丁香酚诱导癌相关成纤维细胞凋亡的研究

【目的】研究丁香酚诱导癌相关成纤维细胞（CAF）的凋亡表现及其相关机制,为丁香酚的开发利用提供参考。【方法】用0（CK）,30,60,90,120 μmol/L丁香酚处理正常成纤维细胞(NF)24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0（CK）,30,60,90,120,150,180 μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h后,用MTT法检测细胞活力。用0（CK）,30,60 μmol/L丁香酚处理CAF细胞24 h,用Annexin V FITC和PI双染色法对细胞染色后进行流式细胞分析。用60 μmol/L丁香酚处理CAF细胞0（CK）,15,30,60,120 min,用Western blotting法检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。【结果】30~120 μmol/L丁香酚处理对NF细胞活力无显著影响;30~180 μmol/L丁香酚处理对CAF细胞活力有显著或极显著的抑制作用,丁香酚对CAF细胞的半数抑制浓度为84.47 μmol/L。60 μmol/L丁香酚能够显著诱导CAF细胞凋亡。凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、P-P53、Caspase 9、Cleaved Caspase 3、Cytochrome C参与了丁香酚诱导的CAF细胞凋亡调控过程。【结论】丁香酚对CAF细胞有抑制作用,其作用可能是通过P53蛋白途径和内源性凋亡途径实现的。     

异硫氰酸丙烯酯对大鼠肝细胞凋亡的影响

为研究异硫氰酸丙烯酯对细胞活性的影响,试验以20mg·L-1的内毒素(LPS)和1.25×10-5mol·L-1的异硫氰酸丙稀酯(AITC)分别或共同处理大鼠肝细胞3h后,用AnnexinV/PI双染色,流式细胞术分析细胞凋亡;反转录酶聚合酶链反应(RT-RCR)分析FasL和Caspase-8的表达情况。结果表明,AITC能有效抑制LPS(20mg·L-1)诱导的肝细胞凋亡,且在此过程中,FasL、Caspase-8的表达量均有减少。结果提示AITC可以通过Fas途径抑制LPS诱导的肝细胞凋亡,其作用有可能导致肿瘤的发生。     

原花青素促进三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的作用机制研究

目的 研究原花青素（Procyanidins,PC）对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖及细胞凋亡的作用及其机制。方法 常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、对照组和PC10、20、40、80、160、320 μg/mL组。MTT法检测细胞生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测FoxA1蛋白及抗凋亡蛋白bcl2、UCP2表达。结果 PC各剂量组均可显著抑制抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05）;PC（10-160 μg/mL）组剂量依赖性抑制MDA-MB-231细胞增殖（P<0.05）,PC（40-320 μg/mL）可以时间依赖性抑制细胞增殖（P<0.05）;PC320 μg/mL组各时间点细胞抑制率与PC160 μg/mL组差异无显著性（P>0.05）;160 μg/mL PC可以时间依赖性促进MDA-MB-231细胞凋亡（P<0.05）;160 μg/mL PC作用24 h后,FoxA1蛋白表达显著上升（P<0.05）,同时bcl2及UCP2表达降低（P<0.05）。结论 PC抑制MDA-MB-231细胞,促进MDA-MB-231细胞凋亡,升高其FoxA1表达,同时降低bcl2及UCP2表达,表明PC可能通过促进FoxA1表达发挥促进MDA-MB-231细胞凋亡的作用。     

NF-κB抑制剂PDTC对卵巢癌细胞HO8910增殖、凋亡的影响

应用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测不同浓度吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)、顺铂(DDP)和联合应用PDTC与DDP对HO8910细胞生长抑制的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度PDTC作用HO8910后的细胞凋亡率.结果表明: ① PDTC浓度为25、50、100和200 μmol·L-1时,作用12、24、36 h均明显抑制HO8910细胞的增殖,与对照组比较差异极显著(P<0.01),并具有时间、剂量依赖性.②顺铂联合应用PDTC时能显著提高顺铂杀伤卵巢癌细胞作用.③ 25、50、100 μmol·L-1 PDTC诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡.PDTC能有效抑制卵巢癌HO8910细胞增殖并能够增强顺铂化疗作用,提高疗效.     

H2O2对Caco-2细胞氧化应激的影响

研究H2O2对Caco -细胞抗氧化应激能力的影响。试验按培养时间不同分为3组（12,24和48 h）,每组的H2O2浓度分为4个水平（0,50,100和200 μmol·L-1）,细胞培养至12,24和48 h时测定细胞活性,培养上清液和细胞裂解液中的抗氧化指标。结果表明,50 μmol·L-1 H2O2对Caco-2细胞并没有产生明显的氧化损伤,100 μmol·L-1 H2O2对Caco-2细胞产生了可恢复的氧化损伤, 200 μmol·L-1 H2O2则对Caco-2细胞产生了严重的、不可逆的氧化损伤;24 h时细胞的各项清除自由基能力较高,48 h时细胞的氧化损伤加重,细胞产生抗氧化物质的速度减慢。表明100 μmol·L-1 H2O2对细胞产生了比较合适的氧化应激。     

瘤背石磺多糖对人宫颈癌细胞的体外抑制作用

体外试验研究瘤背石磺多糖（Onchidium reevesii polysaccharides, OSP）和硫酸酯化修饰后瘤背石磺多糖（Sulfated Onchidium reevesii polysaccharides, S-OSP）对Hela人宫颈癌细胞生长的影响,并以阳性药物顺铂(0.5 μg/ml、0.75 μg/ml、1.5 μg/ml)作为对照。将不同浓度（50 μg/ml、75 μg/ml、150 μg/ml）的OSP和S-OSP作用于Hela细胞,用CCK-8法分析Hela细胞在12h、24h、48h和72h的增殖情况,用流式细胞仪分析细胞周期,并应用qRT-PCR检测相关凋亡基因的表达变化。结果表明OSP和S-OSP均能降低Hela细胞活性并诱导其凋亡,而且S-OSP比OSP更能显著抑制Hela细胞增殖活性（P<0.05）,表明硫酸酯化修饰改变了多糖结构进而影响多糖抗肿瘤活性。作用48h后,三种浓度OSP组Hela细胞生长抑制率分别为60%、67%、71%;S-OSP组Hela细胞生长抑制率分别为74%、77%、84%;顺铂组Hela细胞生长抑制率分别为82%、86%、90%。流式细胞术检测显示OSP和S-OSP作用24h后,细胞早期和晚期凋亡的比率显著（P<0.05-0.01）,G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例不断降低;实时荧光定量表明促凋亡基因Caspase-3的表达量随药物浓度的提高显著增加,抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl的表达量随药物浓度的提高无明显变化,说明OSP和S-OSP可通过调节Caspase信号通路诱导Hela细胞凋亡。     

超微形态学观察氯化三乙基锡抗体外培养大鼠C6脑胶质瘤增殖作用

目的探讨氯化三乙基锡（TETC）抗体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖作用及观察C6胶质瘤细胞超微形态学变化．方法采用四甲基偶氮唑盐（MTF）比色法检测0,0．5,1．0,2．0mol/L TETC作用C6细胞24,48h增殖率．采用透射电镜观察C6细胞超微形态学变化．结果0．5,1．0,2．0mol／L TETC在体外可抑制C6胶质瘤细胞的增殖,增殖率存在着剂量依赖和时间依赖下降关系．0．5,1．0,2．0mol／L TETC作用C6细胞48h后可见细胞收缩体积变小,胞浆浓缩,细胞核内染色质趋边凝集,排列于核膜内侧,细胞核浓缩碎裂凋亡坏死的超微结构变化．结论TETC可抑制体外培养C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能和凋亡坏死有关．     

乐果对大鼠肝细胞凋亡作用的研究

通过给大鼠肝细胞培养液中加入乐果(染毒终浓度分别为0、3、10、30、100和300 μmol·L-1),染毒12、24 h后,Annexin V/PI双染法检测肝细胞凋亡率;分别用Fluo-2/AM、双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)和罗丹名123检测细胞内Ca2+浓度、活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△Ψm)变化,并在扫描电镜和荧光显微镜下观察凋亡细胞情况,研究乐果对大鼠肝细胞凋亡的影响.结果表明,肝细胞染毒12和24 h后,出现了明显的细胞凋亡的形态学变化,细胞凋亡率明显升高,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01),且呈时间-剂量效应.3 μmol·L-1组细胞内Ca2+浓度极显著高于对照组(P<0.01),之后随染毒剂量的增加,细胞内Ca2+度逐渐下降;细胞内ROS水平在3-100 μmol·L-1范围内随染毒剂量的增大和染毒时间的延长而升高,而在300 μmol·L-1组略有下降,除3 μmol·L-1组外,与对照组相比均差异极显著(P<0.01);△Ψm除24h 300 μmol·L-1组外均出现持续下降.表明低剂量乐果染毒可诱导肝细胞发生凋亡,细胞内Ca2+、ROS和△Ψm可能参与了这一过程.     

仙鹤草酚对K562白血病细胞的抑制作用

[目的]研究仙鹤草酚对K562白血病细胞的抑制作用。[方法]以培养的K562白血病细胞为研究对象,通过MTT试验以及流式细胞术检测仙鹤草酚对K562白血病细胞活性及细胞凋亡率的影响。[结果]仙鹤草酚剂量依赖性（0.11、1、0 mg/ml）地抑制了K562细胞活性,增加了其凋亡率（P〈0.05）。[结论]仙鹤草酚对K562细胞有明显的抑制作用。     

线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素致PC12细胞凋亡中的作用

探讨线粒体凋亡途径在硫酸黏菌素诱导PC12细胞凋亡中作用.取对数生长期PC12细胞,用含0、62.5、125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素DMEM培养液,作用24 h,采用Hoechst33258荧光染色法检测PC12细胞凋亡,Western blot法检测细胞色素C(Cyt-C)、Bax、Bcl-2蛋白表达含量,试剂盒检测Caspase-3活性.与对照组相比,125、250 μg· mL-1硫酸黏菌素剂量组细胞PC12细胞Cyt-C、Bax蛋白表达量、Caspase-3活性显著升高(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.01),具有剂量-效应关系.说明线粒体途径介导PC12细胞凋亡是硫酸黏菌素神经毒性作用机制之一.     

不同浓度外源过氧化氢对小菊扦插生根的影响

以小菊"东莞红"为试验材料,用0、50、100、200、500和1000μmol·L-1不同浓度外源H2O2对小菊插穗处理,观测插穗生根的发生和生长,测定叶片过氧化物酶(POD)和多酚氧化物酶(PPO)活性的变化。结果表明:外源过氧化氢处理对小菊插穗生根有明显的浓度效应,适宜浓度的外源过氧化氢能促进小菊插穗生根以及根的生长,过氧化氢浓度在50-500μmol·L-1的处理能促进插穗生根和根的生长,降低叶片POD活性,提高PPO活性,其中200μmol·L-1为最适宜浓度。     

5种常用杀虫剂对方斑东风螺稚螺的急性毒性试验

采用水生生物急性毒性试验方法,检测了福尔马林、硫酸铜、硫酸铜硫酸亚铁合剂（m硫酸铜∶m硫酸亚铁=5∶2）、敌百虫和高锰酸钾5种常用杀虫剂对壳高（1.5±0.2）cm方斑东风螺稚螺的24 h和48 h半致死浓度（LC50）。结果表明：以上5种常用杀虫剂对方斑东风螺稚螺24 h的LC50值依次分别为81.45,34.81,18.17,478.19和89.12 mg·L^-1;5种常用杀虫剂对方斑东风螺稚螺48 h的LC50值依次分别为64.72,5.81,12.68,407.48和43.38 mg·L^-1;安全质量浓度分别为12.21,0.05,1.86,89.23和3.10 mg·L^-1。     

水杨酸对银杏幼苗抗高温胁迫能力的影响

为确立水杨酸对银杏Ginkgo biloba的耐热性调控效果并探讨外源水杨酸下银杏耐热的可能机制,分别对2年生银杏叶片喷施100,200μmol·L^-1的水杨酸溶液处理48h,并以喷施蒸馏水为对照,然后以44℃的高温胁迫4h。结果表明：高温胁迫下,2种浓度的水杨酸溶液均可抑制银杏叶片中相对电导率和丙二醛质量摩尔浓度的升高,促进超氧化物歧化酶活性的增强和抗坏血酸质量分数的升高,而且与对照相比,外源水杨酸处理过的银杏叶片可溶性蛋白质量分数较高,可溶性糖较低。各项生理生化指标均反映了水杨酸对缓解高温对银杏的伤害起到了一定作用;100μmol·L^-1的水杨酸溶液比200μmol·L^-1的水杨酸溶液缓解银杏受高温伤害的效果要好。图3参21     

静置培养BHK-21细胞生长及代谢动力学研究

为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S型,最大增殖密度为50.3×104 upf·mL-1,倍增时间为21.1h;对数生长期Gluc和Gln的比消耗速率为-3.79mg·(106 cells)-1·d-1和-9.95μmol·(106 cells)-1·d-1,Lac和NH4+的比生成速率为2.81mg·(106 cells)-1·d-1和6.30μmol·(106 cells)-1·d-1。     

菲白竹组织培养技术

以菲白竹Sasafortunei幼嫩竹秆和竹鞭为材料,研究其组织培养快繁关键技术。结果表明：以竹鞭为外植体萌芽率较高,添加6-苄基腺嘌呤（6-BA）试管苗增殖效果优于噻二唑苯基脲（TDZ）,但TDZ能促进新芽生根;以MS（Murashige and Skoog）为基本培养基,分别添加3mg·L^-1 6-BA与0．5mg·L^-1萘乙酸（NAA）,侧芽增殖系数达3．60;添加3mg·L^-1 6-BA与0．01mg·L^-1 TDZ,增殖系数较高（3．43）,且伸长生长迅速,生根率达到100％,可同时实现增殖与生根,有利于菲白竹大规模快速繁殖。图1表3参9     

四种重金属离子对史氏鲟稚鱼的急性毒性

针对史氏鲟鱼人工养殖中药物重金属残留问题,精确测定重金属残留的安全浓度对史氏鲟鱼的养殖就尤为重要,试验研究了Cu2+、Cd2+、Zn2+、Pb2+四种重金属离子对史氏鲟稚鱼的急性毒性。选择28日龄史氏鲟稚鱼为试验鱼,配制一定浓度梯度的硫酸铜、硫酸锌、氯化镉、硝酸铅化学纯母液,采用静水法测定Cu2+、Cd2+、Zn2+、Pb2+对史氏鲟稚鱼的24 h、48 h、72 h和96 h的LC50(半数致死浓度)、LC100(绝对致死浓度)和安全浓度。研究结果得出Cu2+、Cd2+、Zn2+、Pb2+四种重金属离子对史氏鲟稚鱼安全质量浓度(SC)为:0.003 8 mg·L-1、0.091 3mg·L-1、0.028 2 mg·L-1、0.285 4 mg·L-1。     

烯草酮乳油防除春大豆田一年生禾本科杂草药效试验

在大豆苗后2~3片复叶期(禾本科杂草3~5叶期)施用120 g.L-1烯草酮乳油525~675 mL.hm-2,对野黍具有较高的防除效果,对稗草、狗尾草防效理想,对大豆生长安全。     

氨氮质量浓度对感染白斑综合症病毒的凡纳滨对虾的影响

研究了氨氮质量浓度渐变和突变对白斑综合症病毒(WSSV)在凡纳滨对虾体内增殖的影响。结果表明:在氨氮质量浓度突变组实验中,氨氮质量浓度从起始浓度0.05 mg·L-1向中浓度1.25 mg·L-1和高浓度3.0 mg·L-1突变过程中对凡纳滨对虾的累积死亡率和对虾体内病毒增殖影响显著(P0.05),先氨氮突变后感染WSSV实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率分别为25.6%,34.4%和48.9%;病毒含量最大值分别为9.59×105,5.75×106,1.62×106copy·g-1。先感染WSSV后氨氮突变实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率最大值分别为30%,38.9%和48.9%;病毒含量最大值分别为9.59×105,9.58×105,4.94×106copy·g-1,氨氮浓度渐变实验中各组至24 h对虾累积死亡率较低(P0.05),48 h后开始出现显著差异(P0.05)。先氨氮渐变后感染WSSV实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率最大值分别为28.9%,30.0%和45.6%,病毒含量最大值分别为9.59×105,4.48×106,1.86×106copy·g-1。先感染WSSV后氨氮渐变实验中氨氮起始、中、高浓度胁迫下对虾累积死亡率分别为25.6%,33.3%和45.6%;病毒含量最大值分别为9.59×105,8.58×105,6.55×106copy·g-1。这表明对于携带WSSV的对虾,氨氮变化越大,WSSV从潜伏感染转为急性感染的可能越大,所以控制水质中氨氮含量在低浓度水平对预防WSS爆发至关重要。     

地涌金莲试管苗生产技术研究

以地涌金莲的吸芽作为外植体进行组织培养,研究了无菌外植体的构建、芽的增殖及生根培养等几个关键步骤的培养基配方.实验操作按植物组织培养的常规方法进行,实验数据采用SAS软件进行分析.结果表明:地涌金莲吸芽纵切后接种于MS+2.5 nag·L-1 6-BA+30 g·L-1 蔗糖培养基上,25 d后长出幼芽;丛生芽在MS+...     

蝴蝶兰离体保存及其遗传稳定性研究

采用缓慢生长保存法对蝴蝶兰试管苗进行离体保存,并对保存材料再生后代的遗传稳定性进行研究。结果表明：在培养温度（24±3）℃,光照强度前3个月2000～2500lx和3个月后500～1000lx,光照时间12 h·d^－1的培养条件下,蝴蝶兰试管苗在添加蔗糖10g·L^－1的 HyponexNo．13．0g·L^－1＋AC0．5g·L^－1培养基上保存18个月,存活率达96．3％;在添加甘露醇15g·L^－1或多效唑（PP333）6．0mg·L^－1的 HyponexNo．13．0g·L^－1＋ AC0．5g·L^－1＋蔗糖20g·L^－1培养基上保存18个月,存活率达80．0％以上,且保持较高的增殖速率,增殖系数4．1;上述3种方法保存后的试管苗均能正常恢复生长,其植株与对照在形态性状方面无明显区别,RAPD 分子标记也显示与对照无差异带出现,遗传性状稳定。