干旱胁迫下红麻叶片的差异蛋白表达分析

【目的】研究耐旱性高的红麻品种在干旱胁迫条件下的蛋白质表达,揭示红麻耐旱性的生理机制。【方法】以鉴定出的耐旱性红麻品种GA42为材料,在苗期（五叶期）设置正常供水与控水比较试验,运用双向电泳分析红麻在干旱胁迫和正常供水条件下叶片蛋白质组的动态变化。【结果】对2-DE图谱分析后发现,在干旱胁迫下出现65个差异表达蛋白质点,选用表达量明显上调的9个蛋白质点,通过MALDI-TOF-TOF MS分析和数据库检索,鉴定出6个差异表达蛋白的功能,分别是2个核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶（Rubisco）或其大亚基（所有植物进行光合碳同化的关键酶）、1个Rubisco活化酶（广泛存在于植物中调节Rubisco活性的酶）、1个二甲基萘醌甲基转移酶（一种参与甲基转移反应的辅酶）、1个推定的胞质型谷氨酰胺合成酶（参与高等植物氨同化过程的关键酶）、1个ATP合酶β亚基（在活性细胞中起着将其它能量合成为生物能量通货-ATP的能量转换作用）。【结论】揭示了红麻GA42表现出较强的耐旱性与上述6个差异表达蛋白质点明显上调有关。     

双向电泳技术分析白刺盐胁迫蛋白的表达

为从蛋白质分子水平上阐述白刺耐盐碱胁迫的机理,通过SDS-PAGE凝胶电泳技术和双向电泳技术分析了白刺在盐碱胁迫时特异性蛋白质的表达。结果显示：与对照相比较,白刺在盐碱胁迫时,蛋白总量没有明显改变,但是特异蛋白表达有明显的变化。其中66,60,42,33,28,23,20kD蛋白表达明显增加,而22,16kD蛋白表达明显降低。该研究为进一步从分子水平研究白刺在盐碱胁迫时蛋白与基因表达的变化奠定了基础。     

龙眼体细胞胚胎发生过程中特异表达蛋白的双向电泳分析

以龙眼品种红核子LC2胚性细胞系为材料,进行体细胞胚胎(简称体胚)发生及其同步化调控,获取体胚发生过程中各个主要发育阶段的培养物(胚性愈伤组织、球形胚、子叶形胚、早期成熟胚、中期成熟胚、晚期成熟胚),采用双向电泳对体胚发生过程中特异表达蛋白进行分析.结果表明:(1)龙眼胚性愈伤组织中,pI为4-5的酸性蛋白表达种类最多,在体胚发育的过程中逐渐消失,相反,pI为5-6的微酸性蛋白的表达逐渐增多;(2)体胚发育后期,尤其是成熟胚晚期,分子质量大的蛋白大量减少,分子质量较小的蛋白增多并逐渐积累;(3)虽然在各个发育阶段都会出现一些新的特异蛋白,但是没有改变蛋白质种类逐渐减少的趋势;(4)发现了一些有差异的特异蛋白点,尤其是成熟胚后期,有一系列大分子质量的蛋白消失,新出现了一部分分子质量较小的蛋白,其中几种表达量很大,可能与体胚发育有密切关系.     

磷胁迫下油菜幼苗叶片差异蛋白表达的初步分析

以油菜品种中油821为材料,利用双向电泳技术研究足磷和缺磷条件下油菜幼苗叶片差异表达的蛋白质,进而为揭示油菜耐低磷胁迫的分子机制奠定基础.结果表明:经电泳、PDQuest分析后,缺磷处理下差异显著的蛋白质点有38个,19个表达量显著上调,19个显著下调.磷胁迫下蛋白表达量的差异说明逆境下植物体可通过多种蛋白的协调作用来...     

微囊藻受短时超声波胁迫蛋白表达差异研究

为探索微囊藻抵抗短时超声波表达调控相关蛋白质,应用双向电泳技术对微囊藻短时超声波处理蛋白质表达进行分析,结果表明,71个蛋白质点上调,56个蛋白质点下调,54个新增蛋白质点,21个消失蛋白质点。对其中8个差异大的蛋白质点采用MALDA-TOF-MS进行质谱分析,并经数据库搜索匹配,鉴定出2个未知蛋白、6个功能蛋白。这些功能蛋白参与抗氧化和抗炎症、磷酸盐合成、电子传递等生理过程,实现微囊藻在短时超声波胁迫下的代谢平衡和自我保护。     

蜂蜜蛋白提取以及双向电泳技术分析蜂蜜蛋白条件优化

[目的]研究蜂蜜中蛋白质提取的有效方法,优化蜂蜜蛋白电泳条件。[方法]该试验使用丙酮、钨酸钠、硫酸铵、尿素-硫脲4种方法提取蜂蜜中的蛋白并进行比较,然后进行双向电泳分析,对影响双向蛋白电泳的IPG胶条的选择、蛋白质上样量、等电聚焦时间等主要因素进行优化。[结果]试验表明,采用硫脲法提取蜂蜜蛋白获得的蛋白含量最高,硫脲法和丙酮沉淀法获得的蛋白纯度最好,而硫脲法因干扰物质较少、易于裂解适于双向电泳技术,采用硫脲法提取的蜂蜜蛋白选择IPG胶条p H 5~8,蛋白上样量为150μg,等电聚焦时间达到32 000 V·h的情况下能充分地聚焦,获得的双向电泳图谱最佳,优化后的洋槐蜜双向电泳图谱上可检测到326个蛋白点,重复性和分辨率均较好。[结论]蜂蜜类含糖样品中使用硫脲法提取蛋白能减少糖类物质干扰。     

微囊藻受短时超声波胁迫蛋白表达差异研究(英文)

为探索微囊藻抵抗短时超声波表达调控相关蛋白质,应用双向电泳技术对微囊藻短时超声波处理蛋白质表达进行分析,结果表明,71个蛋白质点上调,56个蛋白质点下调,54个新增蛋白质点,21个消失蛋白质点。对其中8个差异大的蛋白质点采用MALDA-TOFMS进行质谱分析,并经数据库搜索匹配,鉴定出2个未知蛋白、6个功能蛋白。这些功能蛋白参与抗氧化和抗炎症、磷酸盐合成、电子传递等生理过程,实现微囊藻在短时超声波胁迫下的代谢平衡和自我保护。     

低磷胁迫下甘蓝型油菜幼苗根系差异蛋白双向电泳图谱分析

利用优化的水培体系对油菜品种中油杂9号进行缺磷和足磷幼苗根系差异蛋白表达研究,采用自制管状胶双向电泳体系技术分析幼苗根系差异蛋白,揭示油菜耐低磷胁迫的分子机制。双向电泳获得的图谱经PDQuest8.0.1软件分析表明,未处理和缺磷处理12 d的油菜根蛋白表达图谱之间的相关系数为0.720 22;根系中差异显著的蛋白质点有 62 个,稳定上调表达的蛋白点为25个,下调表达的为37个。缺磷条件下,油菜根系蛋白表达量的差异表明,在逆境中油菜可以通过调节多种蛋白的表达来适应外界环境中磷水平的变化。     

分析干旱胁迫对小麦根部蛋白组分的影响

为了研究小麦对干旱胁迫的应答反应机制,本实验以晋麦47号为研究对象,用40%的PEG-6000对小麦三叶期幼苗进行处理模拟干旱胁迫,设置对照,采用尿素/硫脲法提取小麦根部蛋白质,并用考马斯亮蓝法测定根部蛋白样品浓度,之后采用SDSPAGE技术检测干旱胁迫前后小麦根蛋白含量的变化。使用软件分析后,结果表明,使用干旱胁迫后,小麦根部总蛋白含量和种类都有所变化。B组根部蛋白电泳结果中蛋白条带比CK组少,且实验组的蛋白浓度明显比对照组的小。     

适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法最佳条件的研究

为建立适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法,对黄瓜叶片蛋白提取方法、裂解缓冲液、等电聚焦(IEF)参数进行研究.结果表明:丙酮法或三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜蛋白质较好,2-DE图谱中蛋白点较多;裂解缓冲液为9.5mol·L-1尿素,2mol·L-1硫脲,1%二硫苏糖醇(DTT)2mmol·L-1三丁摹磷(TBP),4% 3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐(CHAPS),0.2%两性电解质,0.002%溴酚蓝,0.25%吐温20,10%异丙醇,5%甘油,10mmo·L-1苯甲基磺酰氟(PMSF)时,电泳网谱效果最好;IEF等电聚焦条件为25000Vh时.2-DE图谱蛋白点多且清晰.     

Proteomic Analysis of Wheat Seed in Response to Drought Stress

Drought stress is one of the major factors affecting in wheat yield and grain quality. In order to investigate how drought stress might influence wheat quality during grain filling, three wheat cultivars Gaocheng 8901, Jagger and Nongda 3406 were subjected to drought stress during the grain filling stage. Neither globulin and glutenin, nor the relative percentage ofamylose significantly changed following drought treatments, whereas albumin and gliadin concentrations did. The SDS-sedimentation, which has a strong linear correlation with wheat baking quality was markedly decreased following drought stress. These results indicated that drought had an adverse effect on wheat qualit3,. In order to investigate the protein complexes in the wheat flour, the data from native PAGE and SDS-PAGE were combined and a total of 14 spots were successfully identified, and of these eight protein types were determined to be potential complex forming proteins.     

小麦(Triticum aestivum)根系在不同钾营养水平条件下的蛋白质组差异表达分析

[目的]了解不同小麦根际钾元素水平对其根系基因表达的调控。[方法]采用小麦(北农9549)为试验材料,在缺钾胁迫和胁迫后恢复钾供应等不同条件下,用双向电泳的方法检测不同钾营养水平条件对根系蛋白质表达的调控。[结果]与正常供钾的植株相比,缺钾条件下生长的小麦根系有152个蛋白点的表达水平变化具有显著差异(p0.05),其中76个蛋白点发生大于2倍的显著上调表达,另有76个蛋白点发生大于2倍的显著下调表达;经过钾饥饿处理的小麦根系恢复正常钾供应2周后,与一直正常供钾的根系相比,有73个蛋白点的表达水平变化具有显著差异(p0.05),其中36个蛋白点发生大于2倍的显著上调表达,另有37个蛋白点发生大于2倍的显著下调表达。[结论]该试验结果表明缺钾胁迫可以引起小麦根系表达大量特异性蛋白质。     

玉米幼苗根、茎、叶总蛋白质双向电泳方法的优化

利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。     

铝胁迫诱导柱花草根系分泌柠檬酸

【目的】为揭示柱花草的耐铝机制,对铝诱导根系分泌柠檬酸进行了研究。【方法】采用水培方法,研究柱花草的耐铝性及铝对柱花草分泌柠檬酸的影响,并与紫花苜蓿进行对比。【结果】10μmol·L-1AlCl3对柱花草幼根生长的抑制不显著,而3和5μmol·L-1AlCl3处理24h后,紫花苜蓿幼根伸长明显受阻、根尖的铬天青着色明显。铝胁迫下柱花草根系分泌柠檬酸,且与铝浓度(10、20、30μmol·L-1AlCl3)和处理时间(6、12、18、24h)呈正相关,而紫花苜蓿根系无明显分泌。10μmol·L-1阴离子通道抑制剂(苯甲酰甲醛、尼氟灭酸、4,4-二异硫氰2,2-二磺酸、蒽9羧酸)显著抑制铝诱导的柱花草根系分泌柠檬酸。然而,铝处理对柱花草根尖柠檬酸合酶活性的影响不显著,蒽9羧酸处理也不改变该酶活性。【结论】根系分泌柠檬酸是柱花草抵御铝毒害的可能机制,而阴离子通道介导此分泌过程。     

Extraction of Proteins from Apple Leaves for Two-Dimensional Electrophoresis Analysis

In order to develop an efficient method about protein extraction which is suitable for apple proteomic analysis, four protocols of total protein extraction from apple leaves, which are trichloroacetic acid/acetone precipitation method （TCA）, phenol extraction methanol/ammonium acetate precipitation method, Tris-HCl extraction method and modified Tris-HCl extraction method were compared. The results showed that the modified Tris-HCl extraction method was the most suitable method in protein extraction for two-dimensional electrophoresis （2-DE） from apple leaves based on the highest resolution and more informative spots of 2-DE gels with no apparent vertical or horizontal streaking.     

不同品种春小麦抗旱性研究

以28份春小麦品系为试材,以晋麦33号为对照,设置水、旱2种处理,研究春小麦品种抗旱性的基因型间差异,并对抗旱系数、抗旱指数等抗旱指标进行了比较分析。结果表明,春小麦品种间抗旱性存在较大遗传差异;抗旱指数与旱地产量和抗旱系数均呈极显著正相关(相关系数分别为0.93,0.85);筛选出抗旱性极强的春小麦品种2个(9693和9738)和抗旱性强品种1个(9681),占供试鉴定品种的10.7%;抗旱性中等品种4个(9643,9658,9725,9742),占供试鉴定品种的14.3%。研究结果可为春小麦的抗旱育种提供参考。     

Analysis on Drought Tolerance of Transgenic Wheat

[目的]评价小麦TaPIMP1基因在小麦耐旱种质培育方面的应用潜力。[方法]将由ubiquitin启动子驱动的TaPIMP1转基因纯合株系B64和B208及受体对照扬麦158在模拟的干旱胁迫条件下进行培养,测定种子萌发、幼苗生长以及部分耐旱相关生化指标的变化。[结果]在20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下,转基因株系及其对照的TaPIMP1表达量在24h内变化剧烈：转基因株系的种子发芽率、胚芽鞘和胚根长度显著高于受体对照。在10％-20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下,转基因株系的叶片相对含水量和可溶性糖含量明显高于受体对照。在15％-20％PEG6000模拟干旱胁迫条件下。转基因株系的叶片丙二醛（MDA）含量明显低于受体对照。[结论]该研究表明转基因株系的耐旱能力较受体对照扬麦158有显著提高。TaPIMP1基因可应用于转基因小麦耐旱种质的培育。     

自然干旱胁迫下紫花苜蓿叶片和根部ABA的代谢变化

[目的]为苜蓿的抗旱栽培及抗旱品种的选育提供理论依据。[方法]以紫花苜蓿为材料,正常供水处理为对照,研究离体干旱条件下其根系和叶片的水分及ABA含量变化。[结果]正常供水条件下,紫花苜蓿根部ABA含量低于叶片;干旱胁迫3h后,叶片ABA含量显著高于对照,之后呈下降趋势,而根部ABA含量呈增加趋势,干旱胁迫6h时根部ABA含量增加至最高,为对照ABA含量的3倍多。随着干旱时间的延长,苜蓿叶片相对含水量（RWC）下降,干旱胁迫3h后,叶片RWC从82.5%下降到56.4%;干旱胁迫6h时,叶片RWC仅为33.5%,而根部RWC变化较小。[结论]水分胁迫下,植物根部ABA可作为信号分子对植物地上部的生长发育起调控作用。     

宁夏西吉干旱变化规律及旱情缓解天气形势分析

[目的]分析研究西北地区历次特大干旱的开端-宁夏西吉县干旱暴雨等极端天气气候事件的变化规律。[方法]用降水距平百分率划分干旱等级并进行统计分析;用季节指数、线形趋势、5年滑动反映干旱变化趋势;时间序列的循环波动用多项式模拟年代际尺度变化,多项式分解的正数部分用柱形图模拟年际尺度变化。[结果]11～6月干旱季节指数大且波动变化;年干旱的总变化趋势呈上升,年代际尺度的干旱以1977年前后最为严重,有约15年、20年的周期,年际尺度的干旱近年急剧上升;对3～5月、9～11月干旱的总趋势、年代际尺度、年际尺度的变化进行了分析讨论。从500 hPa高空天气图上对西吉第一场透雨、久旱转雨天气形势进行了归类分型。[结论]这些工作对开展干旱防灾减灾具有重要的参考价值。