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[目的]建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[方法]对改良CTAB法进行进一步简化,不需要进行沉淀、洗涤、溶解和RNA消化等步骤,建立一种快速提取玉米基因组DNA的方法。[结果]该方法获得的DNA完整性及PCR扩增效果与试剂盒提取方法相比无明显差异;经过对样品ELISA检验可知,该方法得到的DNA用于PCR检测结果准确。[结论]该方法能够满足转基因玉米PCR检测中快速、高效、准确、高通量的要求。 相似文献
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微量DNA提取法是目前以PCR法鉴定转基因番茄植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法.该方法需约1 h即可完成植物DNA的提取,样品用量仅为30-100mg,产量可达30-80μg/g,粗提DNA(溶于10μlTE缓冲液)不必经过纯化,用TE缓冲液稀释5-10倍即可直接用于PCR分析. 相似文献
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以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法 总被引:25,自引:2,他引:25
报道了将Dr Marc Zabeau的AFLP技术中的DNA提取方法用于以PCR技术鉴定转基因植物-拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约1h可完成植物DNA的提取,样品用量仅为30 ̄100mg,产量可达30 ̄80μg/g。粗提DNA(溶于10μL TE缓冲液)不必经过纯化,用TE缓冲液稀释5 ̄10倍即可直接用于PCR分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以PCR法鉴定转基因植 相似文献
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以PCR鉴定转基因植株的微量DNA提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了将DrMarcZabeau的AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymor-phism)技术中的DNA提取方法用于以PCR(PolymeraseChainReaction)技术鉴定转基因植物——拟南芥、烟草和芜菁中。该方法需约1h可完成植物DNA的提取,样品用量仅为30~100mg,产量可达30~80μg/g.粗提DNA(溶于10μLTE缓冲液)不必经过纯化,用TE缓冲液稀释5~10倍即可直接用于PCR分析。在拟南芥、烟草和芜菁转基因植物鉴定中应用表明这一方法是目前以PCR法鉴定转基因植株T1代单株幼苗的一种简便、快速、有效的方法。 相似文献
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利用复合PCR结合DNA芯片的方法进行快速转基因事件检测 总被引:1,自引:0,他引:1
以我国批准进口用作加工原料的6种转基因玉米为材料,根据其外源基因、载体构建及插入位点,应用6对特异性引物及35S、NOS引物,设计并优化了复合PCR反应体系,对其进行转基因成分检测.同时尝试利用复合PCR与DNA芯片相结合,对不同转基因玉米混合样品进行检测,探索建立转基因事件快速检测和确认方法. 相似文献
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[目的]建立一种快速筛选转基因水稻的DNA提取方法。[方法]对试剂盒法和快速法2种DNA提取方法进行比较,并分别用转Ta NADP-ME1和Ta NADP-ME2基因的转基因水稻进行验证。[结果]用快速法提取得到的DNA进行PCR扩增,可分别得到约1 700 bp的Ta NADP-ME2基因和约1 900 bp的Ta NADP-ME1基因,且条带清晰明亮,与试剂盒法相比无显著差异。[结论]该研究中快速提取DNA的方法经济、简便、快捷,适合用于对大量转基因样品进行检测。 相似文献
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抗除草剂转基因玉米研究 总被引:9,自引:0,他引:9
本研究选用了6种培养基配方对6种不同的玉米(Zea mays L.)基因型材料进行了组织培养实验,筛选出YD这一优良基本培养基配方,再用这一基本培养基对23份玉米材料进行组织培养分析,从中选出了18-599红等9份优良玉米材料。最后用18-599红作为受体,通过基因枪法导入了外源bar基因,转化后的愈伤组织经过在含bialaphos浓度(PPT)为6、10、15mg/L的选择培养基中筛选3轮后,得到长大成活植株75株,结实收获植株8株。PCR鉴定结果表明,bar基因已整合到玉米基因组中。 相似文献
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玉米基因组DNA快速提取方法 总被引:4,自引:0,他引:4
探讨了用NaOH裂解法从玉米单子粒胚乳中和用十二烷基肌氨酸钠法从玉米叶片中快速提取基因组DNA的方法,分析了2种方法提取的基因组DNA的效果及应用价值.结果表明,虽然得到的DNA质量基本一致,都可用于玉米品种纯度检验和分子标记辅助选择,但优化的、从叶片中快速提取的基因组DNA可长期保存,并用于多种后续序列分析工作. 相似文献
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CaM与ZmCCaMK相互作用参与BR诱导的玉米叶片抗氧化防护 总被引:1,自引:0,他引:1
以玉米(Zea mays L.)为材料,通过酶联免疫法、实时荧光定量PCR技术、免疫共沉淀激酶反应以及原生质体瞬时表达体系等方法研究了在油菜素内酯(Brassinosteroids,BR)诱导的玉米叶片抗氧化防护过程中钙调素(Calmodulin,Ca M)的作用以及Ca M和Ca2+/Ca M依赖的蛋白激酶(Zm CCa MK)之间的关系。结果显示:外源BR处理显著提高了玉米叶片叶肉细胞原生质体中的Ca M含量,Ca M拮抗剂的预处理几乎完全抑制了BR诱导的抗氧化防护酶活性,表明Ca M参与了BR诱导的抗氧化防护。而且Zm CCa MK原生质体瞬时表达及瞬时沉默结果显示Zm CCa MK影响BR诱导的Ca M含量,Ca M拮抗剂的预处理也显著抑制了BR诱导的H2O2的产生、Zm CCa MK基因表达以及激酶活性。说明BR诱导产生的Ca M增强H2O2的积累,进一步诱导抗氧化防护酶活性增加,并且Ca M和Zm CCa MK之间存在互动机制。 相似文献
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农杆菌介导bar基因转化玉米幼胚的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
通过农杆菌介导法,采用抗除草剂基因(bar)转化3个玉米自交系的幼胚,并对遗传转化影响因素进行优化。结果表明,2,4-D浓度为2 mg·L-1时,胚性愈伤组织诱导率较高;农杆菌最佳的侵染时间为20 min;乙酰丁香酮(AS)明显提高了幼胚的GUS瞬时表达频率,适宜浓度为200μmol·L-1;温和选择方法适于幼胚转化,不定芽诱导培养基、芽伸长培养基和生根培养基中潮霉素的浓度分别为8、6、2 mg.L-1;获得7株PCR检测以及除草剂抗性试验阳性植株。 相似文献
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46个玉米自交系耐深播特性分析 总被引:4,自引:0,他引:4
深播是玉米苗期避旱的重要途径之一,研究玉米种质资源的耐深播特性对于选育耐深播品种具有重要意义。该研究在播深10 cm条件下,对46份玉米自交系的根茎长、胚芽鞘长、根茎与胚芽鞘总长、出苗率进行了鉴定评价和相关分析。结果表明:4个性状变异程度不同,其中出苗率变异最大,根茎与胚芽鞘总长变异最小;性状间存在着不同的相关性,其中根茎长与出苗率呈显著正相关,而根茎与胚芽鞘长之和与出苗率呈极显著正相关。通过鉴定,筛选出了一批耐深播性强的玉米自交系,能为玉米耐深播种质筛选和改良提供依据。 相似文献
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玉米八个产量相关性状的QTL鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
以玉米优良自交系‘农系531’和‘SIL8’为亲本构建200个F2:3家系,利用复合区间作图法对8个产量性状进行QTL鉴定。8个性状共检测到34个QTL,单个QTL的表型贡献率为5.21%~26.62%不等,累计解释各个性状的表型变异为21.33%~74.10%。分布于第1、3、4、5、6染色体上16个QTL形成6个QTL富集区,且表型贡献率最大的QTL均位于富集区内。共检测到26对上位性互作,其中QTL间互作1对,QTL与背景间互作8对,背景间互作17对,所解释的表型变异为5.98%~15.93%不等,累计解释各性状的表型变异为15.93%~61.64%。多数产量相关性状的遗传基础非常复杂,上位性在产量相关性状形成的遗传控制中具有重要的作用。QTL富集区对于数量性状的遗传分析与作物遗传改良具有重要意义。 相似文献
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建立了一种可同时检测9种转基因玉米(Zea mays L.)的可视化膜芯片检测方法。该方法利用紫外交联技术,将9种转基因玉米特异性探针及内源性玉米醇溶蛋白基因(Zein)探针和杂交质控探针固定于尼龙膜表面制成检测芯片。通过多重PCR同时扩增多重靶标片段,生物素化产物与检测芯片杂交。阳性结果由链酶亲和素-碱性磷酸酶及显色底物NBT/BCIP的显色反应在芯片表面形成裸眼可见的点。应用商业化转基因玉米(Bt176、Bt11、MON810、GA21、T25、TC1507、DAS-59122、NK603、MIR604)、转基因棉花(MON1445、MON15985)、转基因大豆及非转基因材料检验了芯片的性能,结果表明,制备的检测芯片具有良好的特异性和重复性,检测限为0.5%。芯片鉴定结果与PCR产物测序结果一致。 相似文献