RNAi法分析香菇YUCCA8基因的功能

构建香菇(Lentinula edodes)YUCCA8基因的双向启动子(Leactin和Legpd)RNA干扰载体,通过根癌农杆菌介导的香菇菌丝转化方法,获得12个相对稳定的YUCCA8基因沉默阳性转化子.qRT-PCR分析表明,转化子的YUCCA8基因表达量下调至野生型菌株S606的10％～40％;与S606相比,...     

农杆菌介导香菇URA3基因RNAi体系构建

选择香菇(Lentinula edodes)内源乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶基因(URA3)为沉默靶基因,以其功能结构保守区域451～884 bp处的反向互补序列为干扰片段,将pCAMBIA1390改造为发卡结构载体HpV、GPiE改造为双启动子载体DpV-2.采用农杆菌介导转化法侵染小米粒培养基培养的香菇菌丝,通过...     

香菇编码线粒体中间肽酶le-mip基因及其紧密连锁基因的克隆

根据香菇(Lentinula edodes)编码线粒体中间肽酶le-mip基因的保守序列,通过基因组步行法对le-mip基因及其上游、下游区域进行步行扩增,扩增产物经SeqMan程序拼接后再BlastX搜索,并进行同源性分析.所获得的序列长8 880 bp,其中有5个推定的基因,且与le-mip紧密连锁的基因中没有香菇的A交配型基因.     

香菇乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶编码基因le-pyrG的克隆

通过巢式简并PCR和基因组步行技术从香菇(Lentinula edodes)单核体中克隆到乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶(orotidine-5'-monophosphate decarboxylase,OMPDC)的编码基因le-pyrG,长度为946 bp.经生物信息学分析,香菇le-pyrG基因含有2个长度分别为67 bp和51 bp的内含子,该基因可以编码1个含有275个氨基酸残基的蛋白质序列,该序列经比对分析显示与裂褶菌(Schizophyllum commne)和灰盖鬼伞(Coprinus cinereus) OMPDC序列的相同性分别为73%和70%,相似性分别为84% 和83%.这是首次报道从栽培食用真菌中克隆出乳清酸核苷-5′-单磷酸脱羧酶编码基因的全序列.     

疗膳四款

(一)香菇白木耳汤效能:美容、滋补、强精、润肺、治感冒及二日醉等, 备料:小型厚香菇8～16个,白木耳10～15克,鸡汤若干,姜、酒、盐、辣椒少量。做法:把乾香菇、白水耳浸水发足后,将白木耳煮1～2小时,使变软后加入香菇、姜,小火煮     

菇类栽培研究的新领域

日本栽培香菇的农户迅速增加,但是由于缺乏细心的管理,杂菌大量发生,出现原木消耗量多而产菇量不高的局面。香菇栽培的标准技术尚未确定,多数栽菇农户依靠老经验生产香菇。因此,研究香菇高产技术,是我们面临的新课题。香菇菌丝在5～32℃下生长,22～26℃最适宜菌丝生长,35℃以上生长明显受抑。香菇可根据其出菇温度分为高温型(15～25℃出菇)、中温型(10～20℃出菇)、低温型(5～15℃出菇)三大类。确定栽培何种香菇品种很重要,但是准备好适宜菌丝生长的菇木,对提高香菇的产质量则更重要。     

基于拮抗及ITS序列分析的河南香菇主产区种质资源鉴定及遗传多样性分析

应用核糖体基因转录间隔区域（Internal Transcribed Spacer,ITS）序列及拮抗法对河南食用菌主产区香菇栽培菌株进行鉴定,并分析遗传多样性。以收集的41个香菇栽培菌株为样本,两两之间进行拮抗测试分析,提取DNA并进行PCR扩增、回收、测序,采用比对邻接法（neighbor-joinging,NJ）构建系统进化树。结果表明,16个差异菌株拮抗现象明显,其余菌株无拮抗或者拮抗不显著,41个香菇菌株初步分为16个不同菌株及7个不同亚种;ITS序列比对及系统发育分析将41个香菇品种聚为独立进化的4个大类,即3个不同的菌株和8个不同的亚种,种内遗传距离为0.000 0～0.006 5,与Pleurotus ostreatus(KY962509)种间遗传距离为0.374 0。综上所述,“ITS+拮抗法”结合可以明确区分菌株间拮抗、无拮抗及拮抗不明显现象基因序列的相似度、遗传距离的差异及亲缘关系的远近,为香菇品种的鉴定提供理论支撑。     

基于基因组解析不同香菇菌株木质纤维素降解酶体系的差异

通过比较香菇(Lentinula edodes)野生菌株L3,NCBI已公布的菌株135A、135B、B17、NBRC 111202、W1-26,木腐菌金针菇(Flammulina velutipes)、糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus),以及草腐菌双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、灰盖鬼伞(Coprinopsis cinerea)、草菇(Volvariella volvacea)的基因组。结果表明:香菇不同菌株间基因组存在较大差异,大小为36.69~46.11 Mb,基因数量为11192~14889;香菇菌株135A、135B、B17、L3、NBRC 111202和W1-26基因组注释的碳水化合物活性酶(carbohydrate-active enzymes,CAZymes)基因数量分别为520、520、483、475、524和537,其中L3最少,为475;纤维素酶在香菇不同菌株中基因数量为19~22,低于灰盖鬼伞和草菇,高于双孢蘑菇;不同香菇菌株的氧化还原酶基因数量为41~55,L3最少,为41,NBRC111202最多,为55,135A和135B最为接近。在基因水平上,木腐菌与草腐菌的木质纤维素降解酶体系没有完全的界限,它们之间存在一定的共性,因此木腐菌草腐化栽培存在可能性。     

香菇亲和素基因Leav1的克隆及系统进化分析

采用RT-PCR技术克隆香菇(Lentinus edodes)亲和素基因(Leav1),并对不同来源的亲和素蛋白的分子特征及系统进化进行比较分析。结果表明:L.edodes亲和素Leav1大小为459 bp,编码152个氨基酸。来自细菌、真菌和脊椎动物的亲和素由126~183个氨基酸组成,相对分子质量为13.24~18.84 kDa,理论等电点为3.90~9.69,其中香菇Lentiavidin 1等电点最低,为3.9。对比不同来源亲和素的多序列,发现Avidin结构域长度为107~120个氨基酸,序列之间的相似度为26%~54%,但与生物素结合位点非常保守。系统进化分析发现,香菇Lentiavidin 1和白黄侧耳(Pleurotus cornucopiae)Tamavidin的亲缘关系较近。探明不同来源亲和素的分子特征及系统进化关系,对将来深入研究亲和素基因的生物学功能具有重要意义。     

外源抗药性基因导入香菇体内的研究

利用PEG转化法将携有潮霉素抗药性基因的质粒载体导入香菇原生质体内，获得了抗性转化子，但转化率较低，每微克DNA仅有0．5个转化子。点杂交证实，外源基因已整合到香菇染色体；不同转化子在抗笥平板上生长速率不同，且转化子有丝分裂是稳定的。香菇转基因技术的成功，为利用该技术克隆香菇内源基因及启动子，将外源有益目的基因导入香菇体内，为培育香菇基因工程菌株提供了可能。     

香菇转色前后Atg8表达的变化规律研究

比对香菇(Lentinula edodes)Atg8蛋白基因的同源序列,经反转录PCR确定香菇Atg8的外显子序列。构建其表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)ply S获得其表达菌株。采用镍柱和Mono Q纯化表达的Atg8蛋白,成功制备兔多隆抗体。通过western-blotting对转色前后Atg8蛋白的表达量进行对比。香菇Atg8蛋白基因长度为603 bp,Atg8蛋白分子量25 k Da左右,且为可溶性蛋白。转色后的香菇Atg8蛋白杂交条带较微弱,而转色前杂交条带几乎没有。表明转色后的香菇菌丝Atg8表达量比转色前含量高。     

中国2000年10月食用菌干品市场(部分)价格

品种 袋料香菇段木香菇花菇厚菇薄菇花菇厚菇 木耳类银　耳猴　头竹荪其　他西峡县 40～ 45 (1级 ) ,30～35 (2级 ) 2 6～ 32 (3级 )2 0～ 2 5 (1级 )16～ 2 0 (2级 )10～ 15 4 5～ 55(白 ) ,2 5～ 4 0 (麻 )18～ 2 5 35～ 40 (黑 ) 110～ 12 0(野生 )5 5～ 6 0(棘托 ) 灵芝 18     

中国2000年6月食用菌干品市场(部分)价格

品种 袋料香菇段木香菇花菇厚菇薄菇花菇厚菇木耳类银　耳猴　头竹荪其　他西峡县 45～ 60 ( 1级 ) ,3 0～3 5 ( 2级 ) ,2 5～ 3 0 ( 3级 )2 5～ 3 0 ( 1级 ) ,16～ 2 5 ( 2级 ) 10～ 2 0 6 0～ 70 (白 ) ,30～ 4 0 (麻 ) 18～ 3 0 5 5～ 60 (黑 ) 110～ 13 0(野生 ) 5 0～ 5 5     

中国2000年8月食用菌干品市场(部分)价格

单价品种 袋料香菇段木香菇花菇厚菇薄菇花菇厚菇木耳类银　耳猴　头竹荪其　他西峡县 3 0～ 5 0 16～ 2 5 10～ 186 0～ 70 ( 1级 ) ,35～ 50( 2级 )18～ 3 0 3 5～ 40 (黑 ) 110～ 13 0(野生 )5 0～ 5 5(棘托 )灵芝 18～ 2 5 ,天麻 140～15 0 ,牛肝菌 60～ 75 ,鸡油菌5 5～ 6     

中国2000年4月食用菌干品市场(部分)价格

单价品种 袋料香菇段木香菇花菇厚菇薄菇花菇厚菇木耳类银　耳猴　头竹荪其　他西峡县 40～ 60 ( 1级 ) ,3 0～3 5 ( 2级 ) ,2 5～ 3 0 ( 3 级 )2 0～ 2 5 ( 1级 ) ,16～ 2 0 ( 2级 )15～ 2 0 ,14～15 (菇丁 )60～ 70(白 ) ,3 0～40 (麻 )2 0～ 3 0 5 5～ 60 (黑 ) 110～ 13 0(     

玉米套种香菇栽培技术

香菇是一种十分名贵的人工栽培食用菌.传统上香菇是在棚室内栽培,1999～200年,我们在露地进行玉米套种香菇栽培,利用玉米高大的植株为香菇遮阴降温,又改善了玉米的通风透光条件,香菇667m2(平方米)产3 250kg(公斤),效益7 580元,玉米667m2(平方米)产186.3kg(公斤),效益48.5元;合计667 m2(平方米)效益7 648.50元.经济效益显著,市场前景可观,其主要栽培技术如下.     

应用RAPD方法鉴别香菇菌株的研究

作者采用单个、10-碱基的随机引物(Operon公司产品)PCR扩增香菇的多态性DNA。测试的7个引物均能扩增15个香菇菌株的DNA,扩增位点为12～19个,DNA片段大小为0.34kp～2.52kp。除菌株ATCC 28759和ATCC 28760所有引物扩增的DNA指纹图谱均相同外,其余13个菌株都有其独特的DNA谱带。结果表明,RAPD方法可用于鉴别香菇菌株间的差异,在食用菌遗传育种研究中具有广泛的用途。     

香菇135菌丝生物量及其DNA含量标准曲线的构建

构建了香菇135菌株(Lentinula edodes)菌丝生物量与其DNA含量的标准曲线.通过一系列的筛选工作,确定了标准菌丝的培养条件及DNA提取系统,得到了三个不同培养批次香菇135菌丝体构建的高重现性的关联标准曲线,它们均具有较高的相关系数(＞0.99),统计构建标准曲线的所有90个数据,测定的单点误差范围为0.05%～13.74% (<14%).所得数据表明在操作范围内,菌丝生物量与DNA含量之间存在很好的线性关系,每mg香菇135标准培养菌丝(干重)对应的DNA含量为6.1 μg.     

激素对香菇的作用

在培养基中添加植物激素,对食用菌有何影响,众说不一。西卡瓦(1967)报道,在培养基中添加Kin(激动素)、IAA(生长素)和GA(赤霉素)等,对香菇子实体无增产作用,台湾某作者(1980)报道,用2,4-D(2,4—二氯苯氧乙酸)、IAA、GA和NAA(萘乙酸)等浸泡香菇栽培柱,除2,4-D外,其它处理在适当浓度下均可增产,陈敬祥等(1983)报道,于香菇栽培块上喷适量的三十烷醇,香菇增产10.9～13.9％,并能提高菇体内总氨基酸氮的含量。为了筛选出对增产香菇有益的植物激     

香菇液体菌种影响因子的研究初报

选择香菇Cr0 4 -DZ菌种为实验对象,利用正交设计试验方法,研究香菇液体菌种发酵关键技术,对两个母种培养基进行比较,结果表明香菇培养废料的浸出液对香菇母种菌丝生长有明显的促进作用。香菇菌丝通过木屑-原种培养基培养,解决了菌球在液体培养基中,大小不均匀的问题,Cr0 4 -DZ表现较佳的木屑-原种培养基为Ba - 3。通过摇瓶培养条件的试验,香菇液体菌种培养的最佳物理条件:温度( 2 5±1 )℃、振荡频率1 2 5r/min、三角瓶装料系数2 0 %～30 %、菌种接种量为1 0 %～1 5 %、琼脂含量为0 .0 5 %～0 .1 %、pH值6.0～6.5。