Cloning and Selective Toxicant-induced Expression of BMR1 and BMR3, Novel ABC Transporter Genes in Botrytis cinerea

Two genes, BMR1 and BMR3, encoding new members of the ABC superfamily in Botrytis cinerea, were cloned and characterized. The topologies of the encoded proteins, BMR1 and BMR3, were both (NBF-TMD₆)₂, similar to most of the toxicant-efflux ABC transporters. These genes had different induced expression patterns after treatment with various toxicants, suggesting they may have different roles in toxicant-resistance. Received 24 September 2002/ Accepted in revised form 2 December 2002     

Modulators of membrane drug transporters potentiate the activity of the DMI fungicide oxpoconazole against Botrytis cinerea

Modulators known to reduce multidrug resistance in tumour cells were tested for their potency to synergize the fungitoxic activity of the fungicide oxpoconazole, a sterol demethylation inhibitor (DMI), against Botrytis cinerea Pers. Chlorpromazine, a phenothiazine compound known as a calmodulin antagonist, appeared the most potent compound. Tacrolimus, a macrolide compound with immunosuppressive activity, was also active. The synergism of chlorpromazine negatively correlated with the sensitivity of the parent strain and mutants of B. cinerea. The synergism was highest in a mutant that overexpressed the ATP-binding cassette transporter BcatrD, known to transport DMI fungicides such as oxpoconazole. The synergism of chlorpromazine positively correlated with its potency to enhance the accumulation of oxpoconazole in BcatrD mutants. These results indicate that chlorpromazine is a modulator of BcatrD activity in B. cinerea and suggest that mixtures of DMI fungicides with modulators may represent a perspective for the development of new resistance management strategies.     

Inhibition of Methionine Biosynthesis in Botrytis cinerea by the Anilinopyrimidine Fungicide Pyrimethanil

When mycelium of Botrytis cinerea was treated with low concentrations of the anilinopyrimidine fungicide pyrimethanil the total amount of free amino acids increased. Qualitative variations were also induced: alanine, glutamine, lysine, glycine, histidine, asparagine, arginine, threonine and moreover, α-aminobutyrate and β-alanine were accumulated; cyst(e)ine, valine, leucine and citrulline were reduced. When mycelium of B. cinerea was incubated with Na₂[³⁵S]O₄, pyrimethanil at 1·5 μM induced a decrease of [³⁵S]methionine and simultaneously an increase of [³⁵S]cystathionine. These data indicate that the anilinopyrimidine fungicide pyrimethanil inhibits the biosynthesis of methionine and suggest that the primary target could be the cystathionine β-lyase. © 1997 SCI.     

安徽省番茄灰霉菌抗药性测定和治理

测定了安徽省番茄灰霉病菌对多菌灵、腐霉利、乙霉威的抗性。结果表明,田间有B_SD_SN_S、B_SD_SN_LR、B_SD_SN_HR、B_HRD_SN_S、B_MRD_LRN_S、B_HRD_LRN_S、B_HRD_LRN_LR7种抗性类型,对多菌灵、腐霉利、乙霉威具有抗性的菌株分别占试验总菌株数的28.3%、20%和73.3%。     

药用植物提取物对草莓灰霉病菌抑菌活性研究

用丙酮为溶剂提取7种药用植物材料粉末,得到提取物母液。采用生长速率法和叶片离体接菌法测试提取物对草莓灰霉病菌的室内抑菌作用。在供试的7种植物材料中,五味子对菌丝生长的抑制率最高,达到95.65%,其次为薏苡,抑菌率为91.30%,决明、酸浆的抑菌率均达到了85%以上。结合叶片离体接菌法的试验结果,认为五味子和酸浆可以作为重点进行深入研究。     

7种植物精油对番茄灰霉病的抑制效果

以番茄灰霉病菌为供试对象,系统测试了香茅油、柠檬草油、樟油、黄樟油、天然冬青油、山苍子油、肉桂油等7种植物精油的抑菌效果。结果表明:7种精油中,樟油和肉桂油对番茄灰霉病的抑制效果较好。离体活性测试中,樟油和肉桂油对番茄灰霉病菌菌丝生长抑制作用的EC50分别为126.6205mg/L和128.1587mg/L,对孢子萌发的EC₅₀分别为181.8763mg/L和228.5453mg/L;活体组织法测试表明,2种精油对番茄灰霉病具有较好的保护效果,在500mg/L浓度下,黄瓜子叶法防效均达100%,果实针刺法防效分别为52.42%和50.48%;盆栽试验表明两者在2000mg/L时,对番茄灰霉病的防效分别为59.65%和61.40%。     

灰霉菌的抗药性与适合度测定

室内监测了北京、沈阳、保定等地区番茄灰霉菌 (Botrytis cinerea)对不同杀菌剂的抗药性 ,发现抗多菌灵菌株占监测总数的 74 .6 7% ,抗乙霉威菌株占 2 5.82 % ,还监测到 3株抗多菌灵、乙霉威菌株——即双抗菌株 ;利用菌落直径法和番茄叶片法测定了 3种抗药类型的番茄灰霉菌在离体和活体条件下的适合度 ,结果表明 ,不同抗药类型菌株在生长速率、致病力、繁殖力等方面差异不明显。     

武夷菌素对番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)的作用方式

 借助光镜和透射电镜观察了武夷菌素对番茄灰霉菌菌丝生长和分生孢子萌发的形态影响,结果表明,武夷菌素处理的菌丝异常生长,分生孢子萌发的芽管膨大缢缩,菌丝体内液泡增多;武夷菌素能引起菌丝细胞膜透性的变化,造成液体培养基电导率增加;同位素标记的¹⁴C-谷氨酸、³H-葡糖胺和³H-腺嘌呤掺入实验表明,武夷菌素能抑制菌丝蛋白质的合成,对细胞壁几丁质和核酸的合成没有影响。     

喜树碱对番茄灰霉病菌的病理反应

以番茄灰霉病菌为供试菌种,采用电导率法、吸光度法和电镜分析法对经过喜树碱（CPT）处理的番茄灰霉病菌进行病理反应研究。试验结果表明经200 mg/L CPT溶液处理后,番茄灰霉病菌菌丝细胞膜的通透性增加了30.7%,细胞外蛋白质浓度提高了13.5%。番茄灰霉病菌经CPT溶液处理后,还原糖和可溶性蛋白的含量随着处理时间的增长先升高后降低最后趋于平缓,在0～1 h之间增长最快。CPT处理后的番茄灰霉病菌的菌丝畸形,出现膨大或缢缩,菌丝生长点缢缩,细胞中的空腔增多,线粒体增多且线粒体嵴变得模糊,细胞核有降解的现象。     

北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性检测

为了检测北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性,指导生产上科学用药,从北京12个区、县采集番茄灰霉病样150份,分离纯化获得109个番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的单孢菌株,采用菌丝生长速率法测定了番茄灰霉病菌对嘧霉胺(pyrimethanil)的抗药性。所测菌株中嘧霉胺抗性菌株出现的比例高达82.57%,且以高抗菌株为主,占78.89%,抗性水平最高的菌株EC50是最敏感菌株的5 096倍;不同区县番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性存在差异,门头沟区、密云县、延庆县、怀柔区和平谷区、大兴、通州和顺义8个区县的高抗菌株所占比例达66.67%～100%,海淀、朝阳和房山3个区未检测到高抗菌株。上述结果说明北京地区番茄灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性非常普遍,且以高抗菌株为主,生产上应替换新型杀菌剂防治番茄灰霉病。     

酵母挥发性物质环辛四烯抑制灰霉菌的研究

为了探明生防酵母菌菌株C410产生的挥发性物质对灰霉菌的抑制作用机理,本文以挥发性物质的主要成分之一环辛四烯为研究对象,测定其对灰霉菌的糖、蛋白、DNA、RNA、细胞的形态及细胞膜通透性的影响。结果表明,在16.5μL/L环辛四烯的作用下,灰霉菌生长速率显著降低,总糖含量基本不变;还原糖含量显著降低;蛋白含量变化不显著;RNA的完整性显著降低。在49.5μL/L环辛四烯的作用下,灰霉菌的生长几乎完全停止,但细胞通透性不受影响,不导致细胞死亡。环辛四烯孵育下灰霉菌DNA分子没有被打断。由此推测还原糖和RNA代谢过程是环辛四烯作用于灰霉菌的重要靶标,抑制其生长及侵染。     

我国葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性测定

灰霉病是葡萄生产上的重要病害之一,严重影响葡萄果实的品质和产量。为明确葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感性,本研究分别采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了四霉素和啶酰菌胺对采自云南省宾川县、湖北省武汉市和辽宁省北镇市60株葡萄灰霉病菌的有效抑制中浓度EC₅₀,建立了敏感性基线,并分析了二者之间的交互抗性。结果显示,葡萄灰霉病菌对四霉素和啶酰菌胺的敏感基线分别为0.245和1.115 μg/mL;上述葡萄灰霉病菌均对四霉素敏感,而11.7%的菌株表现为啶酰菌胺抗性。并且四霉素与啶酰菌胺之间不存在交互抗性(r=-0.040,P>0.05)。因此,四霉素可作为防治葡萄灰霉病的候选药剂,研究结果对两种杀菌剂的科学使用以及葡萄灰霉病的可持续防控具有重要的理论和实践意义。     

硼抑制灰霉病菌孢子萌发机制的初步研究

 本文研究了硼对灰霉病菌孢子萌发的影响并对其抑制机理作了进一步的分析。用0.1%硼处理灰霉病菌孢子后,显著地抑制了孢子萌发和芽管伸长。与不处理的对照相比,0.1%硼使灰霉病菌孢子细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性逐渐下降,还原型谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸(ASA)含量逐渐降低,丙二醛(MDA)、过氧化氢(H₂O₂)含量和超氧阴离子(O₂^·)产生速率上升。此外,DCHF-DA荧光染色结果也进一步证明硼处理造成了灰霉病菌孢子细胞内活性氧的积累。本试验结果初步表明,0.1%硼处理使细胞内活性氧清除系统破坏,膜脂过氧化作用加强,是抑制灰霉病菌孢子萌发和芽管伸长的重要原因。     

辽宁省蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺的抗药性

2006年从辽宁省不同地区采集蔬菜灰霉病果或病叶,经分离共获得灰霉病菌株86株。采用菌丝生长速率法测定了其对嘧霉胺的敏感性。试验结果表明,灰霉病菌对嘧霉胺产生中等水平抗药性,抗性频率为17.41%。经紫外、药剂联合诱导获得了高抗菌株,抗性倍数最高达62.78倍。嘧霉胺与多菌灵和腐霉利间不存在交互抗药性,苯胺基嘧啶类杀菌剂之间存在交互抗性。野生抗性菌株具有较好的遗传稳定性,连续转接9次后抗药性无明显下降。不同菌株的菌丝生长速度、鲜重和产孢量存在明显差异,但该差异与灰霉病菌对嘧霉胺的敏感性无相关性。     

山西省蔬菜灰霉病菌营养体亲和性及菌丝融合群的初步研究

 采用对峙培养和显微观察方法,对采自山西晋中、运城、临汾、长治、大同等5个地区的92个灰霉病菌单孢菌株进行了营养体亲和力测定。结果表明:供试的92个菌株,根据其营养体亲和性初步划分为7个不同的菌丝融合群(AG1、AG2、AG3、AG4、AG5、AG6、AG7),而且不同地区融合菌群的分布存在一定差异。晋中分布有4种类型(AG1、AG2、AG3、AG4),运城3种(AG1、AG3、AG5),临汾4种(AG1、AG2、AG3、AG6),长治4种(AG1、AG2、AG5、AG7),大同3种(AG2、AG3、AG6),其中AG2分布最广、数量最多,为山西境内分布的灰葡萄孢菌的优势菌群。     

Distribution of the Consensus Sequences of ABC Transporter Gene among Several Taxonomically Distinct Phytopathogenic Fungi

The distribution of ABC (ATP-binding cassette) transporter genes among several taxonomically distinct phytopathogenic fungi was investigated by Southern blot hybridization, polymerase chain reaction assays and partial sequencing. Consensus sequences of the ABC transporter gene, which might be concerned with multidrug resistance against fungicides and with pathogenicity in phytopathogenic fungi, were found in all of the examined phytopathogenic fungi, which belonged to the Mastigomycotina, Ascomycotina, Basidiomycotina and Deuteromycotina. Received 24 August 2000/ Accepted in revised form 5 December 2000     

灰葡萄孢抗二甲酰亚胺类杀菌剂研究进展

综述了灰葡萄孢对二甲酰亚胺类杀菌剂抗性的产生及现状,抗性菌株的生物学特性、生理生化特性以及抗药性机制,并就灰葡萄孢对二甲酰亚胺类杀菌剂抗性研究进行了展望。     

不同抗性型灰葡萄孢菌Botrytis cinerea对不同作用机制杀菌剂的敏感性研究

不同类型杀菌剂对灰葡萄孢菌菌株的离体、活体毒力测定结果表明 ,苯并咪唑类的多菌灵、甲基硫菌灵之间 ,二甲酰亚胺类的腐霉利、异菌脲、菌核净之间表现交互抗性 ;苯并咪唑类和 N -苯氨基甲酸酯类乙霉威表现有负交互抗性趋势。离体测定中 ,对不同类型菌株以吡咯类杀菌剂咯菌腈 (EC50 200mg/ L) ,咯菌腈以及甾醇抑制剂戊唑醇、氟硅唑和丙环唑均表现出较高的活性。     

河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性

 为明确河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性,2013-2016年,采用菌丝生长速率法测定了采自河北省八个地区的2 425株灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性。2013-2016年监测数据显示,河北省设施番茄灰霉病菌对啶酰菌胺和咯菌腈的敏感性呈下降趋势。2016年从河北省不同地区采集的番茄灰霉病菌对啶酰菌胺具有相似的敏感性,且对啶酰菌胺产生了低水平的抗性,仅在唐山地区检测到了啶酰菌胺的高抗菌株;而不同地区采集的灰霉病菌对咯菌腈的敏感性具有差异,但均为咯菌腈的敏感菌株。因此,啶酰菌胺和咯菌腈仍可用于番茄灰霉病的防治,但应严格控制其使用频率,监测灰霉病菌对其敏感性变化动态。