重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1型,Re-1株)抗体产生规律试验报告

通过红细胞凝集抑制试验（HI试验）,对蛋用雏鸡使用重组禽流感病毒灭活疫苗（H5N1型,Re-1株）和某种禽流感重组二联活疫苗的不同免疫程序的免疫效果进行监测,掌握禽流感HI抗体产生及消长规律,制定适合的种鸡和商品蛋鸡预防高致病性禽流感的免疫程序和免疫规范。     

重组禽流感病毒灭活疫苗(H5N1亚型,Re-1株)免疫鸡抗体消长规律及免疫程序的初步研究

研究新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对种鸡和肉鸡的免疫原性,并对雏鸡母源抗体和免疫后的抗体进行动态观察,根据试验结果推荐该疫苗对鸡的免疫程序。用HI方法检测种鸡、肉鸡的母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明种鸡的母源抗体约能维持10 d多;0.3 mL/羽首免后10 d HI抗体就可达到6.40 log2,3-5周达到高峰期,至免疫17周后(19周龄)HI抗体水平仍然维持在4.88 log2;19周龄时0.5 mL/羽进行二免,有效抗体能维持约20周;280日龄0.5 mL/羽三免后抗体水平均一,下降缓慢,至种鸡淘汰时(三免后29周)抗体水平仍能维持在5.32 log2。肉鸡母源抗体约能维持7d,10日龄时0.3 mL/羽免疫,有效抗体能维持到上市。新型重组H5N1亚型禽流感灭活疫苗对鸡的免疫原性确实。     

H5N1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好鸵鸟禽流感的防控工作,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗,不同剂量免疫鸵鸟,用HI方法检测母源抗体和免疫抗体,根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄.结果表明,雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周;8周龄时分组首免,C1组产生的免疫反应优于C2组,抗体峰值能达到7.50 log2,维持时间为9周左右;17周龄时C1组以3.0 mL/羽进行二免,2周后抗体达到7.40log2,3周～7周抗体维持在高峰值,最高达8.80log2,以后逐渐下降,有效抗体水平能维持至接种后25周左右.二免后25周进行三免,以5 mL/羽三免后2周抗体可达到9.80log2,2周～4周抗体维持在最高峰,以后缓慢下降,期间抗体时有起伏,但有效抗体水平约可维持1年时间.三免后45周内抗体水平合格率均在70%以上.根据抗体消长规律,初步推荐了鸵鸟的免疫程序.     

HSN1亚型禽流感灭活疫苗免疫鸵鸟后抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨鸵鸟对H5亚型禽流感灭活疫苗的免疫原性，做好鸵鸟禽流感的防控工作，采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型禽流感疫苗，不同剂量免疫鸵鸟，用HI方法检测母源抗体和免疫抗体，根据母源抗体的衰减和免疫抗体的消长规律确定首免和再免日龄。结果表明，雏鸵鸟母源抗体能维持约3周～8周；8周龄时分组首免，Cl组产生的免疫反应优于C2组，抗体峰值能达到7．50Iog2，维持时间为9周左右；17周龄时C1组以3．0mL／羽进行二免，2周后抗体达到7．4010g2，3周～7周抗体维持在高峰值，最高达8．8010g2，以后逐渐下降，有效抗体水平能维持至接种后25周左右。二免后25周进行三免，以5mL／羽三免后2周抗体可达到9．8010g2，2周～4周抗体维持在最高峰，以后缓慢下降，期间抗体时有起伏，但有效抗体水平约可维持1年时间。三免后45周内抗体水平合格率均在70％以上。根据抗体消长规律，初步推荐了鸵鸟的免疫程序。     

禽流感疫苗(H5N1亚型,Re-5株)免疫后抗体水平调查

为了掌握我市禽流感免疫情况和发病情况,本文通过在我市选择4家规模化蛋鸡养殖场和5户小型农户养殖场,采集345份蛋鸡血清,用血凝抑制试验测定其禽流感H5N1亚型的抗体水平.结果是8个鸡场的抗体合格率高于70％,免疫效果较好,近期内对禽流感有一定的抵抗力;有1户农户养殖场抗体合格率只有46.7％,抗体效价较低,对禽流感抵抗力较弱,一旦遇到禽流感毒株流行,鸡群可能存在潜在感染和发生禽流感危险.从结果可以看出,免疫注射2次以上效果较好,保护率较高,可以预防禽流感毒株的感染.     

重组H5N1亚型禽流感疫苗免疫孔雀后的抗体消长规律及免疫程序的研究

为了探讨孔雀对H5高致病性禽流感灭活疫苗的免疫原性,做好孔雀禽流感的防控,采用哈尔滨兽医研究所研制的重组H5N1亚型高致病性禽流感疫苗,不同剂量免疫孔雀后,跟踪其抗体消长规律。检测结果显示:小孔雀母源抗体能维持约6周;首免0.5 mL/羽颈部皮下注射,有效抗体能维持18周以上;1.0,1.5,2.0 mL/羽3个剂量组肌肉注射进行二免,以1.5 mL/羽组效果最好,有效抗体能维持10个月左右;成年孔雀1.5 mL/羽进行三免,有效抗体能维持1年以上。而且孔雀产生的抗体均一性良好,抗体阳性率均在75%以上。根据抗体消长规律,推荐了孔雀的免疫程序。     

高致病性禽流感（H5N1亚型）灭活疫苗免疫鸡后其抗体消长规律试验

高致病性禽流感（H5亚型为主）是一种传播快、危害大的一类动物疫病。高致病性禽流感不仅使禽类发生大批死亡,而且在世界范围内感染致死人的事件也时有发生,给养禽业和人民身体健康带来了严重威胁,     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2亚型毒株接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活后与优质矿物油佐荆混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批，接种28日龄非免疫鸡100羽，4天后检测抗体，以后每隔1周或2周采血检测H5亚型HI抗体，并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明，免疫后4天即能检测出抗体，之后逐渐上升，至第5周抗体水平达到高峰且较稳定，然后缓慢下降，110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明，能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉免疫效果的研究

为评估重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株和H7N9 H7-Re1株)对雉的免疫保护效果,选取30日龄的雉,按照免疫程序首免后21 d,加强免疫1次,分别于接种前和接种后定期采血,分离血清,检测H5、H7亚型HI抗体滴度。结果显示,免疫前,雉血清中H5、H7亚型HI抗体滴度均为0;免疫后14 d,H5和H7亚型抗体平均滴度分别达到7.0log2和7.07log2,49 d后平均滴度达到峰值,分别为8.04log2和9.20log2;H5亚型免疫有效期可达105 d以上,H7亚型可达189 d以上。结果表明,重组禽流感病毒二价灭活疫苗(H5N1 Re-8株+H7N9 H7-Re1株)对雉具有良好的免疫保护效果且安全性良好,但疫苗免疫49 d后,H5、H7抗体效价逐渐下降,133 d后明显下降,群体免疫合格率低于70%,因此生产中推荐,30日龄首免后,51日龄和5月龄各加强免疫1次。本研究为珍稀禽的禽流感免疫疫苗选择和程序制定提供了参考。     

重组禽流感H5N1灭活疫苗对肉鹅的免疫效果观察

用重组禽流感灭活疫苗(H5N1亚型,Re1株)以0.5mL和1mL两种剂量接种母源抗体低于4Log2的肉鹅,并于首免后的第9、17、27、37、49、58d采血,测定其抗体水平,观察该疫苗对肉鹅的免疫效果及其抗体变化规律。试验结果表明:肉鹅用不同剂量的禽流感灭活疫苗免疫后,均能产生一定水平的抗体,且注射1mL的A组比注射0.5mL的B组抗体水平高。     

重组禽流感灭活苗和禽流感灭活苗对鸡免疫效果的观察

用重组禽流感灭活苗接种10日龄、14日龄和21日龄的SPF鸡,接种后HI抗体效价无显著差异。将H5N1和H5N2疫苗分别接种21日龄SPF鸡,结果表明,H5N1和H5N2均能刺激SPF鸡产生较高的HI抗体;分别接种三黄鸡,接种后21 d,H5N1能刺激三黄鸡产生较高的HI抗体;而H5N2不能刺激三黄鸡产生合格的HI抗体,与SPF鸡免疫组相比差异显著。经过二次接种,HI抗体平均为8.9 log2,与SPF鸡组接种后42 d的各组相比差异不显著,而与一免后21 d的各组HI抗体效价相比差异显著。表明应用禽流感灭活苗对三黄鸡免疫接种,必须进行二免方可达到理想免疫效果,而应用重组禽流感灭活苗对三黄鸡进行免疫接种,一次免疫即可获得较高的HI抗体效价。     

不同NA亚型H5禽流感疫苗在鸭群的免疫效力及母源抗体对免疫效力的影响

研究以H5N2和H5N1两种油乳灭活疫苗免疫鸭群对高致病性禽流感H5N1 AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明，在同等免疫剂量下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律三项指标综合评价来看，H5N1疫苗免疫组对高致病性禽流感H5N1流行株攻毒的保护效率较H5N2免疫组理想，故针对高致病性禽流感H5N1流行的情况，宜采用H5N1禽流感疫苗。水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

禽流感-新城疫重组二联活疫苗与重组禽流感灭活疫苗组合免疫效果观察

为进一步了解、掌握禽流感-新城疫重组二联活疫苗及与重组禽流感灭活疫苗组合使用的免疫效果,本研究以麻花鸡作为试验对象,制定了4种不同的免疫程序,分别对4组试验鸡群进行免疫,通过测定各组鸡只产生的免疫抗体效价和免疫抗体合格率,以评价二联活疫苗及与禽流感灭活疫苗的免疫效果。试验结果表明:禽流感-新城疫重组二联活疫苗单独用于肉鸡禽流感H5免疫预防抗体效价低于4 log2;建议禽流感-新城疫重组二联活疫苗可以与重组禽流感病毒灭活疫苗组合使用,两种疫苗免疫时间间隔2周左右,以免抑制机体产生对新城疫的免疫应答。     

蛋鸡免疫重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗抗体消长规律的研究

为了在临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序,用重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)分别在14日龄、49日龄、105日龄免疫蛋鸡,免疫剂量分别为0.3ml/只、0.5ml/只、0.5ml/只。分别在第1、6、10、14、20、28、35、42、49、56、63、70、77、86、94、105、120、150、180日龄采血测定HI抗体效价。结果表明首免后HI抗体上升较慢较低,只有第二次免疫后,抗体才迅速升高。在70日龄(二免后3周)H5N1,Re-4HI抗体达到9.60log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到7.86log2。在120日龄(三免后2周)H_5N_1,Re-4HI抗体达到9.30log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到9.25log2。     

H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1，Re-4 Re-5）免疫肉鸽效果试验

随机选择1月龄以上肉鸽640只,进行分组隔离试验,分别注射0．2、0．3、0．4、0．5、1．0、1．5、2．0mL重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（H5N1,Re-4＋Re-5）,免疫后第3周,0．2、0．3、0．4、0．5mL疫苗试验组肉鸽半数再进行同剂量第二次免疫。定期采集血样,应用血凝抑制试验方法检测禽流感抗体。结果表明：初次免疫,Re-4比Re-5抗体形成效果好,相对高出1个抗体滴度;第二次免疫,二者效果相近,都比初次免疫整体效果好。免疫1次,至少接种0．4mL;免疫2次,至少接种0．3mL,才能形成较好免疫效果。     

HSN2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用HSN2和HSN12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群，观察比较了二者对HSN1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明，在同等剂量免疫条件下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看，HSN1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感HSN1流行株攻毒的保护妓率较HSN2灭活苗理想，且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验

使用重组鸡白介素-2作为免疫佐剂,检测chIL-2对禽流感病毒H9亚型灭活疫苗的免疫增强作用。将1日龄的AA肉雏鸡,随机分为7组,每组10只,采用胸部肌肉注射方式进行免疫,对照组仅接种H9亚型禽流感灭活疫苗,试验组分别同时接种H9亚型禽流感灭活疫苗O．5mL和不同剂量（0．01mg-1mg）的鸡IL-2。每7d静脉采血,采用血凝和血凝抑制方法检测机体中抗体水平变化情况。结果表明,接种重组鸡IL-2的试验组动物能在2月内保持高抗体水平,且在免疫后第10周,其平均抗体水平仍高于疫苗对照组3．6个～4．5个滴度,表明了重组鸡IL-2蛋白对H9亚型禽流感灭活疫苗具有免疫增强作用。     

H5N2与H5N1禽流感油乳灭活疫苗免疫鹅群对H5N1流行株攻毒的保护效力及母源抗体对免疫效力的干扰

应用H5N2和H5N12种类型禽流感油乳灭活疫苗分别免疫鹅群,观察比较了二者对H5N1型高致病性禽流感病毒的攻毒保护效力。结果表明,在同等剂量免疫条件下,从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律3项指标综合评价来看,H5N1灭活苗水禽免疫组对高致病性禽流感H5N1流行株攻毒的保护效率较H5N2灭活苗理想,且水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。