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基因组DNA的提取及RAPD条件优化 总被引:15,自引:0,他引:15
提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶 相似文献
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采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl2 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。 相似文献
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枣树基因组DNA提取及其RAPD体系优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以不同生长期的枣和酸枣为研究对象,采用CTAB法提取枣基因组DNA;通过单因素5水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了枣和酸枣RAPD技术最优体系,即25μl反应体系中各组分含量为10×Taq Buffer+KCl 2.5μl;Taq DNA聚合酶0.04 U/μl;MgCl22.0 mmol/L;模板DNA2 ng/μl;引物0.3μmol/L;dNTP为0.2 mmol/L。适宜的扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃循环变性50 s,36℃退火50 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;72℃延伸10 min。 相似文献
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长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
采用改良的CTAB法提取杜鹃花的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的杜鹃花RAPD反应的最佳体系为25μL反应体系中包括模板DNA20~200ng.引物10pmol,dNTPs100μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.5U,Mg2 2.5 mmol·L-1,10xbuffer缓冲液2.5 mmol·-1,其余部分用无茵超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环;72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为长白山杜鹃花品种鉴定、分类的研究提供了一定基础. 相似文献
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核果类基因组DNA提取和RAPD条件优选 总被引:25,自引:0,他引:25
采用3种方法分离杏、桃等核果类树种的基因组DNA,比较了其分离效果。并以此为模板进行RAPD反应,调整RAPD反应体系组成和热循环条件,以进行该树种的系统分类研究。 相似文献
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枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]研究枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化。[方法]采用了进一步优化的CTAB法提取枸杞基因组DNA,检测所提取的DNA的浓度范围,并对RAPD反应体系进行了科学、合理的优化。[结果]结果表明,浓度范围在3.5~5.5μg/μl,完全能够满足RAPD—PCR的要求。[结论]该方法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于枸杞基因组DNA的提取。 相似文献
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苜蓿基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨 总被引:3,自引:0,他引:3
比较了CTAB法和SDS法提取苜蓿基因组总DNA的效果,这两种方法得到的全基因DNA具有较好的完整性,但从DNA的提取纯度可以看出,CTAB法优于SDS法.实验对苜蓿RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含10×Buffer(20mM MgCl2),1UTaq酶,25ng的模板DNA,150 mol/L的dNTPs,0.2 mol/L引物.PCR反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性15 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min;最后4℃保存. 相似文献
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余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化 总被引:12,自引:3,他引:12
以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶. 相似文献
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长白山林下参基因组DNA提取及RAPD体系的优化 总被引:1,自引:1,他引:1
采用改良的CTAB法提取林下参的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的林下参RAPD反应的最佳体系为20“L,反应体系中包括模板DNA20ng,引物20pmol,dNTPs0.1875mmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U,Mg^2+2.0mmol/L,10×Reaction Buffer2.0mmol/L,其余部分用无菌超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环,72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为通过分子标记获得丰富的林下参遗传信息奠定了基础. 相似文献
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苦瓜的性别分化过程要先经过一个两性期,再分别向雄性或雌性的方向发育. 对两性期和雄,雌花早期发育的3个典型时期的花蕾进行毛细管电泳分析,结果表明,一种分子量为11 kD的蛋白质在雌花发育的3个时期都存在,并且含量变化很小,很可能是雌花程序表达中的一种"关键蛋白";类似地,一种分子量为30 kD的蛋白质很可能是雄花程序表达中的一种"关键蛋白".此外,蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮抑制离体两性花的体外性别分化,而核酸合成抑制剂3-脱氧腺苷则不影响两性花的体外性别分化. 相似文献
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S195柴油机技术状态参数与排烟关系的试验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
外源GA3和CCC处理可以调节株洲长白品种苦瓜的性别表现.外源GA3有促雌作用,使第一雄花形成推迟,第一雌花形成提前.植株总的雌花数和雌、雄花比值较对照明显上升.低浓度的CCC(50~200mg/L)表现出促雄作用,高浓度的CCC(500mg/L)则表现为促雌作用.GA3在0.04~4mg/L对苦瓜离体两性花的性别分化有促雌作用,0.4~40mg/L的CCC则有促雄作用,高浓度的CCC具有促雌作用.核酸合成抑制剂3′-脱氧腺苷不影响离体两性花的性别分化,而蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮则抑制两性花的性别分化,激素对性别分化向雌或雄的程序表达的调控发生在翻译水平上 相似文献
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[目的]调查春、秋两季苦瓜白化苗生长发育情况。[方法]选取2015年早熟纯系品种ZS10-7种子1 000粒,分别在2016年春、秋两季各播种500粒,对出现的白化苗进行跟踪调查。[结果]秋季苦瓜白化苗较春季苦瓜白化苗生长发育要快一些,总体的性状尺寸相差无几。[结论]苦瓜白化苗实际存活时间不超过30 d,一旦发现有白化苗可直接拔去。 相似文献
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[目的]比较不同苦瓜品种果肉中游离态和结合态多酚含量及其抗氧化能力差异。[方法]选用14个代表性的苦瓜品种,分析其果肉中的游离态和结合态总酚含量及其单体酚类的组成,采用铁离子还原能力(FRAP,Ferric reducing/antioxidant power)、DPPH (1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基,1,1-diphenyl-2-picrylhydrazy)和ABTS+·(2, 2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸, 2, 2’-azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid di-ammonium salt)自由基法测定其抗氧化能力差异,同时分析其多酚含量和抗氧化活性的关系。[结果]14 个不同苦瓜品种的游离态酚、结合态酚和总酚含量分别介于157.58~382.92、6.46~54和175.27~413.79 mg GAE/100 g DW,变异系数分别为23.50%、61.04%和21.58%,游离态酚含量占总酚含量的91.34%,结合态酚含量仅占总含量的8.66%;14 个品种的总黄酮含量介于8.97~18.22 mg CE/100 g DW,变异系数为22.80%;苦瓜中主要单体酚类物质香草醛酸、表儿茶素和芦丁含量亦存在显著的品种间差异,品种间的变幅分别为1.83~9.29、35.17~114.52 和0.91~4.53mg/100 g DW,变异系数分别为43.85%、26.97%、33.09%。FRAP抗氧化能力为 272.16~713.32 mg TE/100 g DW,变异系数为 27.67%;DPPH 清除能力的 IC50值为 11.43~34.14 mg GAE/100 g DW,变异系数为35.10%;ABTS+·清除能力的 IC50值为 21.57~119.71 mg GAE/100 g DW,变异系数为 63.75%。总酚含量与 FRAP 值呈极显著正相关(P<0.01),与DPPH和ABTS+·清除能力的IC50值分别呈极显著负相关(P<0.01)。[结论]14个不同苦瓜品种的游离态酚、结合态酚和总酚含量分别介于 157.58~382.92、6.46~54 和175.27~413.79 mg GAE/100 g DW,变异系数分别为23.50%、61.04%和21.58%,游离态酚含量占总酚含量的 91.34%,结合态酚含量仅占总含量的 8.66%;14个品种的总黄酮含量介于8.97~18.22 mgCE/100 g DW,变异系数为22.80%;苦瓜中主要单体酚类物质香草醛酸、表儿茶素和芦丁含量亦存在显著的品种间差异,品种间的变幅分别为1.83~9.29、35.17~114.52和0.91~4.53 mg/100 g DW,变异系数分别为43.85%、26.97%、33.09%。FRAP抗氧化能力为272.16~713.32 mg TE/100g DW,变异系数为27.67%;DPPH清除能力的IC50值为11.43~34.14 mg GAE/100 g DW,变异系数为35.10%;ABTS+·清除能力的IC50值为21.57~119.71 mg GAE/100 g DW,变异系数为63.75%。总酚含量与FRAP值呈极显著正相关(P<0.01),与DPPH和ABTS+·清除能力的IC50值分别呈极显著负相关(P<0.01) 相似文献
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苦瓜性别分化的形态与组织化学研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以石蜡切片法研究苦瓜性别分化的形态学.苦瓜的性别分化首先要经过两性期,然后再分别向雌或雄的方向发育.以显微分光光度法分析两性花及典型发育时期的雄、雌花中雄蕊和雌蕊组织的RNA和蛋白质的相对含量,得出两性花的发育方向与相应组织中的RNA和蛋白质合成能力的强弱有关.在苦瓜的性别分化与表达中,雄蕊组织和雌蕊组织的RNA和蛋白质合成能力总是一强一弱,从而保证了性别分化的结果是某一性别的单性花 相似文献