鸭“白点病”（暂定名）病原学研究

对3个“白点病”（暂定名）发病严重的鸭场的病死鸭进行细菌学检查均为阴性，但均分离到病毒。对其中1株病毒进行了鉴定。负染及超薄切征电镜观察，可见呈球形或卵圆形、直径80-230nm、有囊膜的病毒。经理化特性、生物学特性及核酸类型测定，确定该病毒为疱疹病毒科成员。血清中和试验表明，该病毒与鸭瘟病毒、鸭疱疹病毒Ⅱ型无血清学相关性，故暂定名为鸭疱疹病毒Ⅲ型。人工感染试验复制出与自然感染病死鸭相同的病变，初步证明该病毒为鸭“白点病”病原。     

鸭疫巴氏（鸭疫里氏）杆菌分离与鉴定

本文对采自福建闽南,闽北等地表现国鸭传染性浆膜炎的病死鸭组织进行病原分离与人工感染试验。并对病原菌株进行细菌学及血清学鉴定,确定其病原菌均为鸭疫巴氏杆菌Ｉ型。     

犬Ⅱ型腺病毒的分离鉴定

在做犬腺病毒分子流行病学调查的过程中，从送检的犬粪便中分离出多株犬腺病毒，并对其中１株进行了系统鉴定。经形态学、理化学、血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学鉴定，证明为１株犬传染性喉气管炎病毒的强毒，即犬Ⅱ型腺病毒。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

鸭病毒性肝炎(duck virus hepatitis,DVH)是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对松原市某鸭场送检的病死鸭进行病毒分离试验、雏鸭回归试验、DHV分离株ELD₅₀测定、雏鸭保护试验、鸡胚中和试验、鸭胚接种试验和电镜观察等,确诊该病为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。试验所分离得到的Ⅰ型鸭肝炎病毒与标准毒株的回归试验病理特征存在一定差异,其基因序列的测定及分析还有待于进一步研究。     

犬疱疹病毒的分离鉴定

犬疱疹病毒引起１周龄以下仔犬严重和高死亡的疾病，用犬肾传代细胞ＭＤＣＫ，从濒死发病犬的；肾脏器官分离获得一株疱疹病毒，经鉴定为犬疱疹病毒。培养液观察病毒大小为１４０ｎｍ有囊膜病毒，核酸型为ＤＮＡ，对乙醚敏感，对热抵抗力弱，５６℃经４分钟灭活，ｐＨ４．５时３０分钟失去感染力，用分离毒接种７日龄的幼犬引起典型的疱疹病毒感染症状，并从人工感染试验的幼犬回收到病毒。     

鸭冠状病毒的分离鉴定

鸭冠状病毒的分离目前国内外尚无报道。我们将回归发病鸭的肠粪及肠内容物处理后，经羊膜腔、尿囊腔接种１２￣１４日龄鸭胚，３７℃培养４８小时后取羊水和尿囊液继代，将第５代的鸭胚羊水、尿囊液混合并对其进行系统鉴定。结果表明：该病毒在鸭胚，其ＴＣＩＤ５０为５．０，电镜负染观察多呈不规整的圆形，直径８０￣１２０ｎｍ，有囊膜，病毒粒子外周有花瓣样突起，核酸型为ＲＮＡ型，对乙醚敏感、５６℃１５分钟即可使其失去感染     

山东省Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离鉴定

为了研究鸭肝炎的发病原因,试验从山东省发病鸭场中分离到6株鸭肝炎病毒,并进行了鉴定.结果表明:分离病毒ELD50为1×10-4.12～1×10-5.25/0.2 mL.     

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

采自淄博市的桓台、高青、临淄疑似鸭病毒性肝炎且临床病理变化明显的病死雏鸭肝脏,经病毒分离、鸡胚接种、病毒纯化后,进行了鸡胚中和试验、氯仿敏感试验、分离毒株ELD50测定及动物回归试验。经测定3株病毒毒价分别为105.3、105.6、105.10.2 mL ELD50。3株分离病毒经动物回归试验,对1日龄雏鸭的致死率分别为75%、87.5%和75%,而且出现了雏鸭病毒性肝炎的典型症状,呈明显的角弓反张姿态,病死鸭剖检可见肝脏肿胀,质脆易碎,肝脏有深紫红色的出血点或出血斑。结果证实分离到的病毒为Ⅰ型鸭肝炎病毒。     

鸭病毒性脑炎（暂定）病原分离与鉴定的初步研究

从以腹泻和腿麻痹为主要症状的康贝尔鸭肝、脾中分离到1株病毒。该病毒能适应于鸡胚、鸭胚，胚接种后不死亡，但有出血点。小鸭人工感染病毒后出现与自然病例相似的症状，并能回收到病毒。电镜观察病毒主要呈球形，有囊膜，大小约为30nm；病毒有3种结构蛋白，VP1（17KD）、VP2（41KD）和VP3（50KD），其中VP3为主要结构蛋白，病毒核酸为单链RNA。     

一株Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

近期,江苏连云港地区某雏鸭群中发生以角弓反张和肝脏出血为特点的传染病,疑似鸭肝炎病毒感染。对送检的病料用无鸭肝炎病毒母源抗体的鸭胚进行病毒分离与鉴定及RT-PCR方法检测。结果显示,接种病料的鸭胚出现死亡,死亡鸭胚发育不良,水肿,全身出血;剖检见肝脏充血、出血。RT-PCR成功扩增出与预期大小相符的440bp的目的片段。对扩增出道基因片段进行测序及BLAST分析表明,扩增的部分3D基因与GenBank上已公布的Ⅰ型鸭肝炎病毒C80株的同源性达到98.2%,由此确定该鸭群感染了Ⅰ型鸭肝炎病毒。     

鸭新型疱疹病毒的致病性研究

本研究分别探讨了F株鸭新型疱疹病毒对番鸭，半番鸭，鹅和SPF鸡的致病性，经实验室人工感染试验表明该株病毒可导致雏番鸭，雏半番鸭发病，死亡，对雏番鸭相同的病变，自致死鸭脏器中重新分离到原攻击病毒；人工感染幸存鸭大多腹泻，生长发育明显受阻，体况消瘦，通过同居感染雏番鸭试验结果表明，该病毒不易经空气传播。对雏鹅，SPF雏鸡的人工感染试验结果可见。该病毒对雏鹅。SPF雏鸡均无致病性。     

犬疱疹病毒的分离鉴定

犬疱疹病毒引起１周龄以下仔犬严重和高死亡的疾病，用犬肾传代细胞ＭＤＣＫ，从濒死发病犬的肾脏器官分离获得一株疱疹病毒，经鉴定为犬疱疹病毒。培养液观察病毒大小为１４０ｎｍ有囊膜病毒，核酸型为ＤＮＡ，对乙醚敏感，对热抵抗力弱，５６℃经４分钟灭活，ｐＨ４．５时３０分钟失去感染力，用分离毒接种７日龄的幼犬引起典型的疱疹病毒感染症状，并从人工感染试验的幼犬回收到病毒。     

鸭2型疱疹病毒的分子生物学依据

鸭2型疱疹病毒，是一种可侵害番鸭、半番鸭等不同品种鸭的疱疹病毒科新成员，经生物学特性测定、血清学试验及致病性试验表明该病毒不同于鸭瘟病毒。采用SDS-PAGE分析表明该病毒的结构蛋白带有14条，主要结构蛋白带有7条，其分子量分别为310、163、95、79、69、39、15KD，不同于鸭瘟病毒。依据鸭瘟病毒UL6基因的序列，设计了一对引物，经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳表明只有鸭瘟病毒核酸提取物可扩增出大约420bp的DNA片段，而鸭2型疱疹病毒核酸提取物、鸡传染性喉气管炎病毒核酸提取物和正常细胞培养物均未扩增出目的基因片段，可见鸭2型疱疹病毒与鸭瘟病毒在DNA分子水平上也存在差异。本研究揭示了该病毒与鸭瘟病毒在结构蛋白和核酸水平上的差异，进一步表明该病毒不同于鸭瘟病毒，为该病毒的确切分类提供了分子生物学依据。     

肉鸭中黄病毒的分离与鉴定

为探索2011年年底在广东阳江地区某肉鸭场出现的病鸭和死鸭的发病原因,对其中2个发病鸭场的病死鸭进行了解剖,对病变组织的样品应用RT-PCR的方法进行了病原鉴定。经剖检,发现鸭心脏表面形成小结节,伴有少量心包积液;肝脏和胆囊肿大;脾脏有花斑;胰腺和直肠有出血点。利用病料研磨上清和病料接种后的鸡胚尿囊液进行RT-PCR检测,结果显示鸭黄病毒阳性。序列分析显示,该病毒的核苷酸序列与坦布苏病毒Fengxian株的相似性为99%。试验结果表明,该病毒为黄病毒,是引起此次鸭场发病的病原。     

驴源马疱疹病毒8型的分离鉴定与生物信息学分析

本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型（Equine herpesvirus type 8，EHV-8）毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织，经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况；对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨，经反复冻融后接种于兔肾细胞（RK-13）细胞中，盲传3代，待出现细胞病变（CPE）时收集细胞，并通过PCR、间接免疫荧光试验、透射电镜等技术对EHV-8进行鉴定。利用PCR扩增获得分离株的ORF70全基因组序列，并进行生物信息学分析。研究结果显示，经PCR鉴定获得EHV-8感染阳性的肺脏组织，病料接种易感细胞RK-13后出现典型CPE，分别收集前3代的细胞培养物，经PCR扩增，均获得与预期大小一致的ORF70基因片段，将分离获得的EHV-8毒株命名为SDLC66，序列上传GenBank，获得登录号：MW816102。经测序和序列比对发现，SDLC66毒株与AHV-3毒株（GenBank登录号：U24184.1）ORF70基因的相似性为99%，与国内的EHV-8 wh毒株（GenBank登录号：JQ343919.1）、国外EHV-8/IR/2015/40（GenBank登录号：MF431614.1）、EHV-8/IR/2003/19（GenBank登录号：MF431611.1）参考毒株的相似性最高，均为99.8%。经遗传进化树分析发现，SDLC66与EHV-8（EHV-8 wh、EHV-8/IR/2015/40和EHV-8/IR/2003/19株）在一个小分支上，亲缘关系最近；与EHV-1型参考毒株（Hong Kong/57/1984、United Kingdom/32/1982、Oxfordshire/206/2013株）序列来源于同一大分支，亲缘关系较近，与EHV-4毒株（91c1和TH20p株）亲缘关系较远。间接免疫荧光试验可见与病毒蛋白特异结合的红色荧光信号；透射电镜观察可见直径约110 nm的圆形病毒粒子，并且核衣壳外有一层亮晕，亮晕外有一层囊膜。说明本试验成功分离得到1株驴源EHV-8毒株，为进一步研究其致病性和致病机制奠定基础。     

猫疱疹病毒1型的分离鉴定及gD基因序列分析

为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴定所分离的病毒,并进行病毒体外生长动力学研究。结果显示,病料在FK-81细胞上接种后24 h^36 h呈现变圆、融合、局灶性堆积聚团和脱落等细胞病变;分离毒株可被FHV-1单克隆抗体特异性识别;电镜下可观察到病毒粒子呈圆形、有囊膜、直径约130 nm,具有疱疹病毒科的典型形态特征,将所分离到的5株FHV-1分别命名为2016TJ1株、2016TJ2株、2017LY1株、2017LY2株和2017LY3株;病毒一步生长曲线测定结果显示,接种后12 h^36 h病毒快速增殖,40 h^60 h病毒滴度达到高峰,72 h病毒滴度开始下降;5株FHV-1 gD基因序列之间的同源性为100%,核酸序列高度保守且与国内外流行株及疫苗株的同源性极高。研究结果为我国宠物猫群中FHV-1的病原分离、分子流行病学调查等研究积累了资料。     

新型鸭肝炎病毒的分离鉴定

为调查发病鸭场的病原,本试验从发病鸭场中分离到1株鸭肝炎病毒,Reed-Muench法测定该病毒对鸭胚ELD₅₀为10^-5.53/0.2 mL,动物回归试验显示攻毒雏鸭复制出原发病鸭场鸭的临床症状和病理变化,鸭病毒性肝炎病毒(DHV)Ⅰ型阳性血清对分离株病毒无中和作用,RT-PCR鉴定分离株病毒为新型鸭肝炎病毒。     

鸭源新城疫病毒的分离鉴定

从病死肉鸭肝脏中分离到2株病毒(ZH1、ZH2),均能够凝集鸡、肉鸭、绵羊、山羊、猪、人、兔、牛等的红细胞,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清所抑制.参照NDV毒力判定标准及其方法对分离毒株ZH1、ZH2进行了鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)、鸡胚半数感染量(EID50)以及1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定,结果ZH1、ZH2株的MDT为52 h和44 h,EID50为106.4/0.1mL和108.64/0.1mL,ICPI为1.93和1.975.表明这2株分离病毒均为NDV强毒株.     

一株鸭源副黏病毒的分离鉴定

2010年8月,湖北某种鸭场免疫过禽流感、产蛋下降综合征疫苗的产蛋鸭出现产蛋下降症状,1周内产蛋率锐减50%左右,发病率达30%,有轻微的呼吸道症状,腹泻,或产软壳蛋、畸形蛋、沙壳蛋等劣质蛋,成年鸭几乎无死亡,青年鸭死亡率10%.剖检病鸭发现肝脏有坏死,脾脏肿大,脑组织表面有点状出血,气管环出血,肺脏有出血性或纤维素性炎症,有典型的卵黄性腹膜炎症状.发病初期投喂各种抗生素疗效不明显,初步怀疑为副黏病毒感染.现将该病毒的分离鉴定情况报道如下:     

雏鸭病毒性肝炎的分离与初步鉴定

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,通过9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔接种,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓、胚爪发育畸形、肝脏变绿。分离病毒回2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100％发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒株对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型DHV标准血清所中和,证明分离的野毒株血清型为I型DHV,且毒力很强。