一起朱鹮雏鸟新城疫的诊治

2018年5月,陕西省珍稀野生动物救护基地突然有10只人工育雏的朱鹮雏鸟在短暂厌食后相继死亡,经病理剖检及实验室病原检测诊断为新城疫.剩余18只朱鹮雏鸟经检测12只新城疫阳性,后经抗NDV异源高免血清治疗和新城疫疫苗紧急免疫后,16只雏鸟成活.朱鹮感染新城疫偶有报道,但尚无成功治愈的案例.这次朱鹮雏鸟新城疫的诊治为今后...     

鹅源新城疫病毒油乳剂灭活苗的研制

鹅源新城疫是近几年来流行于鹅群中的具有高度病死率的一种病毒性疾病。本试验采用分离纯化后的两株鹅源新城疫病毒株制作成油乳剂灭活疫苗,用17日龄的五龙鹅进行免疫保护试验,同时使用市售NDV油乳剂灭活苗和LaSota疫苗株做对比试验,结果显示鹅源NDV油乳剂灭活苗对鹅群的保护作用最好。     

经鸡胚感染的ALV-J对新城疫弱毒疫苗免疫的抑制作用及疫苗株对病毒载量的影响

为了解经鸡胚感染携带J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的雏鸡体内ALV-J对新城疫(ND)弱毒疫苗(La Sota株)免疫的抑制作用以及疫苗免疫后增强ALV-J对雏鸡致病作用的可能性,随机选择50个SPF鸡胚经卵黄囊接种模拟ALV-J感染,同时选取等量SPF鸡胚以相同方式接种PBS作为对照。出雏后于接毒组和对照组各取20只SPF鸡在7日龄时免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)。2～6周龄时,记录各组鸡的体重和免疫器官指数,并对雏鸡的NDV抗体水平和血液ALV-J病毒载量进行动态检测。结果显示,感染ALV-J的SPF鸡5、6周龄时体重显著低于PBS对照组(P0.05),而感染ALV-J再免疫新城疫弱毒疫苗后SPF鸡体重进一步降低(P0.05);与PBS对照组相比,6周龄时感染ALV-J的SPF雏鸡胸腺萎缩和脾脏肿大(P0.05),免疫新城疫弱毒疫苗后胸腺和脾脏损伤加剧(P0.05);3、4周龄时感染ALV-J再免疫ND弱毒疫苗组的雏鸡NDV抗体水平极显著低于仅免疫ND弱毒疫苗组(P0.01);4周龄时免疫弱毒疫苗后的SPF鸡血液中ALV-J病毒载量高于未免疫组(P0.01)。研究表明,感染ALV-J的雏鸡在免疫ND弱毒疫苗(La Sota株)后增强了ALV-J对SPF雏鸡的致病作用,提示净化种源的重要性。     

贵州省鸭源新城疫病毒强毒株的遗传变异分析及致病性研究

为了科学理解家鸭在新城疫病毒(NDV)流行和传播中的作用,对贵州不同地区分离的5株鸭源NDV强毒株进行遗传变异分析以及对鸭和SPF鸡的致病性研究。结果显示:5株NDV分离株均属于基因Ⅶd亚型,其F蛋白裂解位点基序均为112 RRQKRF117,符合强毒株序列特征,与病毒致病性指数测定结果相符;F和HN蛋白中功能性氨基酸位点均高度保守,但在HN蛋白线性表位区有3株发生E347K突变。交叉血凝抑制试验发现分离株与传统疫苗株LaSota的抗原同源性较低(为83.3%~87.0%),而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性较高(为93.5%~100%)。将5株NDV分离株以0.5mL病毒尿囊液原液通过肌肉注射感染鸭后未见明显发病死亡和病理变化,并且除脾外在其他多个组织脏器未能检测到病毒复制;而以106.0 ELD50·0.1mL-1剂量通过滴鼻点眼感染SPF鸡后6d内100%发病死亡,病死鸡表现出新城疫典型的临床症状和病理变化,病毒在多个组织脏器中均能复制且对脾、胸腺和法氏囊等免疫器官损伤严重。另外,SPF鸡攻毒后喉头和泄殖腔棉拭病毒分离率明显高于试验鸭。本研究结果表明,贵州省鸭群中流行的基因Ⅶd亚型NDV强毒株HN蛋白发生E347K突变的变异株呈上升趋势,并与传统疫苗株产生抗原差异;5株鸭源NDV强毒株对鸭和鸡致病性差异显著,虽然对鸭无明显致病性,但鸭感染后可在较长时间内通过喉头或泄殖腔向体外排毒,因此必须采取有效措施防止NDV强毒由鸭群向鸡群的传播。     

禽网状内皮增生病病毒对不同日龄SPF鸡的致病性比较

本研究拟通过禽网状内皮增生病病毒(REV)分子克隆化病毒REV-C99株对1、8日龄SPF鸡的致病性比较,探讨REV的致病性与感染日龄的关系。在1、8日龄SPF鸡,分别腹腔注射REV-C99株1000个TCID50.只-1,以新城疫病毒(NDV)灭活疫苗免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较了REV对不同日龄SPF鸡的致病性。结果表明,与对照组相比,1日龄SPF鸡感染REV后,即使经过NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度仍然差异显著(P0.05);而8日龄SPF鸡感染REV后则随着感染时间的延长以及NDV灭活疫苗的二次、三次免疫,对NDV的HI抗体滴度差异不显著(P0.05)。本研究表明,REV感染1日龄SPF鸡可显著抑制对NDV灭活疫苗免疫后的体液免疫反应,并且这种免疫抑制作用可持续至4个月;而8日龄SPF鸡感染REV后更多表现为一过性的致病作用。显然,REV的致病性对雏鸡感染日龄具有很强的依赖性,从而揭示出控制REV早期感染的重要性并具有现实意义。     

一株鹅副粘病毒I型野毒株的分离及其致病性测定

用SPF鸡胚从江苏省某一患病鹅群的肝、脾混合病料组织悬液中分离到一株病毒,该毒株能凝集(HA)鸡红细胞(RBC),HA为26,并可被康复鹅血清、抗鸡新城疫(NDV)阳性血清、抗鸽NDV阳性血清所抑制,而不能被禽流感(H5、H9)标准阳性血清抑制。人工感染易感雏鹅,引起100%的发病和死亡,并有与自然病例相似的症状和病变;人工感染42日龄SPF鸡出现100%的发病和死亡。对该分离株作致病性测定,按照国际上规定的NDV毒力型判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间(MDT)为39h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.6,6周龄雏鸡静脉接种致病指数(ICPI)为2.67。试验结果表明,该分离株为强毒力型禽副粘病毒I型(MPV-1),命名为鹅副粘病毒I型(GPMV-1)HG99株。     

基于新城疫病毒V蛋白鉴别鸡群感染与免疫的间接ELISA方法的建立

本研究以新城疫病毒(NDV)V蛋白羧基端结构域(Vc)的重组蛋白为包被抗原,建立了用于检测NDV V蛋白抗体的间接ELISA方法,并采用该方法检测了鸡群免疫或接毒后血清中的V蛋白抗体水平。结果显示:两组不同NDV灭活疫苗组在免疫后的3周内检测结果均为阴性;两组灭活疫苗免疫3周后再人工感染NDV强毒的鸡群,攻毒后第7、14和21 d,NDV阳性率分别为60%、80%、70%和50%、80%、70%;两组不同的NDV弱毒疫苗免疫组鸡群,仅在免疫后第21 d阳性率分别为20%和10%。以上结果表明,NDV疫苗免疫组与强毒感染组的V蛋白抗体阳性率存在明显差异,本方法可在群体水平上区分新城疫疫苗免疫与强毒感染鸡群,为NDV血清学诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。     

一株鹅副粘病毒Ⅰ型野毒株的分离及其致病性测定

用SPF鸡胚从江苏省某一患病鹅群的肝、脾混合病料组织悬液中分离到一株病毒，该毒株能凝集(HA)鸡红细胞(RBC)，HA为2^6，并可被康复鹅血清、抗鸡新城疫(NDV)阳性血清、抗鸽NDV阳性血清所抑制，而不能被禽流感(H5、H9)标准阳性血清抑制。人工感染易感雏鹅，引起100％的发病和死亡，并有与自然病例相似的症状和病变；人工感染42日龄SPF鸡出现100％的发病和死亡。对该分离株作致病性测定，按照国际上规定的NDV毒力型判定标准，测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间(MDT)为39h，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1．6，6周龄雏鸡静脉接种致病指数(ICPI)为2．67。试验结果表明，该分离株为强毒力型禽副粘病毒Ⅰ型(MPV-1)，命名为鹅副粘病毒Ⅰ型(GPMV-1)HC99株。     

野生水禽源ClassⅠ新城疫病毒对SPF鸡的致病性研究

为了科学地了解新城疫病毒(NDV)的遗传进化规律,本研究对从鹭科候鸟分离的NDV毒株SD22/13的生物学特性和致病特性进行了研究。通过致病性指数测定和交叉血凝抑制试验测定分离株SD22/13的毒力及与LaSota疫苗株、基因Ⅶ型NDV毒株的抗原相关性,同时设计引物对F基因进行克隆测序和遗传进化分析,并对其在SPF鸡上的致病性进行评价。生物学特性和遗传进化分析显示SD22/13属于ClassⅠ分支基因3型,与LaSota疫苗株的抗原相关性为56.1%,与基因Ⅶ型强毒株的抗原相关性低于50%。致病性试验结果表明该毒株可在鸡体内较好复制,并刺激机体产生较高水平血清抗体,鸡的免疫器官和肾虽均有轻微的病理损伤,但无发病死亡,对试验鸡致病性较低;SD22/13感染后30d,再以基因Ⅶ型强毒株攻毒,在10d观察期内SD22/13感染组鸡均健康,无发病死亡,而对照组鸡至第5天时全部死亡。本研究结果表明分离株SD22/13在生物学特性、抗原性和对SPF鸡致病性方面与基因Ⅶ型NDV存在明显差异;虽然SD22/13与基因Ⅶ强毒株抗原相关性较低,不能阻止其排毒,却能完全保护鸡抵抗强毒株的攻击。     

福州周边地区鸭场新城疫抗体检测与分析

正鸭新城疫(ND)是由禽副黏病毒Ⅰ型感染引起鸭的一种传染病,又称鸭副黏病毒病。患鸭的主要症状为急性水样腹泻、两脚无力或瘫痪、呼吸困难及母鸭产蛋下降。近年来,由鸭源新城疫病毒(NDV)引起的鸭临床发病、死亡、生产性能下降的病例日趋增多,对养鸭业危害严重[1]。吴峻华[2]对福州市部分鸭场530份血清样品进行新城疫抗体检测,检测出阳性血清152份,阳性率达28.7%,在未免疫新城疫疫苗情     

病毒样颗粒疫苗可能用于控制鸡新城疫

正韩国建国大学的科研人员应用昆虫细胞表达系统研制出表达新城疫病毒(NDV)F蛋白和流感病毒M1蛋白的NDV病毒样颗粒(VLP)。SPF鸡分别免疫含不同剂量VLP(0.8、4、20、100μg/mL)的NDV VLP油乳剂疫苗。免疫3周后,应用商品化ELISA试剂盒检测NDV VLP疫苗的免疫力;同时用NDV强毒株进行攻毒试验以评估NDV VLP疫苗对SPF鸡的保护效果。结果显示,NDV VLP疫苗免疫后可产生大量抗NDV的抗体,且SPF鸡对NDV强毒株的抵抗力与NDV VLP疫苗免疫剂量相关。尽管含0.8、4μg/mL VLP的NDV VLP疫苗不能     

NDV基因Ⅶ型DNA纳米颗粒疫苗初探

本研究利用PCR方法扩增新城疫病毒(NDV)rGM株的F基因,并将其克隆至真核表达载体pCAGGS,构建重组表达质粒pCAGGS-F。采用离子交联法将壳聚糖、MgSO4、pCAGGS-F以及三聚磷酸钠(TPP)混合,制备成新城疫DNA纳米颗粒疫苗。IFA试验检测结果表明,F重组蛋白成功表达。制备的纳米颗粒疫苗通过点眼滴鼻免疫2周龄SPF鸡2次后,对10³ EID₅₀ NDV强毒株rGM保护率可达100%。此试验为新城疫DNA纳米疫苗等的研制奠定基础。     

新城疫强毒株的分离鉴定与生物学特性的研究

2010年初山东省某肉种鸡场发病,产蛋率降低50%左右.取病料进行10日龄SPF鸡胚接种试验分离到一株病毒.该病毒HA试验具有血凝性,经NDV和AIV-H5、AIV-H9单因子阳性血清HI试验,分离株能被NDV La Sota株阳性血清中和,动物回归试验鸡出现典型的新城疫症状,证明是新城疫病毒.进行MDT、ICPI和IVPI等毒力学指标测定,结果表明,分离株的MDT为52 h;ICPI为2;IVPI为2.6.证明该毒株为新城疫强毒株.     

一株新城疫强毒株的分离鉴定

从昌吉市肉种鸡发病鸡群中分离到1株病毒,对其进行了SPF鸡胚接种试验,HA及NDV和AIVH5、H9单因子血清HI试验,动物回归试验,MDTI、CPI和IVPI毒力学指标测定,分离株与NDV Lasota株交叉HI试验,鸡胚半数感染量(EID50)测定。结果表明,分离株的MDT为55 h;ICPI为1.78;IVPI为2.41,第6代病毒EID50为3.98×10-8/0.1 mL。分离株能被NDV La-soda株阳性血清中和,动物回归试验鸡出现典型的新城疫症状。证明该毒株为新城疫强毒株。     

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒(NDV),命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSot a后14 d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10 d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9 d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLYO1攻毒组第5 d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSot a活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100%免疫保护,但不能完全抑制基因Ⅶ NDV分离株在体内的复制和排毒。     

表达新城疫病毒F HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验

目前我国主要使用全病毒灭活苗和弱毒活疫苗免疫接种预防新城疫(ND)，虽然这两种疫苗都能产生较好的保护力，但是也存在一些不可克服的缺陷。因此迫切需要研制新型高效疫苗用于防制该病。国内外很多学者都在进行着ND各种基因工程疫苗的研制，NDV—F、HN基因在多种载体中得到表达并取得了较好的保护效力。本实验室已构建了表达NDV F18E8株F、HN基因的重组疫苗rFPV—F、rFPV—HN。本研究对这两种重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性以及对SPF鸡和商品鸡的免疫保护作用进行了评价。     

新城疫La Sota疫苗对山东分离株的免疫保护试验

用标准疫苗株La Sota活疫苗在隔离器中接种SPF鸡,进行免疫保护试验.免疫后,每7 d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)潍坊毒SGM01、昌乐毒SCL03、东营毒HY、日照毒SRZ03、莘县毒SSX03和标准强度F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照.每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,确定疫苗的保护性.结果表明,La Sota疫苗能对除SGM01和HY以外的病毒攻击的SPF鸡提供较好的保护.     

鸽副韶病毒Ⅰ型灭活疫苗（S-1株）与鸡新城疫灭活疫苗对比试验

鸽副黏病毒Ⅰ型（PPMV-Ⅰ）是鸡新城疫病毒（NDV）的变异株,它不同于典型的NDV,它与NDV是两个不同宿主的适应株。具有NDV相似的特性,病毒表面的血凝素和神经氨酸酶能凝集鸡和某些哺乳动物红细胞,这种凝集作用可被特异性的血清所抑制。这种特异性被应用于血凝抑制试验检测血清中相应的抗体效价,以评价疫苗的免疫效果或疾病的诊断。虽然PPMV-Ⅰ与NDV存在极高的交叉反应,有生产场使用新城疫疫苗预防PPMV-Ⅰ感染,但在生产实践中证实这种免疫效果不够理想。为了比较两种疫苗对未免疫鸽的免疫效果,本实验室进行了鸽副黏病毒Ⅰ型灭活疫苗（S-1株）与鸡新城疫灭活疫苗免疫效力对比试验,现将试验情况总结如下：     

鹅源新城疫病毒的分离及生物学特性研究

取山东某地病死鹅的脑和脾脏常规处理,分别接种11日龄SPF鸡胚和16日龄非免疫鹅胚,从死亡胚的尿囊液中分离到毒株,并对分离株进行了血凝性鉴定、毒力鉴定、动物试验以及疫苗保护试验。结果表明:该毒株具有血凝性,为强毒株,血凝性能被新城疫病毒(NDV)阳性血清所抑制,且其他生物学特性与NDV也有很大的相关性,故将其命名为NDVWF216株。用分离的鹅源新城疫病毒WF216株尿囊液制成油乳剂灭活苗和NDV油乳剂灭活苗均可保护鹅和鸡免受鹅源新城疫强毒的攻击。     

鸽新城疫的诊断及病原分离鉴定

20 0 1年 1 0月中旬 ,江苏某养鸽专业户饲养的 30 0多对美国白羽王肉用鸽 ,部分鸽出现以神经症状和腹泻为主要特征的疫病 ,发病率为 30 %左右 ,死亡率为 2 0 %左右。经临床检查 ,病理剖检 ,初步诊断为鸽新城疫 (ND)。立即对全群鸽用新城疫疫苗紧急接种 ,迅速扑灭了疫情 ,同时从病死鸽体内分离到1株新城疫病毒 (NDV)。1　材料与方法病料 :无菌采集病死鸽脑、肝、肺及提取的气管拭子。血清 :发病鸽血清共 30份 ;ND、EDS阳性血清 ,自制 ;SPF鸡血清 ,由江苏省家禽研究所提供。鸡胚 :1 0日龄非免疫鸡胚 ,从江苏省家禽研究所购进种蛋 ,37℃…