小分子伴侣GroEL(191-345)在E. coli中的表达及其培养条件的优化

小分子伴侣GroEL(191-345)是分子伴侣GroEL顶端区域氨基酸残基191-345的片断,它能显著提高基因工程蛋白蝎毒Cn5、亲环蛋白A和吲哚3-甘油磷酸合成酶等的复性效率,具有广阔的应用前景.为制得大量的小分子伴侣进行蛋白质复性研究,本文对其培养条件进行了优化.结果表明携带小分子伴侣基因的工程菌在含有无机盐和碳源的M9培养基中培养能够显著提高小分子伴侣的表达量,在确定M9为基本培养基之后,对其主要成分进行了优化;同时,考察了发酵温度、供氧量、诱导条件对表达量的影响,将发酵产量提高到556.3 mg/L.     

重组牛凝血酶原-2在大肠杆菌中的表达及包涵体的制备

将含凝血酶原-2的质粒成功地转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导培养,获得凝血酶原-2包涵体.经对培养基成分及操作条件进行优化,详细考察了碳源、氮源、无机盐、诱导起始时间、诱导剂添加量、接种量、发酵温度和转速等因素对目标蛋白表达量的影响.在优化的条件下,重组凝血酶原-2包涵体的产量为110 mg/L发酵液,占菌体总蛋白的21.7%.     

棘豆蠕孢菌液体发酵条件优化

采用液体深层发酵的方法,研究了培养条件对棘豆蠕孢菌（Embellisia oxytropis）菌丝体生长的影响,并采用L9（3^4）正交试验优化液体发酵培养基组成。结果表明,试验范围内棘豆蠕孢菌液体发酵培养的最佳条件为：培养基初始pH6．5、培养温度24℃、装液量32％、接种量12％,在此条件下100mL发酵液的菌丝体产量为0．573g;优化培养基配方为：玉米粉5％、马铃薯20％、磷酸二氢钾0．1％、硫酸镁0．08％。菌种扩繁次数对液体发酵的影响较大,第3代开始生物量显著下降。     

昆虫病原细菌Cip蛋白基因工程菌发酵条件的优化

昆虫病原发光杆菌属(Photorhabdus)细菌产生的2种胞内晶体蛋白CipA和CipB已在大肠杆菌原核表达系统中进行稳定表达,为进一步提高该蛋白在大肠杆菌中的表达水平,确定工程菌摇瓶培养的最适条件,研究了多种无机离子、装液量、培养基初始pH值、诱导前添加葡萄糖等因素对工程菌摇瓶发酵的影响。结果显示,在发酵培养基中添加10 mmoL/L Mg2+和15 mmoL/LPO43-,调节初始pH值至7.2,装液量为25mL(250mL摇瓶),诱导前添加10g/L葡萄糖时,Cip蛋白的表达量可明显提高,发酵条件优化后CipA和CipB的表达量达到了39%和41%。     

大丽轮枝菌拮抗细菌多粘芽孢杆菌7-4菌株发酵产抗菌蛋白条件的优化

为了提高大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)拮抗细菌多粘芽孢杆菌(Bacillus polymyxa)7-4菌株的发酵产抗菌蛋白量,采用单因素法对B.polymyxa7-4菌株发酵培养基所需的碳源、氮源、无机盐进行了筛选,并采用正交试验与单因素试验对7-4号菌株的发酵培养基组成及培养条件进行了优化,最终确定最适发酵培养基及培养条件为:葡萄糖5.0%,大豆蛋白胨5.0%,MnSO40.02%,MgSO4.7H2O 0.10%,培养基初始pH 7.5,种龄10~12 h,30℃摇床培养48 h。经过优化抑菌圈直径增加了50.4%。     

毕赤酵母表达MSL的发酵条件研究

本试验对含有pPIC9K-MSL转化子的毕赤酵母在BSM基础盐培养基中发酵培养条件进行了研究,并从BSM基础盐培养基组分、补料方式以及诱导时间对酵母生长发酵和表达高浓度的外源蛋白的影响进行了单因素优化试验,得到了毕赤酵母在BSM基础盐中发酵MSL的生产工艺。     

抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-AP酶融合蛋白表达条件优化

为提高抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-碱性磷酸酶融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量。采用液体培养基发酵培养能表达出目的蛋白的基因工程菌,对诱导表达得到的目标融合蛋白进行鉴定,探讨5种培养基、6种诱导时间和4种诱导剂-异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度对融合蛋白表达的影响,再通过N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧基琼脂糖凝胶柱和直接竞争酶联免疫分析法进行纯化并对其活性进行鉴定。结果表明,最适宜条件为SB培养基,诱导剂IPTG浓度为0.6 mmol/L,培养9 h,该条件下抗呋喃唑酮代谢物衍生物单链抗体-AP融合蛋白的表达效果较好,表达量从2.89%增加到5.75%,总体增加了约2.86百分点,通过NHS活化羧基琼脂糖凝胶柱纯化后融合蛋白的浓度为1.973 mg/mL,IC₅₀值为56.923 1 ng/mL。本试验单链抗体在大肠杆菌中的可溶性表达量得到了很好的提高,并获得生物活性较好的融合蛋白,为后续呋喃唑酮代谢物免疫检测分析方法的建立奠定了一定基础。     

生防菌菌株A的摇瓶培养条件及发酵工艺

[目的]优化生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺。[方法]采用均匀试验设计方法、回归分析方法和分批补料发酵工艺,研究生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺的优化。[结果]结果表明,适合菌株A摇瓶培养的最佳条件为：培养温度35℃,摇瓶装量12％,接种量3．0％,初始pH值7．2。20L发酵罐分批补料发酵参数为：种子培养基为YDC培养基,培养时间24h,接种量3．0％;发酵培养基：葡萄糖1．0％,酵母膏1．0％,CaCO3 1．0％,pH值7．2;流加培养基：葡萄糖1．5％,酵母膏0．5％,制成混合液一起流加,发酵8h开始流加;发酵周期（34±2）h,在以上发酵条件下,发酵液芽孢浓度达（3．410±0．151）×10^9cfu／ml。[结论]该试验条件下所获得发酵液芽孢数浓度较高,可用于进一步制备生防菌剂。     

产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种的培养和发酵条件

用真菌学方法对产紫杉烷类物质的链格孢1011菌种培养和发酵条件进行了研究，结果表明：该菌易培养，生长发育迅速。用固体培养基培养，划破菌落或变温交替培养，可促进大量产孢。发酵条件优化结果：种子培养的最佳时间为3d,发酵最佳培养时间为8d，前体物苯甲酸纳可促进化合物I的合成，通过氮、碳源优化组合，发酵培养基的最佳氮、碳源每100mL萄糖2．2g,花生饼粉2．6g,黄豆饼粉0．2g,淀粉2．2g,蛋白胨0．48g,酵母膏0．5g,氯化铵0．58g,硫酸镁0．3g,磷酸二氢钾0．3g。采用最佳发酵条件优化培养，可使发酵产物化合物I的组分比原始培养条件下产量提高了262％。     

重组锰超氧化物歧化酶工程菌摇瓶发酵条件的优化

通过单因素试验对重组锰超氧化物歧化酶（Recombinant Manganese Superoxide Dismutase,rMn—SOD）工程菌的摇瓶发酵的培养基（碳源、氮源、无机盐）和培养条件（接种量、乳糖浓度、时间、温度、摇床转速、pH值等）进行了初步优化．结果表明,工程菌发酵的优化培养基组分（质量分数）为：1．5％蛋白胨、1．5％酵母提取物、1．0％NaCl、0．4％KH2PO4、0．8％K2HPO4、1．5％（体积分数）甘油、0．2％NH,C1和5mmol／LMnCl2．乳糖诱导表达的优化条件为：以5％接种量培养5h后,加入质量分数为0．25％的乳糖进行诱导表达6h．当发酵温度为37℃、摇床转速为180r／min、培养基的初始pH值为7．0时,表达的rMn—SOD的酶活力高．在优化条件下,工程菌的SOD活性达1969．9U／mL,比活力达1081．8U／mg．     

解淀粉芽孢杆菌CM3培养基及发酵条件优化

为了提高解淀粉芽孢杆菌CM3的抑菌活性,对菌株的培养基组分和发酵条件进行了优化研究。采用单因素试验对菌株菌CM3的所需碳源、氮源、无机盐、培养基初始pH、接种量、培养时间和培养温度进行了筛选,并用正交设计试验对培养基组成以及培养条件进行了优化。结果表明,最终优化后的培养基组分为:玉米粉2%,豆粕0.5%,鱼粉0.5%,NaCl 0.1%;最佳发酵条件:pH值7.0,接种量5%,培养时间48 h,培养温度31℃;在优化后,拮抗细菌CM3的发酵液抑菌圈直径可达到37.58 mm,比优化前提高了22.7%。     

枯草芽孢杆菌的选育及其发酵豆粕的工艺条件研究

[目的]为大豆多肽的工业化生产提供理论依据。[方法]以紫外线诱变后筛选得到的枯草芽孢杆菌B1-2菌株发酵豆粕生产大豆多肽,通过单因子及正交试验确定最佳发酵条件。[结果]各因素对枯草芽孢杆菌B1-2发酵豆粕生产大豆多肽的影响依次为：豆粕含量、培养基pH值、发酵温度和接种量。最佳发酵条件为：发酵培养基中含9%豆粕、2%麸皮,以培养24 h的枯草芽孢杆菌B1-2菌株为发酵菌种,在初始pH值7.5,温度35-40℃,接种量8%条件下发酵64 h,此条件下豆粕蛋白的水解度可从初始条件的17.80%提高至21.06%,比条件优化前提高了18%。[结论]该研究优化了枯草芽孢杆菌发酵豆粕生产大豆多肽的工艺条件。     

乳酸乳球工程菌表达L-苯丙氨酸解氨酶的工艺优化

[目的]提高乳酸乳球工程菌表达L-苯丙氨酸解氨酶的水平.[方法]对培养基种类、接种量、培养温度、诱导剂浓度、磷酸甘油二钠浓度等因素进行了优化.[结果]使用DifcoTM M17 Broth培养基培养乳酸乳球菌时,L-苯丙氨酸解氨酶表达活性最高;磷酸甘油二钠对L-苯丙氨酸解氨酶表达活性有较大影响,可提高活性93.8％.通过正交试验,得到PAL最佳表达条件为接种量2.0％,培养温度30℃,磷酸甘油二钠浓度2.0％,诱导剂浓度10.0 μg/L. PAL表达酶活可达3.05 IU/ml.[结论]在发酵扩大培养中优化了L-苯丙氨酸解氨酶在乳酸乳球菌中的表达条件,为今后生产及应用提供参考.     

重组亲环蛋白A的可溶性表达

为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g?L-1,酵母提取物10 g?L-1,NaCl 5 g?L-1,甘露醇10 g?L-1,Amp50 mg?L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol?L-1IPTG诱导,然后在30℃、180 r?min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg?L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%.     

南极适冷菌Rheinheimera sp.97产抗菌活性物质发酵条件的优化

[目的]优化南极适冷菌Rheinheimerasp．97产抗茵活性物质的发酵条件。[方法]通过单因素和正交试验对南极适冷茵R．sp．97产抗茵活性物质的发酵培养基进行了优化,并通过单因素试验对其发酵条件进行了优化。[结果]菌株R．sp．97产抗菌活性物质的最佳培养基为：蛋白胨3．Og／L,硫酸铵1．0g／L,淀粉2．0g／L,NaCl15．0g／L;最佳发酵条件为：发酵培养基初始pH8,发酵温度10℃,摇瓶装液量30．0％（V／V）,接种量1．0％（V／V）。优化后菌株R．sp．97发酵液的抗茵活性较优化前提高了22．2％。[结论]为研究南极适冷茵R．sp．9r7的活性物质奠定了基础。     

大肠杆菌表达抗脂多糖因子的发酵条件优化

抗脂多糖因子(anti-lipopolysaccharide factor, ALF)作为一种重要的抗菌肽,具有抗菌性强,抗菌谱广的特点。将中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)抗脂多糖因子基因ALF克隆至pET32a载体获得原核表达载体。为了提高ALF融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达量,保持抑菌活性,对已构建的重组大肠杆菌的发酵条件进行了优化,通过单因素分析的方法,考察了五种不同的培养基对表达量的影响,并在LB+M9培养基的基础上对培养基各组分进行了选择和优化,确定最佳培养基组分为:2.5 g/L蔗糖,10 g/L酵母膏,2.4 g/L(NH4)2SO4,12.8 g/L Na2HPO4,3 g/L KH2PO4,10.5 g/L NaCl,2 mmol/L MgSO4,0.1 mmol/L CaCl2溶液。分析了多种因素对表达量的影响,结果表明,培养基pH调至6.5,在菌体OD600达到0.8时加入诱导剂IPTG至终浓度为0.5 mmol/L,33℃继续诱导5 h,蛋白表达量最高。表达的融合蛋白可以抑制藤黄微球菌(Micrococcus luteus)在平板上的生长。     

培养条件对pTrxAR质粒在E.colicGI1724中孕育量的影响

学融合表达系统是Ｉｎｖｉｔｒｏｇｏｎ公司近年来发展的以Ｅ．ｃｏｌｉ硫氧还蛋白作为融合伴侣的融合表达系统。其重组质粒的诱导表达需在Ｅ．ｃｏｌｉＧＩ系列菌株中进行。本文对载体质粒ｐＴｒｘＦｕｓ及其携带编码ｈＡＲＬＢＤ基因的重组质粒ｐＴｒｘＡＲ在Ｅ．ｃｏｌｉｃＧ１７２４株中的质粒孕育量与生长培养条件的关系进行了研究。结果表明，菌株在平板ＲＭ培养基上的活化生长时间及菌体液体培养时的温度对其质粒孕育量影响极     

地衣芽孢杆菌发酵培养基的优化

[目的]对地衣芽孢杆菌发酵培养基进行优化,并在此基础上确定最佳培养条件,为实现其工业化生产提供参考。[方法]借鉴谷春涛等关于地衣芽孢杆菌TS-1液体培养发酵条件的研究成果,对培养基进行澄清,并运用单因素试验和4因素3水平正交试验对其培养基进行改进,对地衣芽孢杆菌发酵条件进行优化以得到其最佳温度、pH值和接种龄。[结果]4种因素对地衣芽孢杆菌发酵影响的显著性次序为：玉米浆〉豆饼粉浸汁〉蛋白胨〉葡萄糖。培养基的最佳配比为：玉米浆0．45g,蛋白胨1．50g,豆饼粉浸汁为1：15,葡萄糖1．50g。最适宜种龄为18h,接种量8％,起始pH值7．5,最佳温度37．5℃,此条件下地衣芽孢杆菌对数生长期在14～20h,发酵周期为22～24h。活菌数每单位提高近1亿个,发酵周期比经验周期缩短10h。[结论]试验得出了地衣芽胞杆菌发酵培养基的最佳配比及最佳培养条件,在此条件下培养,收获菌体量大大提高,降低了生产成本,更有利于其大规模工业化生产。     

真菌Z4-10发酵生产人参皂苷的工艺

为有效提高人参皂苷的浸出率,采用液体发酵方法,以发酵液中人参总皂苷释放量为测试指标,从人参根际土壤中分离得到的真菌中筛选出1株发酵液中总皂苷释放量较高的菌株Z4-10,并采用单因素试验和正交试验对真菌Z4-10发酵人参的培养基和发酵条件进行了优化。获得其最佳培养基配方:葡萄糖1%,小麦粉2%,蛋白胨0.5%,豆粕2%,磷酸二氢钾0.05%;最优发酵条件:人参2%,接种量8%,培养温度30℃,培养基初始pH 8.0,发酵时间9 d。真菌Z4-10通过最优条件发酵人参后,发酵液中总皂苷释放量达8.576 mg/g,比常规水提人参总皂苷释放量提高了97.5%。     

金属硫蛋白基因MT1A在大肠杆菌中的自诱导表达条件优化及其抗镉性

为了提高金属硫蛋白基因MT1A的高效表达和对重金属的抗性,以菌体密度、可溶性目的蛋白表达量为评价指标,对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母粉、甘油、葡萄糖、乳糖)进行优化,并对其抗镉(Cd)性进行分析。结果表明,最优自诱导培养基组分为2.0%蛋白胨、2.0%酵母粉、0.3%甘油、0.05%葡萄糖、0.3%乳糖;重组菌自诱导表达最优培养条件为37℃培养3 h,然后25℃继续培养13 h,此时菌体密度、可溶性蛋白表达量、可溶性蛋白相对产量均最高,分别比未优化ZYM-5052培养基提高77.7%、94.0%、244.8%。当Cd2+浓度为0.5 mmol/L时,高效表达金属硫蛋白的菌株具有明显的抗Cd活性。