Akt/p38 MAPK signaling pathway

Chalcones have been described to represent cancer chemopreventive food components that are rich in fruits and vegetables. In this study, we examined the anti-oral cancer effect of flavokawain B (FKB), a naturally occurring chalcone isolated from Alpinia pricei (shell gingers), and revealed its molecular mechanism of action. Treatment of human oral carcinoma (HSC-3) cells with FKB (1.25-10 μg/mL; 4.4-35.2 μM) inhibited cell viability and caused G(2)/M arrest through reductions in cyclin A/B1, Cdc2, and Cdc25C levels. Moreover, FKB treatment resulted in the induction of apoptosis, which was associated with DNA fragmentation, mitochondria dysfunction, cytochrome c and AIF release, caspase-3 and caspase-9 activation, and Bcl-2/Bax dysregulation. Furthermore, increased Fas activity and procaspase-8, procaspase-4, and procaspase-12 cleavages were accompanied by death receptor and ER-stress, indicating the involvement of mitochondria, death-receptor, and ER-stress signaling pathways. FKB induces apoptosis through ROS generation as evidenced by the upregulation of oxidative-stress markers HO-1/Nrf2. This mechanism was further confirmed by the finding that the antioxidant N-acetylcysteine (NAC) significantly blocked ROS generation and consequently inhibited FKB-induced apoptosis. Moreover, FKB downregulated the phosphorylation of Akt and p38 MAPK, while their inhibitors LY294002 and SB203580, respectively, induced G(2)/M arrest and apoptosis. The profound reduction in cell number was observed in combination treatment with FKB and Akt/p38 MAPK inhibitors, indicating that the disruption of Akt and p38 MAPK cascades plays a functional role in FKB-induced G(2)/M arrest and apoptosis in HSC-3 cells.     

镉积累差异水稻品种生长发育对清除NO的响应

[目的]研究一氧化氮(NO)对镉(Cd)胁迫下水稻苗期生理生化及氮代谢响应的调节作用,探讨通过清除NO提高水稻耐Cd能力的措施.[方法]以Cd高积累(TN1)和Cd低积累(春江06)品种为材料,进行了Cd胁迫(40 nmol/L)水培试验.以Cd胁迫营养液为对照,在对照基础上设置添加硝普钠(Cd+SNP)、添加NO清除...