免疫层析试纸条检测实验感染猪旋毛虫抗体的研究

旋毛虫又称"旋毛形线虫",感染此病而诱发的旋毛虫病对人体危害大。目前,检验肉质中旋毛虫的方法,有肌肉压片镜检法和人工消化法,因各有弊端难以推广使用。笔者推荐免疫层析试纸条检测猪旋毛虫,方法:制备免疫层析试纸条,实验用猪30头,均采购本地规模猪场。分为2组,1组为感染组,20头;1组为正常组,10头。感染组,每头经5000条旋毛虫幼虫感染,试纸条进行血清及肉汁抗体检测,并与镜检法进行比较。结果:使用的免疫层析试纸条,具有操作简单、便捷快速、不需专业技能等优点,更便于推广应用。而且,更适合试纸条检测肉汁中旋毛虫抗体可用于新鲜肉及冷冻猪肉中旋毛虫检疫的初筛。     

旋毛虫感染小鼠对p46 000重组抗原的抗体应答

分别以旋毛虫肌幼虫ES抗原和p46000重组蛋白作为抗原，对小鼠人工感染旋毛虫后的抗体应答进行了ELISA检测。结果表明，以肌幼虫200条／只经口感染小鼠后，肌幼虫ES抗原在感染后9d可检出抗体，并于感染后35～42d达到最高水平；应用重组抗原检测时，感染后10d可检出抗体，抗体水平略低于用ES抗原，但是其消长规律基本一致．而且与阴性血清相比差异明显；抗体在117d后仍维持于较高水平。     

上转发光免疫层析技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体方法的建立

基于上转发光免疫层析(UPT-LF)技术,旨在建立UPT-LF快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法。采用间接法制备UPT-LF试纸条,通过共价偶联使二抗山羊抗猪IgG和上转发光纳米颗粒(UCP)结合,并加入样品垫和被检血清结合,以旋毛虫肌幼虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因(WM5)表达的蛋白WM5为猪抗旋毛虫IgG特异性结合抗原,WM5(2 g/L)与兔抗山羊IgG(0.5 g/L)喷点于分析膜上作为UPT-LF试纸条检测带(T)与质控带(C),该试纸条命名为Tsp-UPT-LF。Tsp-UPT-LF通过对95份阴性血清检测,确定Tsp-UPT-LF的Cutoff值为0.099。Tsp-UPT-LF和ELISA分别对273份旋毛虫感染猪血清样本进行检测,总符合率为92.31%,一致性系数Kappa(K)值为0.837,表明两种方法具有高度一致性。Tsp-UPT-LF检测旋毛虫、猪囊虫、华支睾吸虫感染的猪血清Tsp-UPT-LF呈现对旋毛虫良好的特异性。Tsp-UPT-LF检测感染50 000条旋毛虫肌幼虫28 d猪血清为阳性,T/C值0.109,122 d阳性最强,T/C值为0.207,至425 d时阳性值有所下降,抗旋毛虫IgG阳性率为71.4%。本研究建立了基于UPT-LF技术快速检测猪抗旋毛虫IgG抗体的方法,为猪旋毛虫即时感染检测、确保食品安全提供了一种可参考的检测方法。     

应用干血纸ELISA诊断猪囊虫病的研究

对试验猪用猪囊尾蚴细胞抗原免疫前、感染前、免疫后及用猪带绦虫卵感染后每隔10d经前腔静脉采血1次，分离血清，同时制备全血干血纸，分别用血清ELISA和干血纸ELISA进行检测。结果免疫组猪均在免疫后12d检出抗体；攻击感染组猪在攻击虫卵20d检出抗体，21d抗体水平达高峰，并一直持续到32周；阴性对照组的OD值一直在0.24～0.65。2种样品的检测结果基本一致。     

四种不同检测方法在奶牛结核病诊断中应用的比较研究

应用γ干扰素试验、胶体金试纸条对100头奶牛进行试验,采集这100头奶牛的肝素抗凝全血及血清,经全血培养、抗原刺激,用γ干扰素试剂盒检测上清,用胶体金试纸条检测血清。同时应用传统皮内变态反应、欧盟比较皮内变态反应,对这100头奶牛进行检测,3d后观察结果。在100头被检测的奶牛中,传统皮内变态反应检出结核阳性36头,欧盟比较皮内变态反应检测出结核阳性13头,两种γ干扰素试验试剂盒分别检出结核阳性12头和10头,两种胶体金试纸条分别检出结核阳性11头和9头。     

2019年我国部分地区屠宰生猪旋毛虫和弓形虫检测

为了解我国部分地区屠宰生猪旋毛虫和弓形虫感染情况,2019年在广东（5个）、山东（4个）、云南（6个）等省份的15个大型、中小型生猪屠宰场,采集猪膈肌样品315份,用PCR方法进行旋毛虫和弓形虫病原学检测;在以上3省15个大型、中小型生猪屠宰场（每省5个）,采集血清样品254份,用ELISA方法进行旋毛虫和弓形虫血清学检测。结果显示：经PCR检测,采样地区所有膈肌样品均为旋毛虫阴性,仅在云南省120份膈肌样品中检出1份弓形虫阳性;经ELISA检测,采样地区血清样品的旋毛虫和弓形虫抗体阳性率分别为1.97%和2.36%,不同省份的阳性率分布不一致,中小型屠宰场阳性率均高于大型屠宰场。结果表明,广东、山东、云南等省份屠宰生猪的旋毛虫和弓形虫携带率极低,基本可以保证猪肉的产品安全;部分地区屠宰生猪存在一定的弓形虫感染抗体,尤其是中小型屠宰场,表明此类猪群需要加强饲养环节的弓形虫感染控制。本研究为保障猪肉食品安全及饲养环节的猪旋毛虫和弓形虫感染控制提供了依据和指导。     

猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用

为探究猪瘟病毒抗体纳米荧光检测试纸条的临床应用效果,对181份未免疫猪瘟疫苗、71份已免疫猪瘟疫苗的临床猪血清,采用本研究试纸条和北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒分别进行抗体检测,对4头存在母源抗体的不同免疫时间仔猪血清、不同阶段的猪血清,采用本研究试纸条进行抗体检测,并对检测结果进行分析统计。结果显示,本研究试纸条与北京世纪元亨公司的ELISA试剂盒的阴性符合率为100%,阳性符合率为95.77%,经Kappa检验两者一致性良好;初生仔猪首免后,猪瘟抗体滴度有所下降,30 d后加强免疫,抗体滴度逐渐升高,试纸条检测结果与猪瘟抗体衰减变化过程呈正相关;不同阶段猪群的猪瘟抗体阳性率均为100%,抗体平均值较高,离散度较整齐,与规模化养猪场合理免疫程序相吻合。综合表明,本试纸条的临床应用效果较好,可用于实时监控猪群的猪瘟抗体变化,适用于基层规模化猪场的猪瘟抗体快速检测。     

旋毛虫不同发育时期排泄分泌物抗原在免疫学诊断中的应用研究

[目的]系统了解并比较旋毛虫不同发育时期排泄分泌物(ES)抗原的免疫学特性,探索可用于临床检测出栏猪旋毛虫感染的血清学诊断技术。[方法]分别以旋毛虫肠道期10 h肌幼虫(10 h ML)、肠道期30 h成虫(30 h Ad)、3 d成虫(Ad3)、6 d成虫与新生幼虫混合(Ad6+NBL)以及肌幼虫(ML)五个不同发育时期的ES作为包被抗原,应用ELISA方法,检测感染不同剂量、不同天数的猪血清中的抗旋毛虫抗体Ig M和Ig G水平,绘制抗体消长规律曲线并进行数据分析。[结果]10 h ML ES和ML ES作为包被抗原适合检测不同感染剂量、感染35 d之前的猪抗旋毛虫Ig M抗体,低剂量感染10 d左右可以检出,高剂量感染5 d也可以检出;Ad3 ES作为包被抗原对高剂量感染35 d之前的猪抗旋毛虫Ig M抗体检测敏感;Ad3和ML的ES作为包被抗原可检测不同剂量、感染35 d之后的猪抗旋毛虫Ig G抗体,其中Ad3 ES抗原检测低剂量感染的效果优于ML ES抗原。[结论]肠道期肌幼虫、成虫和肌幼虫的ES抗原可用于检测旋毛虫的早期感染,成虫和肌幼虫的ES抗原可用于检测出栏猪的旋毛虫感染。本研究为进一步合理有效利用旋毛虫不同发育时期的ES抗原,建立更有效的检测屠宰动物旋毛虫感染的方法提供了重要理论基础和参考。     

河南省部分地区中小型猪场猪瘟感染及免疫状况监测

试验分别应用猪瘟抗原检测试剂盒和猪瘟正向血凝诊断试剂盒,检测了河南省部分地区中小型猪场388份全血样品中的猪瘟抗原和545份血清样品中的猪瘟抗体,结果显示:所检测的388份全血样品中有193份呈现抗原阳性(49.74%),36份呈现可疑,阳性率较高;27个中小型猪场中免疫合格率仅为29.63%;母猪、育肥猪、哺乳仔猪、断奶仔猪的合格率均低于80%的大群免疫保护临界线,免疫效果较差。     

猪旋毛虫和囊虫合并感染病例

1988年4月13日河南省中牟县送入我厂190头猪,宰后检出囊虫12头,旋毛虫6头,其中1头属旋毛虫和囊虫合并感染。检出率为8.95%。合并感染猪只40平方厘米内有4—6个囊虫虫体,后腿、前腿、颈背肌肉均有寄生;旋毛虫镜检24个膈角肉片     

山东省部分地区屠宰场猪旋毛虫病检测

为了解山东省屠宰场猪群的旋毛虫感染情况,对2015—2017年从全省9个市猪屠宰场采集的758头份血清,采用ELISA方法进行旋毛虫抗体检测,发现近3年的旋毛虫抗体阳性率分别为1.42%、1.54%、1.74%,平均阳性率为1.58%。对12份ELISA检测阳性猪的膈肌肉样进行旋毛虫压片镜检和消化法检测,均未发现旋毛虫虫体。ELISA抗体检测结果表明,山东省部分地区屠宰猪群存在不同程度的旋毛虫感染,且在个别地区呈持续感染状态。     

河南省部分地区中小型猪场猪瘟感染及免疫状况监测

本试验分别应用猪瘟抗原检测试剂盒和猪瘟正向血凝试剂盒检测了河南省部分地区中小型猪场388份全血样品中的猪瘟抗原和545份血清样品中的猪瘟抗体。结果显示,所检测的388份全血样品中有193份呈现抗原阳性(49.74%)3,6份呈现可疑,阳性率较高;27个中小型猪场中免疫合格率仅为29.63%,母猪、育肥猪、哺乳仔猪、断奶仔猪的合格率均低于80%的大群免疫保护临界线,免疫效果较差。     

使用 ELISA 检测滤纸或吸水纸上干燥血液中的猪水泡病病毒抗体

作者使用 ELISA 方法对22头试验感染猪血清、全血及干燥血液中猪水泡病(SVD)抗体进行了检测。通过测试比较了3种样品中抗体检出的相关程度,以期探讨用滤纸或吸水纸上的干血代替血清样品来检测 SVD 病毒抗体。采用3种方法制作供     

应用试纸条对南阳地区旋毛虫病试验检测研究

目的为调查研究20世纪90年代以来南阳地区旋毛虫发病现状,感染率,流行动态,流行病学特点。方法自2003年1月-2005年12月,应用河南省农科院生物技术研究所研制开发的具有特异、敏感、快速、简单、易存、实惠等优点的旋毛虫快速诊断试纸条,对南阳地区4个平原县(市、区)(宛城区、卧龙区、新野县、邓州市)和1个山区县内乡3 788头猪进行血清学检测和屠宰猪肌肉镜检,对南阳市郊区狗、猫、鼠和食肉昆虫四种动物共计132只分别进行血清学检测和肌肉目测镜检,将旋毛虫阳性的狗、猫、鼠和食肉昆虫分别人工喂猪做感染试验,并进行猪肉泔水、狗肉泔水、牛、羊肉泔水饲喂试验检测泔水中旋毛虫感染程度。结果南阳地区猪旋毛虫血清学阳性率为2.93%,目测镜检的阳性率为2%;狗血清学阳性率为12.5%,镜检阳性率12.5%;猫血清学阳性率50%,镜检阳性率为33.33%;鼠血清学阳性率为10.3%,镜检阳性率为5.88%;食肉昆虫血清学阳性率为4.76%。感染试验中,猪受到感染的情况分别为33.3%、66.7%、100%和0。测定草食兽未发现有旋毛虫感染。泔水试验结果:狗肉泔水感染率为10%,猪肉泔水感染率为50%,牛、羊肉泔水未发生感染。结论市区比县发病率低,猪肉与狗肉泔水喂猪是当地猪感染旋毛虫的主要来源,南阳地区的保虫宿主主要是猪,山区猪旋毛虫超过平原地区,应用旋毛虫快速诊断试纸条检测旋毛虫比传统的目测镜检检测高出近1个百分点。     

小鼠实验感染不同种旋毛虫后肉汁抗体水平的研究

为了观察小鼠感染不同种旋毛虫后肉汁抗体水平的变化及其与血清抗体水平的相关性,将200只昆明小鼠随机分成4组（每组50只）,每只分别感染300条乡土旋毛虫（T2）、布氏旋毛虫（T3）、伪旋毛虫（T4）及纳氏旋毛虫（T7）幼虫,感染后2～6周每组每周随机剖杀10只小鼠,收集血清及肉汁,用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清及肉汁中抗体水平;另取40只昆明小鼠随机分成4组（每组10只）,每只分别感染500条T2、T3、T4、T7幼虫,感染后6周剖杀,制备肉样,用ELISA检测4℃及-20℃保存不同时间后的肉汁抗旋毛虫抗体动态。T2、T3、T4、T7感染小鼠后的肉汁抗体水平和变化趋势相似,均是在感染后第3周检测出肉汁特异性抗体,抗体阳性率分别为60％、30％、30％、30％,至感染后第4周肉汁抗体阳性率均升至100％。4组小鼠感染后2～6周的肉汁与血清抗体水平均具有相关性。T2、T3、T4、T7感染小鼠肌肉4℃保存7d与1d的肉汁抗体水平相比均无显著性差异;所有的感染小鼠肌肉-20℃保存2个月的肉汁抗体水平与保存1个月的相比均无显著性差异;虽然保存3个月的肉汁抗体水平与保存1个月的相比均已有显著性差异,但抗体阳性率仍均为100％并持续至实验结束时的4个月保存期。结果表明,肉汁中抗旋毛虫抗体的检测可用于新鲜肉、冷藏肉及冷冻肉中乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫捡疫的初筛。     

猪流行性腹泻IgA、IgG抗体与PEDV抗原相关性研究

为了研究仔猪所吮乳汁中IgA抗体水平与乳汁中PEDV感染情况,探讨母猪免疫猪流行性腹泻疫苗后乳汁与血清中IgA、IgG抗体水平的相关性,临床采集多家规模化猪场母猪群乳汁、血清样品以及发病仔猪所吮母猪乳汁样品。采用实验室已经建立的IgA、IgG抗体ELISA方法,检测临床上猪流行性腹泻疫苗免疫后IgA抗体与IgG抗体的相关性,同时采用RT-PCR方法检测发病仔猪所吮乳汁中PEDV感染情况。结果表明,免疫猪流行性腹泻活疫苗后母猪乳汁中IgA抗体水平与血清中IgA、IgG抗体水平呈现很好的正相关性;当发病仔猪所吮母猪乳汁IgA抗体检测结果为阴性时,其PEDV抗原检测结果为阳性;乳汁IgA抗体检测结果趋于阳性样品临界值时,其PEDV抗原检测结果亦为阳性。结论:乳汁中低水平的IgA抗体很难有效地保护仔猪抵御PEDV感染;乳汁中IgA抗体与血清IgA、IgG抗体呈现很好的相关性,且乳汁中IgA抗体水平远远高于血清;通过IgG抗体水平可以间接反映乳汁中的IgA抗体水平,在初乳样品采集难度较大的情况下,可用于间接评估猪流行性腹泻免疫保护水平。     

犬细小病毒血凝抑制抗体效价胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

试验旨在利用胶体金免疫层析技术建立快速检测犬血清中犬细小病毒（canine parvo virus, CPV）血凝抑制（haemagglutination inhibition, HI）抗体效价的方法,用于CPV疫苗免疫效果评价。采用双抗体夹心法,以抗CPV血凝相关抗原的单克隆抗体制备CPV抗原检测试纸条;将犬血清进行不同比例系列稀释后,分别与定量CPV抗原充分反应,滴入CPV胶体金试纸条,根据试纸条检测线（test line,T线）消失时的血清最高稀释倍数判断血清中CPV抗体的HI效价;用此方法检测86份犬血清样品,并与传统血凝抑制试验方法进行分析比较。结果显示,成功制备CPV抗原检测试纸条,确定了试纸条检测犬血清CPV-HI效价的反应条件和结果判定标准。结果表明,在检测不同稀释倍数犬血清反应后的CPV抗原时,能使试纸条T线消失时的血清最高稀释倍数与HI效价具有正相关性,犬血清最高稀释倍数乘以4即为HI效价;两种方法的符合率达90.7%。本试验初步建立了胶体金试纸条检测CPV血凝抑制效价的方法,为检测CPV-HI效价提供了一种操作简单、快速的试验方法,可用于CPV疫苗免疫效果评价。     

抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用

用PRRSV感染SPF猪，血清检测结果显示，机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1)，而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同，应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头，7d后经鼻腔感染PRRSV，定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；2头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；3头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著，可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体，保护机体免受PRRSV的感染。     

蓝耳病阴性猪PRRSV攻毒试验结果及在血清驯化中的应用

良圻原种猪场2009年在后备猪采用血清驯化,以保持猪群蓝耳病的稳定。为进一步了解公司内部所用猪蓝耳病病毒的特性,用同一猪蓝耳病病毒的不同拷贝数(0、20、40、400、4 000和20 000)分别对6头蓝耳病抗原抗体双阴性仔猪进行攻毒试验。病原检测:攻毒24h后,除阴性猪外,5头猪均抗原检测到PRRSV病毒核酸,抗体检测;攻毒后的前6 d抗体均为阴性,7 d后攻毒猪只抗体逐渐转阳;第9天抗体全部转阳且较第7天有大幅升高第11天后,整体抗体稍有上升但较缓慢,攻毒21 d后,各猪只抗体值在1.7~2.3之间。表明20个病毒拷贝数就足以感染猪只。     

猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条对比试验

为了解不同猪口蹄疫O 型抗体检测试纸条的性能,通过检测已知相关及非相关阳性血清样品、阴性血清样品和免疫 猪血清样品,对4种猪口蹄疫O型抗体检测试纸条的敏感性、特异性进行研究评估,并对比猪口蹄疫O型VP1结构蛋白抗体ELISA诊断试剂盒的检测结果。结果表明,仅有A试纸条的敏感性和特异性较好,且与试剂盒抗体检测结果的符合率较高（90%）;而其他试纸条的敏感性和特异性较差,与试剂盒抗体检测结果的符合率较低（40%～65%）。通过对比检测,仅有A试纸条可用于大量临床样品的快速检测和现场检测,更适合基层兽医和养殖户使用,而其他试纸条的检测性能还有待进一步优化提升。