富硒麦芽对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌血管生成的影响

试验选择雄性SD大鼠100只,体重100~120 g,随机分成3组。试验Ⅰ组日粮中添加富硒麦芽（SEM）使硒含量达到3.0 mg/kg;试验Ⅱ组为模型组;试验Ⅲ组为阴性对照组,不诱癌不加SEM;试验Ⅱ、Ⅲ日粮中分别添加亚硒酸钠使硒含量达到0.1 mg/kg。试验Ⅰ、Ⅱ组饮水中添加100 mg/L二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine,DEN）诱癌,维持DEN摄入量每天约10 mg/kg体重,连续16周,然后改饮普通灭菌水至18周末。试验Ⅲ组始终以普通灭菌水自由饮用。18周末,处死大鼠。利用免疫组织化学法分析大鼠肝肿瘤微血管密度（microvessel density,MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果表明,SEM组MVD和VEGF表达较模型组显著降低。因此,表明SEM对肝肿瘤血管生成有抑制作用,下调VEGF表达可能是其抑制肿瘤血管生成的主要机理之一。     

实时荧光定量RT-PCR检测犬乳腺肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)基因方法的建立及初步应用

为了准确地分析血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）在犬乳腺肿瘤形成过程中的作用,试验设计了针对犬VEGF基因的特异性引物,提取乳腺肿瘤组织RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了乳腺肿瘤VEGF基因实时荧光定量PCR检测方法。运用实时荧光定量PCR检测了40例不同的犬乳腺肿瘤病例、2例正常乳腺组织。结果发现：在犬恶性乳腺肿瘤组织中,VEGF基因表达量明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织（P〈0.001）;在伴有淋巴结转移的犬乳腺癌组织中,VEGF基因表达量明显高于没有发现转移的乳腺癌组织（P〈0.01）,但VEGF基因的表达量与肿瘤的大小和发病动物年龄无关（P〉0.05）。VEGF基因在犬乳腺癌组织中的表达量远高于其在正常乳腺和良性乳腺肿瘤组织中的表达,且与淋巴结是否发生转移相关。因此,VEGF可作为犬乳腺癌转移、复发的预测指标之一。     

血管内皮生长因子基因在辽宁绒山羊胎儿期皮肤毛囊发育中表达及其与微血管密度关系的研究

为探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在辽宁绒山羊胎儿期皮肤毛囊发育中的表达规律及其与皮肤微血管密度(microvessel density,MVD)的关系,采用免疫组化方法对VEGF辽宁绒山羊胎儿期不同阶段的表达及MVD进行检测。结果表明,VEGF在辽宁绒山羊胎儿期75 d后的各个时期皮肤毛乳头及毛囊内根鞘上表达,同时随着胎龄的增加,VEGF阳性区域的平均光密度亦随之增加;且皮肤中MVD也随着日龄的增加而逐渐增加,毛囊上的VEGF平均光密度与MVD呈极强正相关(r=0.966,P=0.007)。     

血管内皮细胞生长因子在鸡马立克病肝脏肿瘤中的表达

为研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)在鸡马立克病肝脏肿瘤中的表达,探索其在马立克病(MD)肿瘤形成中的作用与机制。采用实时荧光定量PCR技术、Western blot技术,检测MD病毒组鸡肝脏肿瘤及正常组鸡肝脏中VEGF mRNA和蛋白质的表达。结果表明,MD病毒组鸡肝脏VEGF的mRNA和蛋白表达水平极显著高于正常组(P<0.01)。表明VEGF参与了MD肿瘤的形成。     

血管内皮生长因子对哺乳动物生殖的影响

睾丸间质细胞和支持细胞产生的血管内皮生长因子(VEGF)可能以旁分泌形式调节精子发生的微环境并影响精子发生。VEGF可能影响卵泡内血管通透性和血管发生,并参与排卵过程。胚胎着床期着床胚泡处的腔上皮细胞和腔上皮下的基质细胞中VEGF表达明显增加。子宫增殖期间VEGF表达的不断增加和VEGF受体2的高表达可能与月经后子宫内膜重建时快速的毛细血管增生有关。     

血管新生调控因子在非霍奇金淋巴瘤中的研究进展

1992年Folkman等首次证实,肿瘤在缺乏血管新生的条件下仅能生长2~3 mm,并提出了肿瘤的生长依赖血管形成的假说。自此,血管新生在肿瘤领域内的研究有了重大进展。血管新生是指在已经存在的血管的基础上以出芽的方式形成新的微血管,是肿瘤生长和播散所必需的。血管发生受各种不同的正、负生成血管因子的调控。促进血管生成的因子包括血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子-I(IGF-1)等;抗血管生成因子包括血管抑制素、内抑制素、白介素-1(IL-1)等,其中VEGF及bFGF是作用最强、特异性最高的血管新生正调控因子。本文就VEGF、bFGF在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的研究现况作一综述。1 VEGF、bFGF简述1.1 VEGF的生物学特性VEGF是一种结构具有高度保守的同源二聚体糖蛋白,人类VEGF基因全长为28kb。人至少有4种VEGF,其中VEGF 121和VEGF165为可溶性分泌蛋白,能促进血管内皮细胞有丝分裂及增加内皮通透性;VEGF189和VEGF206为不可溶性分泌蛋白,与肝素紧密结合。VEGF165为最常见的形式,也是主要效应...     

三氧化二砷对鸡马立克病病毒诱导鸡肝脏肿瘤中血管生长相关因子表达的影响

为了探讨三氧化二砷(As2O3)对马立克病病毒(MDV)诱导鸡肝脏肿瘤中血管生长相关因子表达的影响,构建了鸡马立克病病例模型,通过腹腔注射As2O3(3.0 mg/kg体重),于35 d,40 d与45 d观察临床症状及血管组织病理学改变,采用半定量RT-PCR法检测肝脏肿瘤中血管生长相关因子VEGF、KDR及bFGF mRNA表达水平。结果表明,MD病鸡肝脏肿瘤内VEGF、KDR及bFGF mRNA均高水平表达,As2O3能够下调肿瘤组织内VEGF、KDR与bFGF mRNA的表达水平,并呈现时间效应。揭示As2O3能够通过下调肝脏肿瘤组织中VEGF、KDR与bFGF mRNA的表达水平,减少血管的生成,进而抑制肿瘤生长,这是As2O3抗肿瘤作用机制之一。     

一例犬前肢血管周细胞瘤的病理及免疫组化分析

血管周细胞瘤是一种软组织肉瘤,起源于毛细血管壁的周细胞。在本报道中,描述了一只11岁中华田园犬的左腿腕关节肿块。为确定肿块性质,采用影像学、细胞学和病理学检查加以诊断。X光检查显示肿瘤始于软组织,肿物界限清晰;细胞学检查显示细胞呈梭形,核仁明显,细胞核大小不一;病理组织学结果显示存在围绕血管的梭形细胞;免疫组织化学结果显示波形蛋白和α-SMA阳性表达,desmin和S-100阴性表达,肿瘤组织中PCNA阳性肿瘤细胞的数量大于25%,Masson trichrome染色显示肿瘤组织中胶原纤维的含量少。结合病理学及免疫组化确诊为血管周细胞瘤。     

美洲大蠊小肽对鸡小黄卵泡外膜细胞增殖和血管生成的影响

为了探讨美洲大蠊小肽对鸡小黄卵泡外膜细胞增殖和血管生成的影响,试验用不同浓度的美洲大蠊小肽(400,800,1 200μg/mL)处理体外培养的鸡小黄卵泡外膜细胞,以正常细胞作为空白对照,采用CCK-8法分别在0,12,24,48小时检测细胞活力,筛选最佳药物浓度和作用时间;用EdU法检测细胞增殖能力;用实时荧光定量PCR法和Western-blot法分别检测各组细胞中ANXA2、VEGF的mRNA及其蛋白质的表达量;通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验检测不同浓度美洲大蠊小肽对血管生成的作用。结果表明：与对照相比,美洲大蠊小肽能够提高鸡小黄卵泡外膜细胞的细胞活力,显著促进细胞增殖(P<0.05),最佳药物浓度及作用时间为800μg/mL、24 h。800μg/mL美洲大蠊小肽能够显著上调鸡小黄卵泡外膜细胞中ANXA2和VEGF的mRNA和蛋白质表达量(P<0.05)。不同浓度美洲大蠊小肽均具有显著的促血管生成作用,800μg/mL组效果最明显(P<0.05)。说明美洲大蠊小肽能显著促进鸡小黄卵泡外膜细胞增殖和血管生成,其可能是通过ANXA2和VEGF发挥调控作用的。     

不同饲养环境下小尾寒羊卵巢血管发生相关因子表达差异研究

本试验采用实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR),检测小尾寒羊在原产地山东菏泽与引入地甘肃临夏两个不同饲养环境下卵巢组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、促血管生成素/酪氨酸激酶受体信号通路(Angiopoietin/Tyrosine Kinase Receptors2, Ang/Tie-2),包括血管生成素-1(Angiopoietin-1, Ang-1)、血管生成素-2(Angiopoietin-2, Ang-2)、酪氨酸激酶受体-2(Tyrosine kinase receptors, Tie-2)5个基因的相对表达量,结果显示,VEGF、Ang-1、Tie-2在原产地和引入地的小尾寒羊卵巢中表达量差异显著(P0.05),CTGF的表达量差异极显著(P0.01)。说明不同的饲养环境会引起小尾寒羊卵巢血管发生因子的表达差异,从而在一定程度上影响其高繁殖力潜能的发挥。     

绵羊发情周期子宫内膜微血管密度与VEGF的表达关系

以绵羊发情周期的子宫内膜为研究对象,采用免疫组化方法定量检测绵羊发情周期子宫内膜的微血管密度（MVD）和血管内皮生长因子（VEGF）表达量。结果表明：MVD的标记物CD34和VEGF在绵羊发情周期的子宫内膜中呈现相同的表达特征,即表达位点均在子宫内膜上皮固有层及肌层;两者均在发情后0d开始表达,5d最高。5d开始到15d表达量缓慢下降。子宫内膜VEGF表达量和MVD相关系数r=0.669,P=0,表明子宫角中VEGF表达量和MVD显著正相关。     

微波消融治疗对原发性肝癌患者血清VEGF表达影响及临床意义

[目的]观察微波消融治疗原发性肝癌(PHC)对血清血管内皮生长因子(VEGF)的影响.[方法]采 用ELISA方法测定60例PHC患者微波消融治疗前后和60例健康查体者血清VEGF水平.[结果]PHC组治疗前和治疗后血清VEGF水平均显著高于对照组,相比较差异有统计学意义(P＜ 0.05); PHC组治疗后3d血清VEGF水平显著上升,治疗后7d血清VEGF水平显著下降,与治疗前比较有显著性差异(P＜0.05);VEGF在不同年龄、性别、肿瘤直径大小患者血清中的表达差异无统计学意义(P＞0.05),而VEGF水平在不同的临床分期、肿瘤远处转移与否之间比较差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]微波消融治疗PHC可通过抑制VEGF的表达来达到抑制肿瘤生长和转移,血清VEGF水平可作为评估微波消融治疗的临床疗效及肿瘤残存、复发、转移的一个有效的预测指标.     

脂多糖对断奶仔猪外周血免疫细胞和免疫器官中PPARγ mRNA表达水平的影响

研究脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)对断奶仔猪外周血白细胞、胸腺、脾脏和肠道淋巴结过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARγ) mRNA表达水平的影响,探讨免疫应激是否影响免疫细胞和免疫器官PPARγ mRNA的表达.选取12头健康的(21±1)d断奶仔猪,分成2个处理,每个处理6个重复.试验组注射100μg/kg BW的LPS,对照组注射等量的生理盐水.于注射LPS后1.5和3h,采血分离血浆、白细胞;注射LPS后3h屠宰仔猪,取胸腺、脾脏和肠道淋巴结进行相关检测.结果表明:(1)LPS刺激后1.5和3h,肿瘤坏死因子TNF-α和皮质醇含量均急剧上升(P<0.001);LPS刺激后3h,胰岛素含量显著下降(P<0.001),胰高血糖素含量显著上升(P<0.001).此外,LPS刺激也导致血液生化指标发生了显著变化.这表明LPS刺激导致机体处于急性免疫应激状态.(2)LPS刺激导致外周血白细胞(P<0.001)、胸腺(P<0.05)和肠道淋巴结(P<0.05)的PPARγ mRNA表达量显著升高,表明免疫应激诱导了免疫细胞和免疫器官中PPARγ mRNA的表达.提示PPARγ可能参与仔猪免疫应激的调控,可能成为缓解免疫应激的一个新靶点.     

大通牦牛心肌低氧适应的组织学特点

选取两个海拔高度大通牦牛作为研究对象,以乐都地区牦牛为对照,利用光镜技术和计算机图像分析系统测定心肌肌纤维直径、表面积密度;利用透射电镜技术比较心肌线粒体的平均体积(V)、体积密度(VV)和面数密度(NA)等结构参数;利用免疫组织化学技术对心肌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和微血管密度(MVD)进行检测,并对以上数据进行相关性分析。结果显示:(1)大通牦牛心肌肌纤维直径均细于乐都地区牦牛心肌肌纤维直径,肌纤维表面积密度均高于乐都地区牦牛,且三者两两比较差异显著(P<0.05);(2)大通牦牛的VEGF和MVD均高于乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05);(3)大通牦牛心肌线粒体的V和VV均大于乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05);海拔3 700m的大通牦牛心肌线粒体面数密度大于海拔3 200m的乐都地区牦牛,差异显著(P<0.05)。结果表明,大通牦牛心肌组织主要表现为心肌纤维直径细、表面积密度大、心肌组织血管内皮生长因子和微血管密度大的遗传学特点。而心肌线粒体的低氧适应表现为,随着海拔高度的增加,心肌线粒体平均体积增大,面数密度和体密度增加的特点。     

血管内皮生长因子在绵羊肺脏中的表达分布研究

目的研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在绵羊肺脏中的表达分布特征。方法取成年绵羊肺脏组织,制备石蜡切片,利用HE染色法观察绵羊肺脏组织的形态结构,采用免疫组织化学方法检测VEGF在绵羊肺脏组织中的分布。结果肺脏的各类型细胞均可见VEGF表达,在绵羊肺脏导气部的细支气管和终末细支气管的上皮细胞,呼吸部的肺泡管和呼吸性细支气管的上皮细胞,以及肺的血管内皮细胞均可检测到VEGF的强阳性表达信号。结论VEGF广泛分布于绵羊肺脏组织中,对其形态结构和功能的维持具有重要作用。     

转抗仔猪腹泻基因α1-盐藻糖转移酶克隆猪的胰岛素样生长因子2表达分析

为探求转基因克隆猪存在早期死亡率高及生长发育异常等原因,本研究首次以转抗仔猪腹泻基因α1-盐藻糖转移酶(fucosyl transferase 1,FUT1)阳性及阴性克隆猪的脾脏、肝脏及腿肌组织为试验材料,利用qRT-PCR技术定量检测影响胎儿及仔猪早期生长发育的印记基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)的表达情况,并以普通妊娠分娩猪为对照,分析其差异及变化.结果显示,IGF2基因在3类仔猪中均存在组织表达差异性,其中肝脏组织中表达量最高,腿肌组织中表达量最低.分析发现,IGF2基因在转FUT1阳性克隆猪脾脏组织中的表达量显著高于转FUT1阴性克隆猪(P<0.05),在腿肌组织中则显著低于阴性克隆猪(P<0.05).此外,转FUT1阴性克隆猪的脾脏、肝脏组织IGF2表达量分别极显著低于、高于普通猪(P<0.01).提示IGF2基因的表达变化可能与克隆猪早期生活力弱有关,但与转FUT1基因克隆猪早期死亡率高的关系还需进一步研究.     

Advances in studies on vascular endothelial growth factor receptor and its small-molecule inhibitors

目前抗血管生成治疗是抗肿瘤研究的热点.血管内皮生长因子(VEGF)是刺激血管生成的重要因子之一,血管内皮生长因子受体(VEGFR)在肿瘤新生血管中高表达,因此成为肿瘤靶向治疗的理想靶点.以VEGF、VEGFR为靶点的抗肿瘤药物除了常见的单克隆抗体药物阿伐斯汀外,小分子抑制剂舒尼替尼、索拉非尼等也已经广泛使用;另外,一些具有上市潜力的药物,如范得他尼、西地尼布、瓦他拉尼、阿西替尼等也值得关注.已上市和正在进行临床研究的VEGFR小分子抑制剂按结构大致分为6类:喹啉及喹唑啉类、哒嗪类、吲唑类、咪唑和吡咯嘧啶类、吲哚类和其他结构等.对VEGF、VEGFR的生物学功能,其代表性的小分子抑制剂研究进行综述.     

抑制素与乙肝表面抗原融合基因免疫对大鼠生殖能力的影响

90只大鼠随机分为5组(n=18),分别肌肉注射10、50、100μg抑制素与乙肝表面抗原融合基因表达质粒(pCIS)、50μg空载体(pcDNA3.1)和100μL生理盐水。20 d后加强免疫1次,对每组中的12只大鼠进行2次加强免疫。结果发现抑制素抗体P/N值随着免疫次数的增加而提高。100μg剂量组2次和3次免疫的成熟卵泡发育数分别比对照组多6.9和7.5个(P<0.05)。3次免疫后大鼠成熟卵泡发育数比2次免疫后显著提高(35.2±2.73 vs 31.0±0.92,P<0.05)。抑制素基因免疫组的胎盘数和窝产仔数高于对照组(P>0.05),抗体阳性鼠高于阴性鼠(P<0.05)。pCIS 3次免疫后抗体阳性鼠的抗体水平与成熟卵泡发育数的相关系数为0.45(P>0.05),与胎盘数的相关系数为0.77(P<0.05)。pCIS免疫大鼠动情期和产后血浆FSH水平高于对照组,抗体阳性鼠的血浆FSH水平高于阴性鼠,其中2次免疫后阳性组动情期FSH浓度极显著高于阴性组(P<0.01)。这些结果表明,抑制素基因免疫大鼠可促进大鼠的卵泡发育,提高血浆FSH水平,为抑制素基因免疫大动物提供了试验依据。     

高原牦牛睾丸组织VEGF及其受体的增龄性分布特点

探索VEGF及其受体(VEGFR2)在不同年龄牦牛睾丸的分布特点。应用免疫组织化学SP法检测VEGF及其受体(VEGFR2)分布特征并通过IPP图像分析软件进行定量统计。免疫组织化学显示,不同年龄段牦牛睾丸中,VEGF表达于各级生精细胞以及Sertoli细胞和Leydig细胞,强表达于长形精子,小血管内皮细胞见强阳性表达,肌样细胞未见表达;其受体VEGFR2表达于各级生精细胞及Sertoli细胞,且Leydig细胞内强表达,小血管弱表达;牦牛幼龄期至性成熟期,睾丸中VEGF表达量呈明显上升趋势(P0.05),性成熟期达到最高水平,进入老龄期后表达量明显下降(P0.05);其受体VEGFR2表达量性成熟前期最高,进入老龄期下降不明显。因此,牦牛睾丸中VEGF及其受体随年龄增加存在差异性表达,幼龄期随增加明显,性成熟期趋于稳定,老龄后下降显著,提示其可能参与调节牦牛生后睾丸发育的各个阶段,且与高原牦牛睾丸血管发育,生精及其低氧适应具有一定的关系。     

山羊妊娠早期胎儿胎盘血管形成及相关基因的表达

旨在探究大足黑山羊妊娠早期胎儿胎盘血管发育、分布和血管生成相关因子表达状况,并对血管生成相关因子表达之间和血管发育进行相关性分析。本研究随机选取15只8月龄、体格相近、身体健康的国家级畜禽遗传资源—大足黑山羊青年母羊,经同一种公羊自然交配后(以末次配种当天记为0 d),经剖腹产手术采集妊娠第20、25和30天的胎儿和胎儿胎盘以及经屠宰采集妊娠第45和60天的胎儿和胎儿胎盘作为研究对象,通过免疫组化法评估胎盘血管发育和分布情况,采用qRT-PCR技术检测主要血管生成相关基因的mRNA表达水平,分析血管生成相关基因之间以及与胎盘血管发育分布的相关性。结果显示,胎儿体重和体长随着妊娠的进行逐渐增加,且血管内皮细胞阳性率处于较高水平(>26%)。山羊胎儿胎盘毛细血管总面积/组织区域面积(CAD)逐渐升高;毛细血管总数/单位组织区域面积(CND)在妊娠25~30 d增加,30~60 d降低,毛细血管总面积/毛细血管根数(APC)呈相反趋势;毛细血管总周长/单位组织区域面积(CSD)无显著变化。妊娠早期胎儿胎盘VEGFA的表达量随着妊娠的进行逐渐升高,且与血管分布存在一定的相关性,其受体FLT1和KDR表达量呈先增高后降低的趋势,分别在30和45 d达到峰值。血管生成相关基因ANGPT1/2及其受体TEK和FGF2及其受体FGFR2的表达均在妊娠30 d时较高。综上表明,在妊娠30 d前,胎儿胎盘主要通过毛细血管形成分支促进血管面积的增加;而在30~60 d,主要通过单位血管的增粗促进血管面积的增加,并且血管生成相关基因的表达在妊娠30 d时较高,这可能和子叶开始形成有关。山羊妊娠早期胎儿胎盘中VEGFA可能通过其受体结合与其他血管生成因子共同作用调控胎儿胎盘血管形成。