双齿围沙蚕的生活史

为系统了解双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis的生活史,通过人工培育方法观察了其胚胎和幼虫发育全过程,并通过解剖观察了卵的发生及正常个体变态为生殖态异沙蚕体的过程。结果表明:双齿围沙蚕的受精卵采取螺旋型卵裂,形成实心囊胚,经原肠胚后发育为担轮幼虫、疣足幼虫、稚沙蚕和成体沙蚕;卵的发育在体腔内经历卵原细胞期、小生长初级卵母细胞期、大生长初级卵母细胞期和成熟初级卵母细胞期后排出体外,并在受精后进一步形成次级卵母细胞和卵细胞;当正常个体变态为异沙蚕体时,会发生体长明显缩短、腹部变白、眼睛变大和疣足变薄等变化,异沙蚕体繁殖后死亡;研究过程中还观察到幼虫循环系统的发生和红斑等现象。本研究结果可为全面掌握双齿围沙蚕的生活史及开展人工养殖业提供基础数据。     

许氏平鮋精巢的形态结构与发育组织学

采用组织学方法系统研究了许氏平鮋Sebastes schlegeli精巢的形态结构和发育组织学。结果表明,许氏平鮋精巢属于小叶型,精细胞发育经历初级精原细胞、次级精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子6个发育阶段。5月到7月,许氏平鮋精巢处于精原细胞增殖期和初级精原细胞分裂增殖,产生次级精原细胞,次级精原细胞和支持细胞组成精小囊;9月到11月进入精子发生期,精小囊中的生殖细胞进一步发育,逐渐形成精子;翌年1月到3月是精子退化吸收期,精巢中仅有初级精原细胞和残余的精子。性成熟系数（GSI）在精子发生晚期（Ⅳ期）达到全年最高峰值,雄鱼肝重指数（HSI）在退化吸收期（Ⅴ期）达到最高峰值。     

塔形马蹄螺精子发生的超微结构研究

应用透射电镜显微镜技术观察塔形马蹄螺(Trochus pyramis Born)精子的发生过程。结果表明:塔形马蹄螺精子的发生历经精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和成熟精子5个阶段。精原细胞呈近椭圆形,染色质分布较均匀,线粒体较少;初级精母细胞较大,染色质凝聚成小块状,线粒体增多;次级精母细胞较初级精母细胞小,线粒体较多,部分线粒体发生融合,呈扁囊状。精细胞的分化可分为5期,主要特点为:Ⅰ期,一些高电子致密颗粒参与顶体的形成;Ⅱ期,核形态由椭圆形到近圆形,再逐渐拉长为长圆柱状;Ⅲ期,核染色质以颗粒状形式凝集成较大的团块;Ⅳ期,线粒体逐步融合、体积增大和嵴发达;Ⅴ期,中心体移动及鞭毛形成,核内染色质凝聚成高电子密度均质化,胞质逐渐减少。成熟精子为原生型,由头部、中段和尾部(鞭毛)3部分组成。     

基于Cytb基因序列的双齿围沙蚕分子鉴定

为构建基于Cytb基因的双齿围沙蚕分子鉴定方法,以福建省沿海养殖的双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)为供试材料,采用DNA测序方法获得双齿围沙蚕的线粒体Cytb基因序列,并对其进行分子鉴定;进一步采用Mega4软件的邻接法(NJ法)构建沙蚕亚科Cytb基因的进化树。结果表明:双齿围沙蚕的PCR扩增产物经测序和Blast比对后,双齿围沙蚕的Cytb基因序列长度为349bp,与NCBI数据库双齿围沙蚕有97%～99%的相似度,并没有与其他种沙蚕具有相似度;沙蚕亚科进化树中,双齿围沙蚕与多齿围沙蚕相聚,两者相聚后再与阔沙蚕属相聚,沙蚕属与环唇沙蚕属相聚、拟突沙蚕属与刺沙蚕属相聚;研究结果初步证实了线粒体Cytb基因序列可用于双齿围沙蚕的分子鉴定。     

双齿围沙蚕主要器官组织学的研究

采用组织切片法对双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis的组织结构进行了系统观察。结果表明,双齿围沙蚕主要由体壁、疣足、消化系统和排泄系统组成。体壁从内向外分为壁体腔膜、肌肉层、表皮层和角质层,壁体腔膜是一层扁平细胞,肌肉层由环行、纵行和斜行的平滑肌组成,表皮层为单层柱状细胞,其中夹有腺细胞和感觉细胞;疣足的壁与体壁一致,疣足内充满毛细血管、间充质细胞、黏液细胞和血细胞,在性腺发育期间,有大量生殖细胞着生于疣足壁上;消化系统包括消化管和消化腺两部分,消化管为从口到肛门的直管,包括口、口腔、咽、食道、胃和肠,在食道两侧有一对食道腺;排泄系统由肾管构成。     

不同盐度条件下氨氮对双齿围沙蚕的毒性研究

[目的]研究双齿围沙蚕在不同盐度条件下对氨氮的耐受能力。[方法]在水温（27.0±0.5）℃、pH值为8.10的条件下,研究3种盐度（15‰2、5‰和35‰）下氨氮海水对双齿围沙蚕的急性毒性。[结果]在相同盐度下,氨氮浓度越高,作用时间越长,双齿围沙蚕的死亡率越高;在相同氨氮浓度下,盐度越低,双齿围沙蚕的死亡率越高,在15‰、25‰和35‰3种盐度下,总氨和非离子氨对双齿围沙蚕的安全浓度分别为3.31和0.23、3.84和0.254、.31和0.27 mg/L。氨氮对双齿围沙蚕的毒性表现出剂量效应和时间效应,并受盐度影响,盐度升高,毒性下降,双齿围沙蚕对氨氮的耐受能力增强。[结论]该研究为双齿围沙蚕的健康养殖提供了科学指导。     

双齿围沙蚕精子的超显微结构研究

[目的]对双齿围沙蚕精子的外观形态以及内部的超显微结构进行观察。[方法]采用扫描电镜和透射电镜技术对双齿围沙蚕精子的超显微结构进行观察。[结果]双齿围沙蚕的精子结构为鞭毛型,精子由头部、中部和尾部3部分组成,其精子全长为22～23μm,头部长度为2.8～2.9μm,宽度为1.6～1.7μm,顶体长度为0.9～1.0μm。双齿围沙蚕精子的头部外形呈倒状且尖锐的"漏斗"形,可见顶体膜,且膜内有一根柱状的亚顶体腔,腔内分布着大小不一的丝状体及一些细小颗粒。在顶体下方的细胞核内部充满染色质,是整个精子中密度最高的部分。双齿围沙蚕精子中部的线粒体为卵圆形,数量为5～6个。尾部呈现鞭毛型,而轴丝为典型的"9+2"结构。[结论]该研究可为双齿围沙蚕的人工繁育提供理论依据。     

大连市皮口海域口虾蛄群体繁殖生物学特征初步研究

为了解大连市皮口海域口虾蛄Oratosquilla oratoria群体的繁殖生物学特征,于2014年5月—2015年4月,每月中旬对皮口海域口虾蛄群体进行随机取样,采用组织学和电镜技术对其性腺发育规律和生殖细胞发生过程进行了初步研究。结果表明:除7月份以外,其他月份的雌、雄口虾蛄比例与期望值1∶1之间均无显著性差异(χ2=0.500,P0.05);口虾蛄雌、雄性比为0.79~1.34,全年雌、雄性比平均为1.04±0.05,雌、雄性腺周年发育变化趋势类似,雄性发育略快,性成熟高峰期均有2个,雌性在5月和11月达性成熟高峰期,而雄性在4月和11月达性成熟高峰期;口虾蛄卵子发生过程分为卵原细胞、初级卵母细胞、次级卵母细胞、卵黄形成前期细胞、卵黄形成期细胞、早期成熟期卵细胞和成熟期卵细胞,卵巢发育分为未发育时期、卵母细胞期、生长前期、生长中期、生长后期、成熟前期、成熟期和恢复期;精子的发生过程分为精原细胞、精母细胞和精子,精巢发育分为精原细胞期、精母细胞期、早期精子期和精子期。本研究结果可为口虾蛄繁殖生物学的深入研究奠定理论基础,并为早日实现口虾蛄栖息地养护及人工增养殖提供参考。     

试论不同环境下对双齿围沙蚕幼体发育影响研究

在生物学中,双齿围沙蚕被列入环节动物门多毛纲沙蚕科范畴。当前,我国主要将双齿围沙蚕主用于促熟饵料。近年来,随着野生资源的枯竭,双齿围沙蚕人工养殖蓬勃兴起,作为新型经济增长点,其存在着不可比拟的优势,如良好的经济效益、丰富的营养、超强环境适应性等。然而,双齿围沙蚕对养殖条件具有很高的要求。此外,我国双齿围沙蚕养殖起步较晚,在养殖技术、人工育苗、相关报道及研究等方面较为匮乏。双齿围沙蚕的产业化及其资源的保护成为亟待解决的重要课题。文章结合笔者实际经验,对不同环境对双齿围沙蚕幼体发育的影响进行了详细论述,以期对提高我国人工育苗技术、质量等有所帮助。     

大连湾双齿围沙蚕（Perinereis aibuhiteris）卵子生成周期及其与温度和光照时间的关系

大连湾双齿围沙蚕属于一生一次性生殖类型。每年１～３月，是动物卵原细胞增殖时期；种群卵母细胞卵黄合成开始于３～４月，经历４～６月快速生长之后，种群卵母细胞同步性成熟，并于６月底～７月初进入产卵期。在沙蚕生殖周期中，水温和光照时间是控制配子发育的重要外源性因子，回归分析显示，低温和延长的日照时间（１２～３月）促进卵原细胞增殖；高温和长日照（４～６月）促进卵母细胞生长。野外调查和室内实验结果都表明，种群卵细胞发有的起点温度为５℃；环境水温的低温效应对沙蚕生殖周期和卵母细胞同步性成熟具有深刻影响。     

“胰岛素-转铁蛋白-硒钠”对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

[目的]为提高山羊卵母细胞及胚胎体外培养的效率,探索无血清体外培养体系。[方法]在目前卵母细胞体外成熟及胚胎培养所用的常规培养液中添加1%ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒钠)或以1%ITS分别替代2种培养液中FBS,对山羊卵母细胞及孤雌激活胚胎进行体外培养,检测ITS对其发育率的影响。[结果]添加ITS到卵母细胞成熟液中,对卵母细胞成熟率没有明显提高,但显著提高了其激活后孤雌胚胎的囊胚率(58.06%vs.48.19%);以ITS替代成熟液中FBS,取得了与FBS组相似的成熟率、卵裂率和囊胚率。添加ITS到胚胎培养液中,显著提高了山羊孤雌胚胎的囊胚率(68.30%vs.56.82%);以ITS替代胚胎培养液中FBS,卵裂率与FBS组无显著差异,囊胚率显著低于FBS组(42.33%vs.56.82%)。[结论]ITS对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎早期发育均有促进作用;另外,ITS可以替代卵母细胞成熟培养液中的血清,作为无血清培养体系用于相关研究。     

“胰岛素-转铁蛋白-硒钠”对山羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响(英文)

[Objective] The research aimed to enhance culture efficiencies of oocyte and embryo of goat in vitro and to explore serum-free culture system in vitro.[Method] At present,the conventional solutions of oocyte maturation and embryo development in vitro were always added into 1% ITS(Insulin-transferrin-selenium) or using 1% ITS to replace FBS in 2 kinds culture solutions for conducting in vitro cultures of goat oocyte and parthenogenetic embryo.The influences of ITS on their developments were detected.[Result] ITS in maturation liquid of oocytes could not increase oocytes maturation rate but significantly increased blastocyst rate (58.06% vs. 48.19%)of parthenogenetic embryo.If FBS in maturation liquid of oocytes was replaced by ITS, the maturation rate, cleavage rate and blastocyst rate were basically unchanged.Adding ITS into embryo medium could increase blastocyst rate (68.30% vs. 56.82%)of parthenogenetic embryo of goat.If FBS in embryo medium was replaced by ITS,the cleavage rate didn’t change basically,while the blastocyst rate in ITS was obviously lower than that in FBS group(42.33% vs.56.82%).[Conclusion] ITS could promote maturation of oocyte in vitro and early embryonic development, in addition,ITS could replace serum in maturation medium of oocyte as serum-free culture system for conducting relevant researches.     

瘦素对水牛卵母细胞体外成熟和体外受精胚胎发育的影响

[目的]探讨瘦素在水牛体外胚胎生产体系中的作用机理,提高体外胚胎生产效率,为利用分离精子加速水牛品种改良及良种群的扩繁奠定基础.[方法]分别在水牛卵母细胞成熟培养液和胚胎培养液中添加瘦素,研究其对水牛卵母细胞体外成熟率和体外受精胚胎发育率的影响.[结果]在水牛卵母细胞体外成熟液阶段,添加瘦素不仅能促成熟,还能提高其胚胎发育潜能;在体外受精后的胚胎培养阶段,添加瘦素也能显著提高囊胚发育率,二者的最佳瘦素浓度均为10 ng/mL.在最佳瘦素浓度(10 ng/mL)下,常规精子体外受精后的囊胚发育率从19.7%(空白对照组)提高到27.0%,分离精子体外受精后的囊胚发育率从12.3%(空白对照组)提高到17.4%.[结论]瘦素能促进水牛卵母细胞体外成熟及体外受精胚胎发育,并以添加10 ng/mL瘦素的促进效果最明显.     

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。     

EGF对牛卵母细胞成熟及孤雌发育能力的影响

研究表明：表皮生长因子（EGF）对牛卵母细胞的成熟和孤雌激活后发育有促进作用。与对照相比,添加10 ng·mL^-1的EGF就可以明显提高牛卵母细胞体外成熟率、激活后的卵裂率和囊胚率。但EGF水平的提高,对提高卵母细胞成熟率的作用要高于提高后期胚胎发育的作用。40 ng·mL^-1的EGF的卵母细胞成熟率明显高于30 ng·mL^-1时的成熟率,但囊胚率未见明显提高。     

牛卵母细胞体外成熟技术研究进展

牛卵母细胞体外成熟是一项重要的繁殖生物技术,但是由于卵母细胞没有经历体内促黄体激素（LH）峰启动前的生长过程及生物事件干扰了胞质成熟,导致体外发育能力低于体内成熟的卵母细胞。卵母细胞成熟过程复杂,涉及细胞核、细胞质及分子成熟。牛卵母细胞体外成熟受多种因素影响,其中包括卵母细胞来源、颗粒细胞与卵母细胞间相互作用及体外培养环境等。迄今为止,为了提高牛卵母细胞的体外发育能力,许多学者模拟卵母细胞体内环境发展了一些新的体外成熟技术,诸如体外延迟自发恢复减数分裂成熟、外源卵母细胞分泌因子促进卵母细胞体外成熟及模拟生理条件下卵母细胞成熟等方法。本文综述了牛卵母细胞成熟过程、影响卵母细胞体外成熟因素及近年来提高牛卵母细胞体外成熟的新方法。     

4种多糖对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为优化卵母细胞体外成熟培养液,研究白术多糖、黄芪多糖、灵芝多糖及香菇多糖对卵母细胞体外成熟的作用。利用废弃卵巢收集未成熟卵母细胞,在成熟培养液中添加低（0.01、0.05 mg/mL）、中（0.10 mg/mL）、高（0.15、0.20 mg/mL）5个浓度梯度的4种多糖溶液培养卵母细胞。结果显示,4种多糖成熟培养液均在低浓度添加时对卵母细胞成熟率有明显的促进作用,以白术多糖效果最好,卵母细胞成熟率与对照组相比提高了27.28%,高浓度的多糖培养液对卵母细胞均有不同程度的抑制作用,导致细胞皱缩甚至死亡。低浓度的多糖培养液能够促进卵母细胞的成熟,并能提高卵母细胞进一步发育的能力。     

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。     

绵羊卵母细胞核成熟、卵丘扩展与激素浓度关系的研究

为了研究绵羊卵母细胞核成熟、卵丘扩展与激素浓度的关系,利用不同激素浓度处理卵丘-卵母细胞复合体(COCs)并记录不同激素浓度处理下的卵母细胞核成熟率和卵丘扩展率.结果表明:E2可显著提高卵母细胞核成熟率(P＜0.05),但并不影响卵丘扩展率;E2可显著提高卵丘扩展的卵母细胞成熟率(P＜0.05),但不影响卵丘未扩展的卵...     

组织切片法观察昆明白小鼠卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系

三实验应用组织切片法探讨了体内正常生理条件下昆明白小鼠卵巢内卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系。初情期前小鼠注射孕马血清促性腺激素,４８ｈ后注射人绒毛膜促性腺激素,于注射ＨＣＧ后不同时间取出卵巢进行组织切片。注射ＨＣＧ后１ｈ,卵丘细胞开始扩展,此时卵母细胞核膜完整,即未发生生发泡破裂;注射ＨＣＧ后３ｈ,大部分大有腔卵泡中卵母细胞发生ＧＶＢＤ,此时卵丘处于２级扩展状态。卵丘完全扩展发生在注射ＨＣＧ后９ｈ,