绵羊细粒棘球蚴全血金标渗滤检测方法的建立

为建立一种快速、高效的诊断家畜细粒棘球蚴病方法,提取绵羊细粒棘球蚴包囊新鲜囊液,盐析囊液抗原,点样于硝酸纤维膜,以胶体金-驴抗羊IgG和胶体金-兔抗鼠IgG为检测标记物,采用垂直流渗滤装置检测绵羊与人工感染细粒棘球蚴小鼠血清和全血特异性抗体。患病绵羊阳性血清及全血检出率在90.91%~94.4%,细粒棘球蚴感染小鼠血清及全血检出率均为100%;细粒棘球蚴阴性羊血清和全血假阳性率为4.00%~4.59%;与脑多头蚴病血清交叉反应率为28.57%(2/7)。研究结果表明细粒棘球蚴全血金标渗滤法(DIGFA)可应用于绵羊棘球蚴病的诊断与检疫。     

I—ELISA特异诊断棘球蚴（包虫）病的研究

采用亲和层析技术纯化的兔抗棘球蚴抗体，建立了酶联免疫吸附抑制试验（Ｉ—ＥＬＩＳＡ）。取代反应和阻断反应均无非特异反应；检测健康对照血清１２６份（人３６，猪９０），均为阴性；与猪囊尾蚴病血清１３６份（人４６，猪９０）、细颈囊尾蚴病血清３８份（羊２２、猪１６）无交叉反应；对棘球蚴病血清１８３份（人６１、羊７１、猪５１）进行检测，其阳性符合率分别为８８．５％（５４／６１）、９８．６％（７０／７１）、９６．１％（４９／５１）。     

斑点免疫吸附试验诊断羊脑多头蚴病的研究

以原头节可溶性粗抗原经Sephadex G-200层析纯化抗原为包被抗原，兔抗羊IgG-HRP结合物为显色剂，建立检测羊脑多头蚴病血清抗体的Dot-ELISA，并以ELISA作平行对照。结果，粗抗原和层析纯化抗原检测86头份羊脑多头蚴病阳性血清，其敏感性分别为94．18％和93．02％，两种抗原的敏感性无显著差异；检测122头份绦虫蚴病阴性血清，18头份棘球蚴病阳性血清，35头份细颈囊尾蚴病阳性血清，其特异性分别为90．29％和95．43％。两种抗原的特异性差异显著。Dot-ELISA和ELISA两种方法的符合率为100％。层析纯化抗原比粗抗原的特异性有了明显提高，而敏感性没有降低。层析纯化抗原和操作术式都具有良好的重复性，Dot-ELISA和ELISA对比试验结果相近，且具简便、快速及不需要复杂设备等优点，是一种检测羊脑多头蚴病血清抗体的理想方法。     

门源县牛羊棘球蚴病感染情况调查与分析

为了进一步了解门源县牛羊棘球蚴病的感染情况和分布特点,为该病的防控提供依据,于2019年对门源县5个乡镇的屠宰牛羊肝脏和肺脏进行棘球蚴检查.结果表明,调查的150只羊中有5只羊棘球蚴检测为阳性,整体感染率为3.33％,100头牛中有3头牛棘球蚴检测为阳性,整体感染率为3.00％.从总体的感染情况来看,门源县牛羊棘球蚴病...     

羔羊棘球蚴病免疫抗体检测与分析

为了解羔羊棘球蚴病免疫抗体水平,能否有效防止棘球蚴的感染力度,就共和县环湖地区2次免疫后的羔羊用羊棘球蚴ELISA抗体检测方法进行了血清学抽样检测。结果显示,初免后的平均抗体阳性率为48.89%,强化免疫后的平均抗体阳性率为82.22%,表明强化免疫是提升羔羊群体抗体水平、增强对棘球蚴感染的保护力的必要措施。     

应用间接血凝(IHA)检测绵羊棘球蚴病的感染率

采用新鲜的绵羊棘球蚴囊液,经过处理,用最适浓度(380μg/ml)致敏绵羊红细胞,制成IHA诊断液,用IHA法对321只(份)成幼年改良羊、藏羊进行棘球蚴病感染率的检测,结果表明:成年改良羊棘球蚴感染率为86.05％,幼年改良羊感染率为85％,血清滴度达1:64—1:4096;成年藏羊感染率为74％,幼年藏羊感染率为51.06％,血清滴度1:64—1:256。15只(份)标准阴性羊血清全部为阴性,血清滴度0—1:4。30只(份)标准阳性羊血清,28只(份)为阳性,血清滴度为1:64—1:4096,阳性符合率达93.33％。此方法敏感性高,可用于棘球蚴病的流行病学调查及防治效果考核。     

玉树县牧区中老年人群棘球蚴病流行调查及社会因素分析

为了解青海省玉树县牧区中老年人群棘球蚴病流行现状,采用棘球蚴病体外快速诊断试剂盒检测、影像学检查和了解发病史的综合诊断方法,对玉树县牧区40岁以上中老年藏族人群共169位牧民进行棘球蚴病检查和流行病学社会因素调查。结果表明,阳性15人,阳性率8．9％;既往病史和本次确诊共有14人感染棘球蚴病,感染率8．3％。流行病学社会因素调查显示,82．3％的牧民知道或听说过人棘球蚴病,也见过牛羊棘球蚴,但缺乏流行病学规律的知识,预防意识淡薄。建议采取以驱除狗棘球绦虫为主的综合防治措施,减轻人、畜棘球蚴病的感染和危害。     

棘球蚴病免疫诊断的新进展

一、囊状棘球蚴病(CHD,细粒棘球绦虫) 20年前,当Capron及其同事(1967)用免疫电泳从免疫了细粒棘球蚴囊液的动物血清及感染棘球蚴的病人血清中描述了一条主要沟沉淀带时,他们为囊状棘球蚴病血清学诊断的特异性的“金标准”(Gold Standard)奠定了基础。这条沉淀带,作者们把它称为“弧5”,是生发层及原头节所分泌的一种热稳定脂蛋白抗原抗体应答的结果。这一抗原是迄今为止已鉴定的细粒棘球绦虫中绦期物质中最具免疫原性、最特异的组分(Schantz等,1986;Richard等,1986)。在许多不同地区对数千病例的检测表明,在滴人血清中证实“弧5”是感染细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫或伏氏棘球绦虫任一种的直接阳性证据。在Varela—Diaz等(1978)报道感染猪囊尾蚴的病人血清中亦发生“弧5”反应之前,还没有在未     

甘德县畜间棘球蚴（包虫）病感染情况调查

2000年5月－12月在果洛甘德县进行了家畜棘球蚴病感染情况调查。共检查羊1700只，阳性818只，感染率为48．12％；牛96头，阳性54头，感染率56．25％；犬细粒棘球绦虫感染调查犬63只，阳性22只，感染率34．92％；对人包虫的感染情况进行了回顾性调查表明，甘德地区属棘球蚴病高发流行区。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗(EG95)在甘肃地区的免疫试验

甘肃省是全国包虫病疫区省份之一,多年来人间、畜间包虫病流行严重。为了验证羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗在甘肃地区使用的安全性和免疫效果,2015年用羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗,在甘肃省甘南州的玛曲县、碌曲县和庆阳市的环县3个点进行了免疫试验,同时采取首免前、二免前及免后90 d的羊血分离血清,采用羊棘球蚴Eg95包被的ELISA抗体检测试剂盒进行检测。结果表明:试验组首免前羊棘球蚴抗体阳性率0.99%~11.63%;二免前阳性率73.13%~85.57%;首免后90 d阳性率81.54%~98.44%。对照组首免前羊棘球蚴抗体阳性率为0;二免前阳性率0~5.71%;首免后90 d阳性率11.11%~20.00%。羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗反应在羊只品种上有差异:山羊上有反应,而藏绵羊上无反应。     

应用硝酸纤维薄膜RIA对棘球蚴病、弓形虫病、丝虫病检测的研究

硝酸纤维薄膜作为RIA的一种新型固相载体，具有简易、快速、经济、易于漂洗、敏感性、特异性、重现性好等优点，且适用于大批量样品在短期内同时检测。可作为寄生虫病早期诊断可靠的新手段。该法已成功地应用于日本血吸虫病人、病牛及现扬疫区耕牛的检测试验。本实验进一步对棘球蚴病人和病羊的血清；弓形虫病猪血清和丝虫病人血清等3种人畜共患寄生虫病进行检测研究，结果除对羊棘球蚴病检测效果不够理想，阳性检出率仅50％(10／20)，其它几种疾病的检出率均在不同程度上高于EIASA和IHA法。对人棘球蚴病检测的阳性率，膜片法为100％(82/82)，ELLSA为91．5％(75／82)，IHA为89．6％(71／82)。对猪弓形虫病的检测阳性率，膜片法为100％(120／120)，ELISA为93．3％(112／120)，IHA为90．0％(108／120)。时人丝虫病的阳性检出率膜片法为100％(80／80)，ELISA为96．3％(77／80)，IHA为88．9％(71／80)。各组假阳性率的降低更加明显。作者认为，该法可提供作为兽医寄生虫病早期大规模检测的一种有效方法。     

甘南州玛曲县棘珠蚴病流行病学调查

通过对玛曲县欧拉、尼玛等乡牧场棘球蚴病高发区牛15头、羊100只、犬15条剖检和分析发现，棘球蚴感染率牦牛为66．67％、羊为50％、母羊为75％，母犬细粒棘球绦虫的感染率为27％、人的棘球蚴感染率为0．3％。对1～5岁绵羊各50只，进行的间接血凝感染抗体检测表明：1岁羊血清滴度较低，2岁和4岁羊的滴度较高，而3岁和5岁羊的滴度略低于前一年龄组。酶联免疫吸附试验结果：1岁羊血清平均值最低，2岁最高，以后各年龄组略微降低，并大致保持平稳状态。     

西藏羊免疫羊棘球蚴(包虫)病基因工程疫苗(Eg95)的效果研究

为了评价羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗对川西北高原牧区西藏羊的免疫效果,本试验将西藏羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组羊按免疫剂量接种包虫病疫苗,28 d后加强免疫,对照组羊不接种。在加强免疫30 d后采集血液制备血清,用间接ELISA法检测血清中的特异性抗体,同时剖解部分试验羊,检查肺脏和肝脏中的包囊数量,统计保护率。结果显示:免疫组羊首免28 d后抗体阳性率为77.9%,加强免疫30 d后抗体阳性率为95.4%,与免疫前和对照组比较差异显著(P0.05);剖检部分试验羊统计包囊数量,得出保护率达到了75.0%。本试验表明,羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗对阿坝地区西藏羊的棘球蚴病具有预防控制作用。     

棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体的检测

2000年5－12月用ELISA法对青海省贵南县的棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体进行了检测。结果：免疫前抗体阳性率为30．3％，保护率为3．03；一免后阳性率为40．40％，保护率为2．02％；二免后阳性率为89％，保护率为72％。说明对羔羊加强免疫后可获得痕好的群体保护力。     

弓形虫抗体免疫胶体金快速检测试纸条的研制

将样品垫（加样区）、包被了弓形虫排泄分泌抗原和胶体金结合物的结合垫、包被了弓形虫排泄分泌抗原和抗弓形虫抗体的硝酸纤维素膜、吸水垫依次首尾互相衔接粘贴在白色塑料板上，组装成检测弓形虫抗体的免疫胶体金快速试纸条。然后用其进行动物弓形虫病血清抗体检测，并用弓形虫IHA诊断试剂进行对照试验。经对已知弓形虫阴、阳性血清检测，与弓形虫IHA检测结果的符合率为82．5％，金标试纸条较弓形虫IHA诊断试剂能提前2d检测到抗体。结果表明，检测弓形虫抗体免疫胶体金试剂（金标试纸条）的敏感度高于IHA。     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色，阳性者出现红色斑点，整个试验过程仅需5min即可判断结果；与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应；纯化PRRSV抗原的最低检测量为0．0553mg／mL，即55．3ng／点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测，两种方法的符合率达98％。     

新疆塔城地区羊棘球蚴病个体流行率测量

目的:为了了解新疆塔城地区羊棘球蚴病真实流行率.方法:采用横断面研究,采样分为两阶段抽样策略,第一阶段为县(市)抽样采用随机抽样策略,预定流行率=85％、CI=90％、可接受误差=15％;第二阶段为个体抽样采用按养殖大小成比例抽样(PPS)策略,预期流行率=30％,CI=90％,可接受误差=5％,采集血清1839份,血清样品进行ELISA抗体检测,根据检测结果、敏感性和特异性计算真实流行率.结果:塔城地区羊棘球蚴病个体表观流行率(AP)为52.7％,统计分析得出个体真实流行率(TP)为55.2％,95％置信区间为52.9～57.4％.结论:1.本次研究首次通过两阶段抽样策略对羊棘球蚴病在个体流行率进行了测量,从方法上相对以往的监测方法更加科学,包括不同年龄、性别的羊只,更接近研究时段内该地区的真实情况.2.相比之下,血清学检测简便、快速、检测通量大,我地区可在今后的羊棘球蚴病流行病学调查、监测和检测工作逐步推广ELISA诊断方法,进而更客观、更准确地掌握棘球蚴病流行情况,做好防控工作.     

免疫胶体金快速诊断技术在兽医诊断中的应用

免疫胶体金快速诊断技术源于对血清与尿液的绒毛膜促性腺激素的免疫渗滤试验检测,之后有学者提出采用胶体金作为标记物替代酶应用于渗滤试验,并制备完成广泛应用的对抗人类免疫缺陷病毒抗体检测的试剂盒.由于免疫胶体金快速诊断技术方便快捷,已在妊娠试验、检测传染病病原抗体等方面进行应用,而应用于兽医诊断的研究刚刚起步.     

羊棘球蚴(包虫)病实用防治技术

羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗可激发羊体产生针对细粒棘球蚴的特异性抗体,达到避免感染的目的。临床试验表明,新疆、内蒙、西藏、青海等地的羊群在进行棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗免疫注射后,其免疫保护期可维持一年之久。在免疫区给犬投喂吡喹酮,经羊棘球蚴(包虫)病间接ELISA检测试剂盒的监测,当地羊群包虫病患病率得到显著的降低,且膘情普遍变得良好。由此证明,给羊群免疫接种羊棘球蚴疫苗结合给犬投喂吡喹酮可有效控制包虫病的传播,为保障人畜健康、增加养殖收入奠定良好的基础。