GnIH在陆川仔公猪消化系统及气管的分布定位

为探究Gn IH在猪消化系统和呼吸系统的分布定位,应用免疫组化和半定量RT-PCR技术,对30日龄健康陆川仔公猪的消化及呼吸系统进行Gn IH定位研究。免疫组化试验结果显示:在陆川猪消化系统和呼吸系统中,幽门圆枕、十二指肠、回肠、结肠、肝、食管、丝状乳头、颌下腺及气管均有Gn IH免疫阳性细胞分布,但胞体的形态和大小不一。半定量RT-PCR试验结果显示:结肠、颌下腺有中等丰度的表达,幽门圆枕、丝状乳头、回肠有低丰度的表达,无Gn IH mRNA表达的组织有食管、十二指肠、肝和气管。     

GnIH对母猪生殖调控的研究

【目的】研究促性腺激素抑制激素(GnIH)mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量GnIH对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨GnIH在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究GnIH mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量GnIH(10-6、10-8、10-10和10-12 mol·L-1)对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素(雌二醇,孕酮)的合成、细胞增殖相关蛋白(cyclin B1,PCNA)表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】GnIH mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的GnIH作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10-6和10-10 mol·L-1 GnIH能极显著地抑制雌二醇的分泌(P0.01),但不同剂量的GnIH对孕酮分泌的影响并不显著。GnIH能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达(P0.01)。此外,激光共聚焦结果显示GPR147与GnRH在下丘脑室旁核及视前区存在密切联系。【结论】GnIH可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,GnIH可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。     

酪氨酸酶在不同被毛颜色羊驼皮肤组织中的表达与定位

【目的】研究酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)在不同毛色羊驼皮肤组织中的表达与定位,为揭示羊驼被毛颜色形成的机制奠定基础。【方法】采用半定量RT-PCR方法检测TYR mRNA在不同毛色羊驼皮肤组织中的相对表达量,采用免疫组织化学技术对TYR在羊驼皮肤中的表达进行定位。【结果】不同毛色羊驼皮肤组织中均有TYR基因mRNA的表达,有色被毛皮肤组织中TYR的基因mRNA表达量显著高于白色被毛组织的表达量;在有色被毛皮肤组织中,TYR阳性反应区主要集中于毛球部位,即毛根成形部;而白色被毛组织中,TYR阳性反应区主要位于毛根壶腹部及膨大部,即毛根永久部。【结论】综合分析TYR基因mRNA表达量及蛋白定位结果可知,TYR是成熟黑色素细胞的标记分子之一,羊驼毛色形成取决于成熟黑色素细胞在毛囊组织中的相对数量及分布部位。     

外源赤霉素对桃的成花效应及其作用机制

 【目的】揭示赤霉素对桃成花的影响及其可能的作用机制。【方法】在桃花诱导期叶面喷施100 mg?L-1 GA3,运用解剖学、免疫组织化学及半定量RT-PCR方法,研究‘八月脆’桃花芽分化过程中顶端分生组织赤霉素的原位分布及成花关键基因表达变化。【结果】‘八月脆’桃在7月10日前处于成花诱导期（北京）;成花诱导期叶面喷施100 mg?L-1GA3显著抑制了桃花诱导及进一步的正常分化,处理后成花率仅为11.67%;顶端分生组织中GA1的分布随花芽分化进程而变化,6月13日－7月25日,花芽中GA1主要分布在芽基部的维管组织中,顶端分生组织中没有检测到信号。GA3处理后,GA1的分布在6月13日－7月3日与正常花芽相同,在7月13日顶端分生组织中检测到了GA1信号,且芽基部维管组织中的GA1信号增强,但至7月25日顶端分生组织和芽基部维管组织中的GA1信号明显减弱;GA3处理后,芽中PpLEAFY 及MADS6基因仅在10月10日低量表达,其它时期几乎检测不到。【结论】在北京,‘八月脆’桃成花诱导期在7月10日之前;成花诱导期100 mg?L-1 GA3处理能显著抑制花诱导和进一步正常分化;赤霉素家族中GA1 类在桃成花过程中起抑制作用,并且具有一定的时期性;GA3处理抑制了成花关键基因PpLEAFY及MADS6的正常表达。     

肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在组织中的分布

为研究肠炎沙门氏菌诱导鸡Toll样受体2在脏器组织中的分布情况,4周龄SPF鸡口服肠炎沙门氏菌后,于感染后48 h时心脏采血分离外周血单核淋巴细胞并采集11种组织,常规方法抽提总RNA,以鸡β-actin基因为内参,采用半定量RT-PCR法检测各组织中鸡Toll样受体2(chTLR2)基因的表达情况.结果表明:chTLR2主要分布于免疫组织系统中,ch TLR2t1没有chTLR2t2表达得广泛.说明chTLR2可能参与了肠炎沙门氏菌感染的天然免疫反应过程.     

半定量RT-PCR法检测SPRN基因在小鼠各组织中的mRNA表达

[目的]研究SPRN基因在不同组织中的表达水平和机制。[方法]选择3种不同品系的小鼠为试验材料,利用半定量RT-PCR方法,测定不同品系小鼠各组织中SPRN基因的mRNA表达水平,并对其循环次数进行研究。[结果]SPRN基因主要在脑组织中表达,在肺脏和胃中表达量较低,而在淋巴结和脾脏中仅有微量的表达;半定量RT-PCR体系的最佳扩增循环数为23。[结论]成功地建立了检测SPRN基因mRNA表达的半定量RT-PCR方法,该方法具有简便、快速、准确和精密度高等优点。     

3种非特异性免疫相关基因在点带石斑鱼组织中的mRNA表达分析

以β-肌动蛋白(β-actin)的表达量作为内标,应用半定量RT-PCR技术,对健康养殖条件下点带石斑鱼不同组织(头肾、心脏、肝脏、脾脏、胃、肠和鳃)中3种非特异性免疫相关基因:c型溶菌酶(CTL)、白细胞介素8(IL8)、toll样受体5(TLR5)的mRNA表达量进行了研究。结果显示,CTL、IL8、TLR5基因在点带石斑鱼的7种组织中均有表达,CTL基因表达量最高的组织为脾脏,IL8和TLR5基因在头肾中表达量最高;CTL、IL8、TLR5分别在肠、鳃和心脏中的表达量最低。     

瘦蛋白受体基因在肉鸡不同组织中的表达差异

为了探讨瘦蛋白受体(OBR)基因在肉鸡不同组织中的表达差异,采用半定量RT-PCR和Northern blot方法检测OBR基因在不同发育阶段的肉鸡高脂系公鸡多种组织中的表达情况.结果表明:OBR基因在所检测的8种组织中均有表达,且表达量存在差异,其中大脑、心脏中的表达量高,并显著高于其他组织(p<0.05),腿肌和胸肌中的表达量较低.     

半定量RT-PCR检测PERV mRNA在姜曲海猪不同器官与组织中的表达

猪内源性反转录病毒(PERV)为反转录病毒科哺乳动物C型反转录病毒属成员,它以前病毒DNA的形式整合进猪细胞基因组中,并随细胞染色体复制而复制.本试验利用半定量RT-PCR方法分析姜曲海猪的肝、心、胰、脾、肺、胆、腿肌等器官与组织中PERV基因3种亚型的mRNA表达情况.结果表明:在所检测的器官与组织中,PERV-A在肝中表达丰度最高,胰中表达丰度最低;PERV-和PERV-C均在腿肌中表达丰度最高,脾中表达丰度最低.     

钙蛋白酶抑制蛋白（CAST）基因在鸡不同组织和品种中的表达差异

 【目的】了解鸡钙蛋白酶抑制蛋白（calpastatin，CAST）基因的组织特异性表达情况和在不同鸡品种间的表达差异。【方法】利用半定量RT-PCR方法研究CAST基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。【结果】CAST基因表达于鸡的各个不同组织中，在胸肌中的表达量最多并显著高于其它组织（P＜0.05）；不同鸡品种胸肌组织中CAST基因表达量差异显著（P＜0.05），艾维茵肉鸡胸肌组织中CAST基因的表达量显著高于其它几个品种（P＜0.05），优质肉鸡品种间差异不显著(P＞0.05)，但显著高于蛋鸡（P＜0.05）。【结论】结果表明钙蛋白酶抑制蛋白是一种在鸡体内普遍存在的蛋白，CAST基因在鸡不同组织和品种中的表达存在显著差异。     

日龄对仔猪股骨骨髓组织抗菌肽PR-39 mRNA表达的影响

为探明日龄对仔猪非特异性免疫形成的影响,分别于仔猪出生当天,3,14,23,28 d,随机屠宰杜长大仔公猪4头,采集股骨骨髓组织.用一优化的RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,半定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 mRNA表达的差异.结果表明:不同日龄间仔猪骨髓组织PR-39 mRNA相对表达量存在明显的差异.出生时最低,吮吸初乳2 d后显著增加,14日龄时较3日龄显著下降,随后随日龄的增加,其表达量呈上升趋势.     

米非司酮对雄性小鼠繁殖抑制作用研究

为确定米非司酮抑制雄性小鼠繁殖的有效剂量及其生理机制,以不同浓度米非司酮油溶液灌胃给药,测定了各组雄性小鼠的体重.器官、精子活力及激素等生理指标和繁殖能力.结果表明:不同剂量米非司酮处理对雄性小鼠体重、睾丸鲜重和附睾鲜重无显著影响,对精子数量和活动性影响主要在高剂量时较强,而随着剂量增加,精子的存活率显著降低且畸形率显...     

油菜花蕾发育及开花过程中ABCD功能基因的表达差异分析

以油菜处于花蕾发育过程7个生长期的花蕾和花朵为材料，利用优化的半定量RT-PCR技术在转录水平对ABCD模型的6个功能基因，即Apetalal、Apetala2、Apetala3、Pistillata、Agamous、Agamous-likell，进行分析，探讨了油菜花蕾发育及开花过程中6个功能基因表达的差异。结果表明，在油菜花蕾发育及开花过程中ABCD模型中的6个功能基因的表达水平均有变化。研究阐述了ABCD模型在油菜与拟南芥中存在基因表达时期和表达水平相似性和差异，对进一步分析ABCD功能基因在油菜花蕾和花朵中的表达，油菜育种，雄性不育及花型改变的研究具有重要的意义。     

中草药渣对断奶仔猪生长、肠道菌群和免疫的影响

在体重约7 kg的28日龄断奶仔猪基础日粮中分别添加0.5%,1.0%,1.5%的中草药渣,与对照组比较,日增重分别增加5.04%(P>0.05),12.28%(P<0.05)和7.72%(P<0.05),料重比分别降低6.01%(P<0.05),9.29%(P<0.05)和7.10%(P<0.05),腹泻率分别降低29.95%(P<0.05),46.19%(P<0.01)和34.52%(P<0.05)。添加1.0%的中草药渣组与对照组比较,肠道内乳酸杆菌、双歧杆菌数分别增加47.33%(P<0.05)和83.95%(P<0.01),大肠杆菌、梭菌数分别下降41.35%(P<0.05)和29.93%(P<0.05);血清TP,ALB,GLO含量分别提高13.37%(P<0.05),12.40%(P<0.05)和51.07%(P<0.01),BUN含量降低15.84%(P<0.05),血清GPT,GOT,ALP活性分别提高9.45%(P<0.05),20.10%(P<0.05)和31.85(P<0.05);血清IgG,IgA,C3含量分别提高16.56%(P<0.05),18.31%(P<0.05)和33.33%(P<0.05)。日粮添加中草药渣对血清CHO,TG3,HDL,LDL,VLDL,IgM,C4含量无显著影响(P>0.05)。     

合作猪血清中钙、磷、钠、氯、钾含量的动态变化

采用常规方法对 40 头合作猪(公母各半)1～4 月龄的血清钙、磷、钠、氯、钾的含量进行测定和分析。结果表明:不同月龄的血清无机盐除血清钙、猪血清钾含量月龄间差异不显著(P>0.05)外,其它几种无机盐含量均差异极显著(P<0.01)。血清钠含量在 2月龄时最高,以后呈下降趋势。而血清氯和磷的含量均在 3 月龄时最高,4 月龄显著下降。结果还表明,血清同一无机盐含量在相同月龄不同性别间无显著差异(P>0.05)。     

Dietary supplement of selenium-rich yeast may relieve lipopolysaccharide-induced growth depression in piglets via improving immune and antioxidant status

Selenium protects cells from oxidative damage and reduces lipopolysaccharide （LPS）-induced expression of inflammatory cytokines. Because inflammatory cytokines induce growth depression, we hypothesized that selenium-rich yeast （SeY） would inhibit growth depression caused by LPS. Twenty Meishan weanling pigs [28 （s.d. 2 d）, 7.6 （s.d. 0.3 kg） body weight （BW）] were used in a 2×2 factorial design （n=5）. The main factors were dietary Se sources [selenium-rich yeast （SeY） vs. sodium selenite （SSe）] with supplement level at 0.3 mg Se/kg, and immunological stress （LPS vs. saline）. The experiment lasted for 28 d. On d 14 and d 21, half of pigs in each dietary treatment were intramuscularly injected with either 50 μg/kg BW LPS or an equivalent amount of sterile saline. Blood samples were collected at 3 h post-injection. There were no interactions between dietary Se sources and immunological stress on growth performance. LPS depressed average daily gain （ADG） （d 14-21, P〈0.05; d 21-28, P〈 0.01）, and elevated feed to gain ratio （F/G） （d 21-28, P〈0.05）, while SeY elevated ADG （d 0-14, P〈0.05; d 21-28 and d 0-28, P〈0.01）, and decreased F/G （P〈0.01）. Interactions were observed on interleukin-1β（IL-1β） and interleukin-6 （IL-6） from serum samples of d 14 and d 21 （P〈0.01）, as well as superoxide dismutase （SOD） and insulin like growth factor （IGF-1） of d 21 （P〈0.05）. In conclusion, SeY relieved the growth depression of piglets immunologically stressed by LPS, which maybe resulted from the decreased externalization of inflammatory cytokines and improved antioxidant status.     

无花果RNA的提取和半定量RT-PCR内参基因的优选

本试验以无花果的根、茎、叶、果作为材料,比较了CTAB法和Trizol法对无花果材料RNA的提取效果。以CTAB法提取的不同无花果材料的RNA为模板,反转成cDNA第一链,通过半定量RT-PCR,研究了植物常用内参基因18SrRNA、Actin和Tubulin的表达量变化。结果表明:CTAB法是适合不同无花果材料的RNA提取法;18SrRNA在无花果不同组织中的表达水平较高,且相对稳定,Tubulin在无花果不同组织中相对表达量较低,且相对稳定,是研究无花果不同组织基因表达水平较为适宜的内参基因。     

Effects of cold stress on hypothalamic corticotrophin-releasing and thyrotropin-releasing hormone messenger RNA levels in chickens

There is increasing evidence that stress can activate the hypothalamic-pituitary-adrenal-axis and hypothalamic-pituitary- thyroid-axis,and further affect the synthesis and secretion of corticotrophin-releasing hormone(CRH)and thyrotropin-releasing hormone(TRH).To evaluate the effect of cold stress on the hypothalamic CRH and TRH messenger RNA(mRNA)levels in Yisha chickens,male Yisha chickens were subjected to acute(1,6,12 h)and chronic(5,10,20 d)cold stress(12±1)℃.Hypothalami were collected for assessment of mRNA levels by semi-quantitative RT-PCR.Acute stress resulted in a significant decrease of CRH mRNA levels at 6 and 12 h,and a significant increase of TRH mRNA levels at every stress time point.Chronic cold stress resulted in a significant increase of CRH mRNA levels and a significant decrease of TRH mRNA levels compared with the control group at every stress time point.The results suggest that the two genes differently respond to cold stress at the mRNA levels.And the different degrees of cold stress will produce different effects on the identical gene.     

中药饲料添加剂对断奶仔猪生长性能和内分泌功能的影响

选取胎次相近、日龄相同的杜—长—大哺乳仔猪16窝,随机分为4组,中药Ⅰ、Ⅱ组和抗生素组在相同的基础日粮中分别添加中药饲料添加剂Ⅰ(4 kg.t-1)、中药饲料添加剂Ⅱ(4 kg.t-1)和金霉素(70 g.t-1)+杆菌肽锌(30 g.t-1),对照组仔猪只饲喂基础日粮.于仔猪断奶前3 d,断奶后1、4、7、14、28 d采血,对血液部分激素指标进行分析,研究中药饲料添加剂对断奶仔猪生长性能和内分泌功能的影响.结果表明:(1)2个中药组仔猪日增重提高,料重比和腹泻率降低.(2)断奶后1 d,各组仔猪血清皮质醇含量与断奶前相比升高,而三碘甲腺原氨酸(T3)和甲状腺素(T4)含量较断奶前降低;整个试验期间,2个中药组血清皮质醇含量始终较抗生素组和对照组低,T3、T4含量始终高于抗生素和对照组.可见,中药饲料添加剂能有效地防止早期断奶仔猪发生腹泻,降低仔猪血清皮质醇含量,提高T3、T4的含量,缓解仔猪应激,改善仔猪的生长性能.