白木香rDNA ITS序列测序鉴定的初步研究

以改良的CTAB法提取白木香的基因组DNA,运用通用引物对其rDNA的ITS区进行PCR扩增,并对扩增产物分别进行直接测序和克隆测序。结果表明,白木香rDNA的ITS区序列存在稳定而又明显的差异,白木香rDNA序列差异可能主要集中在ITS1区,存在5处变异位点,ITS2区存在1处变异位点。     

贵州苗药头花蓼rDNA ITS序列分析

以改良CTAB法提取头花蓼的基因组DNA,采用通用引物对不同来源头花蓼的rDNA ITS 序列进行PCR 扩增,测序 和聚类分析。结果表明,不同来源头花蓼有13 处变异位点,序列长度变异范围为661-666 bp,序列差异主要集中在ITS1 区与ITS2区。rDNA ITS 序列可作为分子水平鉴定头花蓼的参考依据。     

我国部分区域链格孢属 rDNA ITS区序列分析

[目的]对我国部分区域链格孢属rDNA ITS序列进行分析,从而在分子水平上对其进行鉴定。[方法]使用通用引物ITS4和ITS5对分离自我国部分区域不同寄主链格孢属（AlternariaNees）34个菌株进行ITS基因（ITS1-5.8S-ITS2）的PCR扩增和测序。[结果]序列分析结果表明：5.8S rDNA全长为159 bp,保守程度高,参试的34株菌均一致;ITS区变化相对较大。与A.tenuissima或A.alternata100%同源的分离菌株均表现出对地域和基质的广适性;菌株在5.8S/ITS存在的差异,说明寄主本犀科的丁香叶、蔷薇科、茄科等部分植物的链格孢具有一定的多样性。但同时也发现ITS序列标记在链格孢属部分种间应用有一定的局限性;基于序列ITS1-5.8S-ITS2聚类关系与其地理来源和寄主相关性不大。[结论]ITS序列分析法可为链格孢属的分子鉴定提供理论依据。     

鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析

以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、AC002)的5.8S rDNA与GenBank收录的鸡蛔虫5.8S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001508)相似性分别为95.5%和94.3%,而与澳大利亚鸽蛔虫5.8 S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001509)相似性分别为96.8%和95.5%。将获得的序列与蛔目不同科的代表性蛔虫的5.8SrDNA序列进行比对和系统进化分析,结果表明鸽蛔虫与鸡蛔虫处于同一进化分支上,也表明ITS rDNA是蛔虫分子鉴定的有效遗传标记,这对蛔虫分子分类学及分子流行病学的进一步研究打下了基础。     

我国部分区域链格孢属rDNA ITS区序列分析

1材料与方法 1．1菌株来源菌株来源见表1。 1．2菌丝体培养将链格孢菌株接种到PDA培养基上,25℃恒温、倒置培养7d左右,用灭菌的刀片将菌丝从培养基上刮下,以备DNA提取用。     

芦笋枯萎病菌的鉴定及rDNA ITS序列分析

为准确鉴定芦笋枯萎病致病菌并确定其分类地位,通过形态学观察和核糖体DNA内转录间区(rDNA ITS)序列比对方法,对该病菌进行形态学和分子生物学鉴定,比较其与近缘真菌rDNA ITS序列的差异,并进行系统发育分析。鉴定结果表明,芦笋枯萎病的致病菌为尖孢镰刀菌天门冬专化型Fusarium oxysporum f.sp.asparagi。芦笋枯萎病菌F.oxysporumf.sp.asparagi及其同属近缘种木贼镰刀菌F.equiseti和变红镰刀菌F.incarnatum的rDNA ITS序列比对结果表明,其序列在76~80、104~115、129~138、151~158、175~178、382~402、438~445和473~479bp等rDNA ITS区段上存在差异性碱基。芦笋枯萎病菌及其近缘真菌系统发育分析结果表明,6属真菌大致聚为2个组群2个亚群,芦笋枯萎病菌F.oxysporum f.sp.asparagi与木贼镰刀菌F.equiseti和变红镰刀菌F.incarnatum亲缘关系最近。     

云南烟草赤星病菌及近似种rDNA ITS序列分析

 为了进一步研究云南省烟草赤星病病原的系统发育关系,提取28份供试菌株的菌丝基因组DNA,进行rDNA ITS序列及两侧ITS序列扩增。28个供试菌株与GenBank中登录的链格孢属7个种（包括5个小孢子种Alternaria citri,A．alternata,A．longipes,A．mali,A．gaisen和2个大孢子种A．porri,A．solani）14个菌株的序列进行聚类分析：42个菌株明显地分成两支,供试菌株与5个小孢子种聚为一个分支,序列同源性高达99％～100％,没有明显的地域性差异;但另2个大孢子种聚为单独的一支,明显地与供试菌株和其他5个小孢子种区分开。rDNA ITSl 58S ITS2序列在相对保守的基础上又存在一定变异,在一些菌物属的研究中可作为分类鉴定、分子标记、系统发育的重要依据,但通过对世界各地Alternaria菌株序列的分析发现,rDNA ITS1 58S ITS2仅能将大孢子种和小孢子种分开,还不能作为区分不同地域不同来源菌株的标准。     

中药当归及其混伪品的rDNA ITS序列分析与鉴别

通过对当归及其混伪品中药材rDNA ITS序列的分析,并利用最大简约法构建系统树,试图寻找当归及其混伪品中药材rDNA ITS序列的差异和规律,建立当归与其混伪品药材之间的分子鉴别方法.结果表明:所有材料的ITS序列长度为598～601 bp.ITS1区总位点数为216,38个为简约信息位点(占17.6％);ITS2区...     

中国不同地区杜仲rDNA的ITS序列分析

运用克隆测序法,对分布于中国不同地区的杜仲(Eucommia ulmoides)的核糖体DNA的ITS区(包括ITS-1,5.8S和ITS-2)进行测定.结果表明,杜仲植物的ITS区序列总长度为587-589 bp,长度变异仅为2 bp,其中ITS-1区为218～219 bp,在ITS-2区为205～206 bp,5.8SrDNA均为164bp,且高度保守,无变异位点.采用DNASTAR软件进行系统发育分析表明,来自不同地区的杜仲样品同源性均在96.9以上.根据ITS序列特征构建的系统树,来自同一地区的样     

延边膜荚黄芪rDNA ITS区域克隆与序列分析

用PCR方法克隆延边地区膜荚黄芪的核糖体DNA ITS区域并进行序列分析。结果表明:延边地区膜荚黄芪ITS1的序列长度为228bp,5.8SrDNA长度为164bp,ITS2的序列长度为210bp;序列分析表明延边地区和甘肃的ITS1和5.8SrDNA完全一致,而ITS2第82位处有1个碱基的置换(T/C)。     

高良姜的挥发性成分研究

[目的]对高良姜的挥发性成分进行分析。[方法]采用同时蒸馏萃取GC-MS联用技术对高良姜的挥发性成分进行分析研究。[结果]从高良姜中分离鉴定了72个挥发性成分,主要成分为1,8-桉油精、α-萜品烯基乙酸酯、香榧醇、异长叶烯和喇叭烯等,相对含量分别为38.54%、6.55%、7.74%、3.64%和3.93%。[结论]同时蒸馏萃取法提供的高良姜挥发物信息比水蒸气蒸馏法、顶空加热法提供的信息更丰富,结合这3种方法可以建立更完善的高良姜挥发性成分GC-MS表征体系。     

高良姜中黄酮类化合物的提取及精制研究

[目的]探索提取高良姜中黄酮类化合物的最佳方法。[方法]通过单因素试验及正交试验确定乙醇浸提高良姜中黄酮类化合物的最佳提取条件,并利用双水相体系萃取精制黄酮类化合物。[结果]高良姜中黄酮类化合物提取工艺的最佳单因素水平为提取温度70℃,溶剂浓度40%,固液比1∶300,提取时间4 h。正交试验结果显示影响高良姜中黄酮类化合物提取的各因素的顺序为固液比>温度>提取时间>酶用量>乙醇浓度。最佳提取条件为固液比1∶450,温度80℃,提取时间5 h,酶用量3%,乙醇浓度50%。最佳双水相萃取条件为:PEG浓度24%,硫酸铵浓度12%,温度25℃,pH值7.00。[结论]试验结果可为高良姜中黄酮类化合物的提取分离及纯化提供技术参数。     

高良姜种子不同贮藏时间的发芽试验

[目的]针对高良姜产区没有种子标准,为了制定高良姜种子质量标准。[方法]测定不同贮藏时间的种子发芽率和幼苗整齐度,了解高良姜种子生物学特性,研究不同贮藏时间对高良姜种子发芽的影响。[结果]高良姜种子活性对含水量较为敏感,应属于顽拗型种子;随着贮藏时间越长,种子含水量越少,种子活力越弱,种子发芽率越低;在室内正常贮藏条件下,种子贮藏11 d发芽率90%,贮藏30 d发芽率80%,贮藏51 d发芽率73%,贮藏73 d发芽率仅65%,贮藏在111 d以上,种子丧失生活力。[结论]种子育苗应随采收随播种,提高发芽率。     

高良姜多糖对酪氨酸酶抑制作用的研究

[目的]研究高良姜多糖对酪氨酸酶活性的抑制作用。[方法]以新鲜的高良姜和马铃薯为原料,通过比色法、色差仪法、Photoshop图像灰度值分析等测定高良姜多糖对马铃薯酪氨酸酶活性的抑制率,以及对马铃薯匀浆褐变度和反应体系颜色值变化的影响。[结果]试验得出,高良姜多糖对酪氨酸酶的活力有显著的抑制作用,其IC50为0.315 mg/m L,能显著降低反应体系的褐变度。[结论]高良姜多糖具有较强的酪氨酸酶抑制活性,可望用于美白护肤、果汁护色、鲜切果蔬保鲜等领域,值得进一步研究。     

不同产地高良姜的有效成分分析

建立了高良姜中槲皮素、异鼠李素、高良姜素和山奈素的高效液相色谱分析方法,并对不同产地高良姜中的上述成分进行定量分析。结果表明,海南多地产的高良姜的槲皮素、异鼠李素、高良姜素和山奈素均高于广东徐闻地区,且高良姜素的含量达到了国家药典标准。     

高良姜花和果实的挥发油化学成分

采用水蒸气蒸馏法提取高良姜花和果实的挥发油,采用GC-MS法测定其化学成分,并采用琼脂滤纸片法测定其抗菌活性.结果表明,高良姜新鲜的花和果实中的挥发油含量分别为0.003％和0.209％;花挥发油中的主要成分为Caryophyllene oxide (40.63％)和β-caryophyllene(11.14％),果实挥发油中的主要成分为α-cadinol(41.20％)和τ-cadinol(22.88％);花和果实的挥发油对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的生长均有一定的抑制活性.     

高良姜挥发油的提取工艺研究

研究了酶法、超声波辅助水蒸气蒸馏法提取高良姜中的挥发油,对超声时间、水浴温度、酶作用时间、酶用量进行单因素实验分析,在此基础上做正交实验。结果表明:最佳非正交实验条件是超声时间45min,水浴温度50℃,酶作用时间60min,酶的用量0.4%。表明各因素对1,8-桉油素提取率影响为:纤维素酶量>水浴温度>超声时间>酶作用时间。试验表明添加纤维素酶、辅助超声技术可以有效提高挥发油的提取率。     

高良姜花和果实的化学成分及生物活性

采用高效液相色谱法(HPLC)测定海南省不同产地的高良姜花和果实乙醇提取物中槲皮素、异鼠李素、高良姜素和山奈素的含量,通过滤纸片琼脂扩散法测定其对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和茄科雷尔氏菌的抑制活性。结果表明,高良姜花中只含有槲皮素,果实中含有槲皮素、高良姜素、山奈素;高良姜花和果的提取物对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和茄科雷尔氏菌均有一定的生长抑制活性。     

昆明野生鲍鱼菇的ITS分子鉴定

鲍鱼菇口感特殊,味道鲜美,营养价值高,但产量稀少。传统的形态特征进行的分类鉴定常常带有一定的局限性和主观性,采集的野生鲍鱼菇的真实性需要进一步鉴定。文章采用一对通用引物ITS1和ITS4对野生鲍鱼菇子实体样本及其组织分离菌株的rDNA ITS片段进行PCR扩增,并克隆测序。通过GenBank数据库搜索和系统发育树构建来进行分子鉴定。结合形态特点的分析,结果显示采集的野生菇样本就是鲍鱼菇。ITS序列在鲍鱼菇不同菌株的鉴定上具有重要的价值。