丹毒丝菌spaA基因免疫保护区的克隆与功能研究

本研究以丹毒丝菌XJ1249基因组DNA为模板,根据GenBank已发表的丹毒丝菌表面保护性抗原A (SpaA)的序列设计引物进行PCR扩增,得到大小约1 029 bp的spaA基因N端免疫保护片段(spaA-N)。将spaA-N连接到载体pGEX-4T-1上构建重组原核表达质粒pGEX-spaA-N,对重组质粒进行序列验证后,在IPTG的诱导下,表达和纯化重组蛋白r-SpaA-N,并研究其对小鼠的免疫保护作用。结果显示:分离纯化的重组蛋白具有免疫原性,并对小鼠具有免疫保护性,能够有效防止丹毒丝菌对小鼠的侵染。研究结果为进一步研究丹毒丝菌致病机理,开发新的猪丹毒诊断试剂盒和亚单位疫苗奠定了基础。     

红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测

参照红斑丹毒丝菌表面抗原A（SpaA）基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97．5％～100％,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52．8％～55．2％。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57．5％～58．0％。采用ChouFasman和Karplus—Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame—son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、29l～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。     

红斑丹毒丝菌的分离鉴定及疫苗的免疫保护作用

自重庆地区屠宰场猪扁桃体样品分离红斑丹毒丝菌,在测定血清型、Spa基因型和致病性的基础上,研究了弱毒疫苗G_4T_(10)的免疫保护作用。结果显示,从146份样品中分离33株红斑丹毒丝菌,其中27株对小白鼠具有致病性;19株和2株分别在试管凝集试验和琼扩试验中与兔抗G_4T_(10)血清呈阳性反应;12株为SpaA型,21株为SpaB型;在弱毒疫苗G_4T_(10)的免疫保护试验中,被动或主动免疫小白鼠对11株分离细菌的攻击具有保护作用。结果表明,健康猪群红斑丹毒丝菌的带菌率高,弱毒菌苗G_4T_(10)对多数菌株缺乏免疫保护。     

猪丹毒丝菌SpaA基因原核表达及表达蛋白质的免疫原性分析

旨在克隆表达猪丹毒丝菌SpaA蛋白,分析其免疫原性,为猪丹毒新型疫苗的研发奠定基础。运用PCR扩增SpaA基因,连接至pGEX-6P-1载体,将阳性重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE分析表达产物,GST亲和层析纯化融合蛋白质,Western blot鉴定;纯化SpaA蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测血清中IgG和Th1、Th2相关细胞因子;不同致病力猪丹毒丝菌攻击免疫小鼠,观察病理组织变化及其免疫保护率。结果显示,猪丹毒丝菌SpaA基因在大肠杆菌中实现表达,获得大小为75ku的纯化目的蛋白质。该蛋白质能特异性识别猪丹毒丝菌抗血清,可诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体IgG,并使TNF-β、IFN-γ、IL-5、IL-10含量显著升高,对攻毒菌的免疫保护率均为100%,病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。可见成功获得的重组SpaA蛋白具有良好的免疫原性,能激发机体的体液免疫和细胞免疫,产生较强的免疫保护力,可以作为研发猪丹毒亚单位疫苗的候选抗原。     

上海地区屠宰场猪红斑丹毒丝菌的分离鉴定

为了解上海地区猪红斑丹毒丝菌在健康猪群中的带菌状况,本试验选择上海地区标准化屠宰场的上市猪为研究对象,采集鼻拭子、肺脏、扁桃体和下颌淋巴结等样本,进行猪红斑丹毒丝菌的分离,采用VITEK 2 Compact系统和VITEK MS快速鉴定系统进行鉴定,并设计1对16S rRNA基因引物,对分离菌株进行PCR扩增,随机选取16株分离菌进行测序及16S rRNA同源性分析。结果显示,49.07%（105/214）的样本中分离到猪红斑丹毒丝菌,分离菌株同参考菌株及疫苗株之间16S rRNA同源性为99.6%~100.0%。本试验结果表明上海地区猪群中确实存在猪红斑丹毒丝菌的健康带菌状况。     

快速诊断猪丹毒免疫组织化学方法开发和验证

本研究的目的,是研制一种能够快速检测猪红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)的免疫组织化学方法(Immunohistochemical,IHC).猪红斑丹毒丝菌血清1a、1b和2型与猪群临床疾病关系最为密切.试验所用血清1a、1b和2型的抗血清在兔体内制备,混合后用于福尔马林固定、石蜡包埋的猪组织(肺、心、脾脏和皮肤)切片.IHC检测结果与用来自实验性攻毒猪(6头抗生素治疗,8头未进行治疗)以及提交艾奥瓦州立大学兽医诊断实验室的田间病例(n=170)的样本直接细菌培养后所获结果进行比较,结果发现,直接细菌培养法的结果与IHC染色分析结果高度一致.本研究表明,IHC法用于检测福尔马林固定、石蜡包埋组织样本的猪红斑丹毒丝菌抗原有高度的灵敏性和特异性.由此表明,在遇到病猪在提交诊断实验室进行诊断前已用抗生素进行了治疗、且组织器官经直接细菌培养结果为阴性的情况下,用IHC法进行诊断尤其有用.此外,研究表明,IHC法对检测皮肤病变中的猪红斑丹毒丝菌抗原特别实用,而这些病变在进行细菌培养时往往显示为阴性.     

3株猪红斑丹毒丝菌湖南株的分离与鉴定

从湖南3个不同地区的临床疹块型猪病病例中,分离获得3株能在2 d内致死小白鼠,1~4 d内致死鸽的革兰氏阳性菌,生化鉴定和16S rDNA PCR测序鉴定结果显示3株分离菌均为猪红斑丹毒丝菌,药敏试验显示,3株猪红斑丹毒丝菌均对青霉素等耐药,对恩诺沙星等敏感。     

猪丹毒杆菌SpaA优势表位的串联表达及其免疫效果分析

目的 构建串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗,并对其免疫原性进行研究。方法 将丹毒杆菌表面保护抗原A优势表位串联表达,提取并经亲和层析纯化获得重组蛋白,制备亚单位疫苗,免疫小鼠和猪,21日后攻毒。结果 成功制备串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗,2μg重组蛋白可为小鼠抵抗1000MLD强毒攻击提供100%保护,100μg重组蛋白可为猪抵抗1MLD强毒攻击提供100%保护,可为猪抵抗2MLD强毒攻击提供67%保护。结论 串联SpaA优势表位的丹毒亚单位疫苗具有良好的免疫原性,高于商品化疫苗保护标准。     

红斑丹毒丝菌的某些变异性观察

红斑丹毒丝菌在人工培养或自然选择条件下均可发生变异,研究红斑丹毒丝菌的变异性,探讨其在不同环境条件下的变异规律,对菌株的定向培育或疾病的鉴别诊断都有重要意义。几年来,我们对分离自不同宿主和环境的153株红斑丹毒丝菌的某些变异性进行了观察,现将结果报告如下。材料和方法一、菌株:共153株,其中分离自屠宰猪扁桃体52株、屠宰猪关节液25株、淡水     

吖啶橙免疫荧光菌团法快速检测鱼源红斑丹毒丝菌的实验研究

研究建立了快速检测红斑丹毒丝菌的吖啶橙免疫荧光菌团离心培养法。该方法能检出560个菌在选择性肉汤中10h的培养物或每毫升含5×10~4个菌的抗原悬液;不与李氏杆菌等16种其他细菌发生反应;操作简便,不需要特殊的仪器设备,可于15～18h内报告结果(常规分离法需2～3d);应用离心培养法与常规分离法检测了325尾鲜鱼,阳性率分别为48.0％和55.7％,两者无显著差异(p>0.05)。从鱼体分离出的红斑丹毒丝菌的大多数菌株(18/19)具有毒力;对分离菌株的血清型鉴定发现,有3株菌可能是新的血清型。     

猪丹毒的诊断与防治

猪丹毒主要是因红斑丹毒丝菌侵入猪体内而引起的一种急性传染病,具有很强的传染性,一般呈现出区域性流行传染。在传染的过程中,以3~12月龄的猪为主要群体。如果某猪感染上红斑丹毒丝菌之后,就会立刻变成传染源,危害性极大。     

羊药浴暴发红斑丹毒丝菌感染—羊药浴跛的调查与诊断

羊药浴暴发红斑丹毒丝菌感染──羊药浴跛的调查与诊断梁国煦，王焕忠，金家宝（上海汽巴—嘉基禽畜保健有限公司，２００３３５）钱心元，罗玉峰（中国兽药监察所）由红斑丹毒丝菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ原丹毒杆菌）感染，所致绵羊多...     

浅析猪丹毒的诊断与防治

<正>猪丹毒是一种热性、急性人畜共患病,红斑丹毒丝菌是其病原菌。主要发生于猪,特别是母猪和架子猪。病猪临床症状高热,有败血型、疹块型、心内膜炎和关节炎。本文主要关于猪丹毒的诊断与治疗过程,解析相关诊断思路与防治要点。1诊断1.1病原红斑丹毒丝菌是猪丹毒的病原菌,即猪丹毒杆菌~([1])。为微需氧菌,可以生长在普通的培养基上面,但是可以     

羊红斑丹毒丝菌病——"药浴跛"及其防治

羊药浴跛是由红斑丹毒丝菌经皮肤各种损伤侵入,引起局部皮肤感染,而后蔓延引起的四肢关节炎和蹄叶炎。这种情况通常是呈暴发性发生,在世界大多数养绵羊的国家都报导过。1病原学特征红斑丹毒丝菌即丹毒杆菌,于1882年从感染猪体内分离出该菌,后来发现它能感染羊、牛、马和多种家禽、鸟类,也可感染人致类丹毒病。该菌形态是一种纤细的丝状菌体,在不同的培养基和生物体的器官内可出现不同的形态变异。不形成芽胞、荚膜、不运动。生长条件为微嗜氧性,在没有空气条件下也能生长良好。生长温度要求在15￣44℃,pH7.4￣7.8。丹毒丝菌对环境抵抗力很…     

长沙一例猪疹块型红斑丹毒丝菌的分离与鉴定

根据农业部NY/T566-2002猪丹毒诊断技术检验标准,通过全自动微生物鉴定系统,对送检的猪肉病料进行猪红斑丹毒丝菌检验,并对检验过程和结果进行分析,为动物源性食品中红斑丹毒丝菌等致病菌的检验提供依据,确保动物源性食品安全,为长沙市建设国家食品安全城市提供技术支撑。     

猪丹毒的诊断和治疗

<正>猪丹毒是由红斑丹毒丝菌引起的一种传染病,也是生长猪和成年猪已知最古老的疾病之一。在集约化养猪地区,有高达50%的猪被认为感染有红斑丹毒丝菌。该菌通常定居在扁桃体内;在扁桃体中也存在有非致病性丹毒丝菌。该病暴发可呈急性或慢性,也可发生临床隐性感染。急性暴发的特征是突然发生猝死、发热、关节疼痛,以及从全身性发绀到常     

猪丹毒杆菌SpaA基因的克隆与生物信息学分析

旨在克隆猪丹毒杆菌表面保护性抗原A(surface protein A,SpaA)的编码基因,并预测该蛋白的二级结构和B细胞抗原表位,从而探讨猪丹毒杆菌SpaA蛋白在免疫保护中所起的作用.首先对猪丹毒杆菌SpaA基因进行PCR扩增、克隆和测序,并进行同源性比较.应用生物信息学方法,对猪丹毒杆菌SpaA蛋白的二级结构和B细胞抗原表位进行预测.结果显示,猪丹毒杆菌SpaA基因全长1 881 bp,编码626个氨基酸,发育进化树结果表明分离的2株猪丹毒杆菌菌株与GenBank中其他菌株在进化树中关系较远,自成一个分支.二级结构的预测结果显示该蛋白主要以无规则卷曲、α螺旋和延伸链为主,只有少数的β转角;推测该蛋白有14个B细胞优势抗原表位区域、8个N-肉豆蔻酰化位点.该研究为进一步分析猪丹毒杆菌免疫机理、表位疫苗设计等奠定理论基础.     

猪丹毒的诊断治疗

猪丹毒(Erysipelassuis)是由红斑丹毒丝菌引起猪的一种急性传染病,病猪通常出现皮肤紫色红色疹块、体温升高等典型症状。近年来随着生猪养殖集约化水平的不断提高,发病率呈现逐年下降趋势,但仍有地方性散发趋势。1病原猪丹毒的病原为红斑丹毒丝菌(Erysipelothrixrhusiopathiae)是微需氧和兼性厌氧菌,俗称猪丹毒杆菌,病菌在病死猪的脾、肝、肾、扁桃体以及淋巴组织等处可以检出。     

一株猪红斑丹毒丝菌的分离与鉴定

为了研究1头10日龄病死乳猪的发病原因,试验通过解剖尸体分离获得1株革兰阳性杆菌,采用细菌形态观察、生化试验、PCR鉴定和序列比对分析的方法对菌株进行鉴定。结果表明:该菌株为猪红斑丹毒丝菌,其16S r DNA序列与ATCC 19414菌株(登录号为AB055905)的一致性高达100%;并且该菌株对氨苄西林、氯霉素、利奈唑胺、青霉素、万古霉素、头孢曲松、红霉素、苯唑西林等较为敏感。说明该病例的发病原因是感染了猪红斑丹毒丝菌。     

猪丹毒

丹毒是一种由红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)(图1)引起的传染病,常见于生长猪,特征性临床表现为猝死、发热、关节炎和皮肤损伤。丹毒可以分为急性、亚急性或慢性三种。虽然急性败血性猪丹毒能引发高死亡率,但最大的经济损失可能还是来自于慢性、非致命性丹毒。