皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶的分离纯化及性质

脯氨酰内肽酶(Prolyl Endopeptidase,PEP)广泛分布在动植物和微生物体内,参与细胞生长和代谢调控。PEP在哺乳动物生殖器官的生长发育过程中起着重要作用,但贝类PEP与性腺发育是否有关尚未有相关报道。本研究以皱纹盘鲍为对象,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)在性腺检测到有最高的基因表达量和较高的酶活性。通过硫酸铵分级沉淀和连续柱层析,从皱纹盘鲍性腺中分离纯化得到分子量约为82 ku,等电点约为5.5的PEP,其最适温度和最适pH分别为25 °C和6.0,在15~25 °C和pH 5~8能够保持较高的酶活性。利用LC/MS/MS分析纯化蛋白,得到182个氨基酸残基,与皱纹盘鲍脯氨酰内肽酶一致。圆二色谱分析显示,温度对PEP二级结构有较大的影响,拟合热变性温度为51.4±0.2 °C。为了进一步探究PEP在鲍鱼性腺发育过程中的作用,对不同发育时期(生长初期、前期、中期和后期)的雌雄鲍鱼,采用免疫印迹(Western Blot)和qRT-PCR分析性腺中PEP的蛋白和基因表达水平。结果表明,PEP在雄性和雌性性腺的各个时期均能被检测到,在雄性性腺的成熟中期和雌性性腺的成熟后期表达量最高。PEP在鲍鱼性腺不同发育时期时表达量的差异表明其可能参与到性腺发育的过程。     

皱纹盘鲍淀粉酶和褐藻酸酶的研究

利用分光光度计比色法测定了２～３ｃｍ的皱纹盘鲍（ＨａｌｉｏｔｉｓｄｉｓｃｕｓｈａｎｎａｉＩｎｏ）的淀粉酶和褐藻酸酶的最适温度和最适ｐＨ以及１１种金属离子对其的影响。结果表明：最适温度分别为３０℃、３５℃,最适ｐＨ分别为６．２４、７．１９,在最适温度下的活化能分别为５．０３×１０４Ｊ／ｍｏｌ和１．３３×１０４Ｊ／ｍｏｌ;皱纹盘鲍的三种主要消化酶的活性依次为：褐藻酸酶＞蛋白酶＞淀粉酶。Ｃｕ２＋、Ｈｇ２＋、Ａｇ＋、Ｐｂ２＋对淀粉酶活性具有显著的抑制作用,其他离子则具有促进作用,其中又以Ｍｎ２＋、Ｂａ２＋、Ｃａ２＋三种金属离子尤为突出,其促进作用比对照组高一倍以上。而对褐藻酸酶,Ｚｎ２＋、Ａｇ＋、Ｈｇ２＋、Ｌｉ２＋、Ｂａ２＋具显著的抑制作用,其他离子则没有作用。     

皱纹盘鲍脏器多糖的分离纯化及鉴定

利用碱性蛋白酶从皱纹盘鲍脏器中提取多糖,采用胃蛋白酶和Sevag相结合的方法脱除蛋白质;经Sephadex G-100凝胶柱层析和DEAE-cellu lose 52离子交换层析分离纯化得到AHP-2;AHP-2经高效液相色谱和比旋光度法鉴定其为均一性多糖;紫外扫描无蛋白质的特征吸收峰;红外光谱分析,AHP-2具有典型的多糖吸收峰和硫酸基吸收峰;凝胶色谱法测定其分子量为10 000~15 000;化学组成分析表明,AHP-2是硫酸酯多糖,硫酸根含量11.55%;气相色谱测定单糖组成为鼠李糖、岩藻糖、木糖、半乳糖和葡萄糖,其摩尔比Rha∶Fuc∶Xyl∶Gal∶G lu=6.7∶2.0∶3.9∶7.4∶1.0。     

锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR 柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究.结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28 kD,反应的最适温度为40 ℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2 、Co2 和Cd2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2 、Zn2 、Na 和K 则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性,实验表明,此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate,PG)有特异性.     

皱纹盘鲍的疾病学研究进展

一、细菌病１．脓疱病皱纹盘鲍脓疱病的病原菌为河流弧菌。该病流行于我国北方沿海养殖地区，夏季发病频繁，死亡率高达５０％～６０％。病鲍足肌上有多个微隆起的白色脓庖，脓庖破裂后流出大量白色脓汁，并留下２～５厘米不等的深孔，足面肌肉呈现不同程度的溃烂。联合使用氯霉素、复方新诺明或氟哌酸进行药物防治效果较好。此外采用河流弧菌Ⅱ疫苗或噬菌体防治脓疱病，明显提高了成活率。２．脓毒败血症皱纹盘鲍脓毒败血症的病原菌为坎氏弧菌，存在于血淋巴液中而遍布全身各组织、器官，通过分泌胞外酶，破坏正常的组织结构而致鲍死亡，该…     

皱纹盘鲍食道的结构与功能

以组织学，组织化学，扫描电镜和透射电镜观察及酶活性测定等方法研究了皱纹盘鲍的食道，食道可分为前，中后，三段，中段又可分为食物通道和食道侧囊，食道粘膜上皮由纤毛柱状细胞，粘液细胞，闰状腺细胞，微绒毛细胞和分泌细胞组成，纤毛柱状细胞参与运输食物和分泌物，并呈现吸收细胞的结构特征；粘液细胞分泌中性和酸性粘多糖；颗粒状腺细胞内充盈分泌颗粒；微绒毛细胞呈现吸收细胞的特征；分泌细胞具有强的蛋白酶等酶活性，能以楔浆分泌形式分泌消化酶，该细胞还具有吸收和细胞内消化作用。食道中段还呈现3种植物多糖酶活性。     

皱纹盘鲍内脏脂质分析

对皱纹盘鲍内脏脂质进行了分析。采用Folch法提取内脏总脂,硅胶柱层析对中性脂及磷脂进行分离;TLC法对中性脂、磷脂不同组分进行分离与其主要组分的制备;10%硫酸—甲醇对样品进行甲酯化,通过气相色谱法对其进行脂肪酸分析比较。结果表明,皱纹盘鲍内脏中磷脂含量可达31.58%,不饱和脂肪酸在磷脂中含量显著高于中性脂中含量。磷脂中含有一定量的缩醛磷脂,磷酯酰乙醇胺(PE)中缩醛型磷脂含量可达50%。研究表明,皱纹盘鲍内脏中含有丰富的磷脂,多不饱和脂肪酸,并含有一定量的缩醛磷脂,具有较好的食用和药用价值,应得到充分利用。     

皱纹盘鲍蛋白酶的研究

利用分光光度计比色法测定了２－３ｃｍ的皱纹盘鲍的蛋白消化酶的最适温度、最适ＰＨ以及１１种金属离子对其的影响。结果表明：在最适温度５０℃下的活化能为４．８９×１０×４Ｊ／ｍｏｌ；最适ＰＨ为２．６０和５．００。对其最适ＰＨ值的分析表明：皱纹盘鲍存在有胃蛋白酶，且活性颇高。     

皱纹盘鲍营养生理学与疾病学研究进展

鲍类具有很高的营养价值,是一种非常重要的经济贝类,国内外对鲍类的研究主要集中在对皱纹盘鲍及其他一些种的摄食生理、营养需要及疾病防治等方面.本文主要从对皱纹盘鲍在不同生长阶段摄食、生长、发育等方面的研究及其在外界环境因素影响下的生理状况,皱纹盘鲍的营养需要与人工配合饲料的配制,以及皱纹盘鲍的主要细菌性、病毒性、寄生性病害的研究与防治等三个方面进行综述.     

皱纹盘鲍脓毒败血症病原菌的发现及初步研究

１９９２年９月至１９９４年１１月间，在大连沿海发现的致皱纹盘鲍脓毒败血症的一株病原菌，对皱纹盘鲍人工感染有很高的死亡率，并且与自然发病有相同的症状。     

4种多糖对皱纹盘鲍血细胞活性氧和血清凝集活力的影响

水温为(20.0±3)℃,盐度为30.0±1.5下,将灵芝多糖1、灵芝多糖2、脂多糖和酵母多糖分别配制成0、1.0、5.0、10、50、100、200μg·mL-1质量浓度,采用鲁米诺化学发光法(CL)和凝聚法检测其对皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)血细胞产生活性氧和血清凝集活力的影响。这些多糖均能增强鲍血细胞产生活性氧的能力和吞噬能力,其增强效果由强至弱依次为:灵芝多糖2>灵芝多糖1>脂多糖>酵母多糖;同种多糖中,急性组增强鲍血细胞活性氧产生和促进血清凝集活力的能力强于孵育组。本研究还比较了浸泡和注射灵芝多糖2(50μg·mL-1)和脂多糖(10μg·mL-1)对皱纹盘鲍血细胞活性氧产生和血清凝集活力的影响。结果表明,注射的效果优于浸泡。     

不同生长期皱纹盘鲍对水温适应能力的比较

将皱纹盘鲍依壳长分为4个组群，分别为4月龄组、1龄组、2龄组和3龄以上组。比较研究环境水温对皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）生长的影响以及不同发育阶段个体间的生长差异，结果表明，温度对皱纹盘鲍的生长影响显著，不同发育期的皱纹盘鲍对水温变化的适应能力不同。成鲍期生长适宜水温为10～22℃，水温高于26℃或者低于0℃出现死亡；壳长10～25mm的1龄鲍生长适宜水温为15～22℃，当水温升至26℃或者降至4℃时摄食量剧减，生长停滞；低于4℃则出现死亡；壳长3～6mm的4月龄鲍15℃以上开始生长，22℃生长最快。幼鲍阶段对水温变化的适应能力比成鲍弱，个体越小适应能力越弱。温度变化幅度加大时，鲍对水温的适应能力减弱。     

叶酸对皱纹盘鲍脂肪酸组成的影响

以皱纹盘鲍幼鲍Haliotis discus hannaiIno(平均壳长:13.90±0.01mm;平均体重:482.2±2.2mg)为研究对象,在室内循环水养殖系统中进行112d的摄食生长实验,以海带为对照,探讨饲料中不同叶酸含量(0.06、1.44、2.86、5.88、14.27、35.71mg/kg饲料)对皱纹盘鲍脂肪酸组成的影响。实验结果表明,(1)叶酸缺乏可显著降低皱纹盘鲍C20∶4n-6和C20∶5n-3的含量(P<0.05),却显著提高C18∶3n-3和C22∶6n-3的含量(P<0.05);(2)海带与实验基础饲料中的脂肪酸组成存在显著差异,海带中的C14∶1、C16∶0、C18∶1n-9、C18∶3n-3、C20∶4n-6、C20∶5n-3含量显著高于饲料组(P<0.05),而C18∶0、C18∶1n-7、C18∶2n-6、C20∶0、C22∶6n-3均显著低于饲料组(P<0.05);(3)海带组鲍鱼的C20∶4n-6、C20∶5n-3显著高于饲料组鲍鱼(P<0.05),而C18∶1n-9、C18∶1n-7、C18∶2n-6、C22∶6n-3则显著低于饲料组鲍鱼(P<0.05)。(4)C16∶0、C16∶1、C18∶0在鲍鱼体内的含量比较稳定,不受饲料中叶酸含量和脂肪酸组成的显著影响(P>0.05)。这些结果说明,饲料中叶酸缺乏导致皱纹盘鲍脂肪酸组成发生改变,很可能抑制C18∶2n-6和C18∶3n-3的碳链延长和去饱和作用,从而减少C20∶4n-6和C20∶5n-3的合成。此外,饲料中的脂肪酸组成也是影响皱纹盘鲍体组织脂肪酸组成的一个重要因素。     

Genetic variability of cultured populations of the Pacific abalone (Haliotis discus hannai Ino) in China based on microsatellites

The genetic diversity of cultured populations of the Pacific abalone (Haliotis discus hannai Ino) from northern China was analysed using seven microsatellite markers. The microsatellite loci were polymorphic for all the populations, with an average of 8.7 alleles per locus (range 8.0–9.4). The mean observed and expected heterozygosities were 0.547 (range 0.500–0.596) and 0.774 (range 0.754–0.787) respectively. The allelic diversity in terms of number of alleles per locus was considerably lower than that previously found in wild populations (range 21.8–23.0), indicating that bottleneck effects occurred when each population was founded. Significant genetic differentiation among the five cultured populations was shown using F_st and R_st values, and pairwise comparison based on allelic distribution. A neighbour‐joining analysis of the genetic distance did not show a consistent relationship between the geographic and the genetic distances, suggesting the existence of exchanges of breeds and eggs between the hatcheries. The results obtained in this study are useful for a number of areas of interest for fisheries management and the aquaculture industry, especially with regard to breeding programmes.     

周期性断食对皱纹盘鲍生长、摄食、排粪和血细胞组成的影响

对壳长为65mm的皱纹盘鲍进行投喂2d、饥饿1～4d的周期性断食处理,连续投喂组作为对照。皱纹盘鲍的摄食、生长、排粪和血细胞组成的研究结果表明,当投喂2d,饥饿天数少于2d时,皱纹盘鲍的生长没有显著差异(P>0.05),饥饿天数多于3d,鲍体重开始下降;摄食率呈随解饿时间增加呈升高趋势,但实验组间无显著差异(P>0.05);排粪率与粪便中的有机物含量随饥饿时间增长而降低,其中,各处理阶段间的差异显著(P<0.05)。血细胞中颗粒细胞的比例在饥饿少于2d的实验组间无差异,但显著高于投喂2d、饥饿3d的实验组与投喂2d、饥饿4d的实验组(P<0.05)。     

饵料对不同规格皱纹盘鲍能量收支的影响

对3种不同规格的皱纹盘鲍(41.40±2.05、54.22±2.66、63.17±2.52mm)分别进行不同饵料搭配的投喂,并对各生理活动的能量代谢进行了测量与计算。实验结果表明,搭配投喂的实验组中皱纹盘鲍能够摄取更多的有机物作为能量代谢的基质。扣除代谢能、排泄能和排粪能后,搭配投喂能提供给皱纹盘鲍的生长能显著高于对照组(P<0.05),尤其是孔石莼与裙带菜搭配投喂组以及裙带菜与海带搭配投喂组,其获得的生长能的比例在3种规格组中均处在很高的水平,是鲍的筏式养殖中值得推广使用的投喂方法。     

Suitability of cage culture for Pacific abalone Haliotis discus hannai Ino production in China

Pacific abalone (Haliotis discus hannai Ino) aquaculture is a thriving industry in China. This study describes a novel submerged cage culture system for abalone rearing in Fujian, South China. The cage consisted of five vertical slots that were oriented perpendicular to the flow of water. The slots were separated by six vertically connected plastic plates for abalone attachment and shelter at the bottom of the cage. Experiment 1 was designed to determine the appropriate stocking density at the start of the abalone sea‐based production cycle. Eight‐month‐old hatchery reared and size‐graded juveniles were transferred to the sea‐based culture system. For different stocking densities, shell length of juveniles obtained in this novel culture system on 2, 3.5 and 5 months, respectively, was compared with shell lengths obtained in a traditionally multi‐tier basket culture system. In Experiment 2, daily growth rates (DGRs) in shell length and biomass in terms of wet weight of 2‐year‐old abalones reared in cage and tiered basket culture systems were compared over a 6‐month period. Results of Experiment 1 showed that growth of abalone in the cage culture system is density‐dependent; the mean final shell length of juveniles obtained was 6.7–15.9% higher than in tiered baskets system even at the same initial stocking density. In Experiment 2, DGRs in shell length of 53.83–78.38 μm day^?1 obtained in cage system were significantly higher than that in tiered baskets (P < 0.01). And in terms of wet weight biomass, it was 1.48–3.01 times higher in the cage system compared with the traditional system. Abalone survival was more than 87.5% in both culture systems in both experiments. Advantages of the newly established cage culture system included better growth performance of the animals reared and potential improvement of rearing conditions, such as improved water flow velocity and dissolved oxygen.     

Production and sinking rates for bio‐deposits of abalone (Haliotis discus hannai Ino)

Particle size distribution, organic content and the sinking velocity of bio‐deposits of abalone Haliotis discus hannai Ino were evaluated. The abalone was divided into three size classes according to shell length: Group B: 68.8 ± 2.8 mm, group M: 56.1 ± 2.3 mm and group S: 42.4 ± 2.8 mm. The faecal pellets had an amorphous shape, with a cross‐sectional area ranging from 0.01 to 2.64 mm². The mean cross‐sectional area varied among the size classes: 0.59 (B), 0.21 (M) and 0.12 (S) mm². The bio‐deposit organic content was similar among the groups (B: 18.3 ± 1.1%; M: 19.9 ± 0.9%; S: 19.3 ± 1.0%). Sinking velocity ranged from 0.5 to 2.3 cm s^?1. Larger abalone tended to have larger and thus faster‐sinking faecal pellets. The median sinking velocity for groups B, M and S was 0.9, 0.5 and 0.7 cm s^?1 respectively. The mean daily production rates for groups S, M and B were 2.8 ± 1.2, 3.4 ± 1.3 and 4.3 ± 1.8 g ind.^?1 respectively. Bio‐deposit production rate estimated to be between 134.4 and 206.4 mg m^?2 day^?1 in the bay. Our results suggest that the pellet size was within the appropriate size range for filter‐feeding bivalves.     

皱纹盘鲍消化道粘液细胞的类型与分布

采用阿新兰—过碘酸雪夫氏反应 (AB -PAS)染色方法显微观察和分析了皱纹盘鲍成贝消化道粘液细胞的类型与分布。据所显示颜色的不同 ,将粘液细胞分为Ⅰ—Ⅳ 4种类型 :分别呈红色、蓝色、紫红色和蓝紫色。口区唇上皮分布有大量粘液细胞 ,以Ⅱ型为主 ,另有少量Ⅳ型 ,主要为杯形并多为大型细胞。口球上皮及齿舌囊上皮粘液细胞分布密度高 ,以Ⅱ型为主 ,Ⅳ型次之。食道前段上皮有大量粘液细胞分布 ,中段和后段粘液细胞逐步减少 ,主要为Ⅱ型。肠各段上皮均有粘液细胞分布 ,但下行肠道比上行肠的粘液细胞相对多些 ,也以Ⅱ型为主 ,多为杯形和近圆形。直肠内、外上皮均有大量Ⅱ型粘液细胞分布 ,近圆形的较多。在嗉囊、胃盲囊和胃未见明显着色的粘液细胞