黄酒用脲酶产生菌9043 C_（12）发酵条件和酶学特性的研究

通过对９０４３Ｃ１２菌株培养条件的研究，使其产脲酶活力达２．４Ｕ／ｍＬ，较原活性０．３４Ｕ／ｍＬ提高７．１倍．对该酶的酶学特性进行初步研究表明，尿素对该菌脲酶的生物合成具有显著促进作用，其最适ｐＨ为５．０，最适温度为４２℃；但在含２０％（ｖ／ｖ）乙醇下最适ｐＨ为４．５，最适温度为４６℃，３５℃以下较稳定，酶经６５℃１５ｍｉｎ巴氏消毒完全失活．模拟试验结果表明，２５℃ｐＨ５．０条件下，在含乙醇１６％或２０％（ｖ／ｖ）、尿素３０ｍｇ／Ｌ的模拟酒中，添加１０Ｕ／Ｌ脲酶，可使尿素去除率在３６ｈ内达９０％以上．     

黄酒用脲酶产生菌的分离与选育

从２２批土样中分离到２７０余株能以尿素为唯一氮源的细菌，经变色圈法初筛，摇瓶复筛，获得产脲酶水平较高的菌株９０４３，初步鉴定为肠杆菌属菌。采用紫外线和亚硝基腺进行诱变育种，得到产酶水平为０．３４Ｕ／ｍｌ的脲酶产生菌株９０４３Ｃ１２，模拟酒中应用试验表明，该菌所产脲酶在２５℃，ｐＨ５．０条件下，只需向含乙醇２０％（ｖ／ｖ）和尿素３０ｍｇ／Ｌ的模拟酒中添加６．０Ｕ／Ｌ就可在３６ｈ内使尿素的去除率达９０     

碳氮比及金属离子对9043C12菌株产脲酶的影响

用正交试验方法研究了９０４３Ｃ１２菌株在发酵过程中,以葡萄糖作为碳源时,不同的氮源对产脲酶的影响,以及添加金属离子后脲酶产量的变化,结果表明,尿素对产脲酶的影响最大。最佳的碳氮比例可使酶活提高２倍,达到０．６９Ｕ／ｍＬ。ＭｎＳ４．Ｈ２Ｏ,ＮｉＳＯ４．６Ｈ２Ｏ浓度分别为０．０５ｇ／Ｌ和０．０１ｇ／Ｌ,并地发酵１０小时加入时,对９０４３Ｃ１２菌株产脲酶具有较明显的促进作用,其酶活达到０．３６４／ｍＬdi     

碳氮比及金属离子对9043C12菌株产脲酶的影响

用正交试验方法研究了９０４３Ｃ１２菌株在发酵过程中,以葡萄糖作为碳源时,不同的氮源对产脲酶的影响,以及添加金属离子后脲酶产量的变化．结果表明,尿素对产脲酶的影响最大．最佳的碳氮比例可使酶活提高２倍,达到０．６９Ｕ／ｍＬ．ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ,ＮｉＳＯ４６Ｈ２Ｏ浓度分别为０．０５ｇ／Ｌ和０．０１ｇ／Ｌ,并于发酵１０小时加入时,对９０４３Ｃ１２菌株产脲酶具有较明显的促进作用,其酶活达到０．３６４Ｕ／ｍＬ,为对照的５．２倍．当ＭｎＳＯ４Ｈ２Ｏ浓度为０．１ｇ／Ｌ,ＮｉＳＯ４６Ｈ２Ｏ浓度提高到０．１ｇ／Ｌ时,则对产脲酶有抑制作用．     

黄酒用脲酶产生菌的分离与选育

从２２批土样中分离到２７０余株能以尿素为唯一氮源的细菌，经变色圈法初筛，摇瓶复筛，获得产眠酶水平较高的菌株９０４３，初步鉴定为肠杆菌属菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ．）．采用紫外线和亚硝基胍进行诱变育种，得到产酶水平为０．３４Ｕ／ｍｌ的脲酶产生菌株９０４３Ｃ１２．模拟黄酒中应用试验表明，该菌所产豚酶在２５℃，ｐＨ５．０条件下，只需向含乙醇２０％（ｖ／ｖ）和尿素３０ｍｇ／Ｌ的模拟酒中添加６．０Ｕ／Ｌ就可在３６ｈ内使尿素的去除率达９０％以上．     

产脲酶细菌的固定化及转化条件研究

[目的]研究1株高产脲酶的芽孢杆菌菌体的固定化及其固定化细胞的转化条件。[方法]研究不同浓度海藻酸钠溶液、菌体包埋量、戊二醛溶液对固定化细胞脲酶酶活的影响,以及不同pH值、不同温度、几种离子浓度对脲酶活力的影响。[结果]结果表明,固定化细胞转化最适pH值为7.5,最适温度为40℃,最适海藻酸钠溶液浓度为30 g/L,最佳包埋量为40 g/L,最适戊二醛浓度为2%;细胞经过固定化后,细胞脲酶稳定性显著提高,经过戊二醛交联后,稳定性再次提高。固定化细胞的脲酶对Cu2+、Hg2+的抑制作用有一定的抗性。[结论]固定化细胞比游离细胞更适合工业化操作。     

诱变Y2002L9菌株产酸性脲酶的研究

酸性脲酶产生菌Y2002L2经紫外线（UV）照射，亚硝基胍（NTG）处理，UV－NTG复合诱变及培养条件优化后，酶活可达到2.63u/ml。在pH6.5-7.0、温度30－32℃、尿素浓度为10g/l时产酶活跃。当Ni^ 浓度为0.01％，Mn^ 浓度为0.001％－0.01％时对产脲酶有促进作用。在浓度为0.001％－0.01％范围内Co^2 ，Zn^2 ，Al^3 对产脲酶没有影响，Pb^2 ，Fe^3 ，Ag^ 对产酶有抑制作用，Hg^2 对产酶抑制作用较强。该菌株所产脲酶为胞内酶，经超声波破碎后，用pH6.5，浓度0.05mol/l柠檬酸缓冲液抽提，再用乙醇分级沉淀法可获得粗酶液。     

纳豆芽孢杆菌脲酶酶学性质的研究

为了研究不同的碳源、氮源和不同的培养条件对纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)脲酶产量的影响,以及不同温度、pH和几种金属离子对脲酶活性的影响,采用了滴定法(国标法,标准号GB/T 1356787-1997)和Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定不同碳源、氮源和不同培养条件培养的纳豆芽孢杆菌(CGMCC No.2801)脲酶总活性和浓度,以及不同温度、pH和金属离子条件下的脲酶活性。结果表明,当以谷氨酸为氮源、蔗糖为碳源、pH7、37℃条件下培养12h时脲酶的浓度最高,为57.2μg/mL。脲酶催化反应的最适条件为35℃、pH 7。实验选用的5种金属离子对脲酶活性均有抑制作用,抑制强度为Cu2+Zn2+Fe2+Mg2+Mn2+,最大抑制率为36.4%。这些结果为纳豆芽孢杆菌脲酶的进一步研究及低产氨纳豆芽孢杆菌的构建奠定了基础。     

精氨酸代谢酶对传统黄酒发酵氨基甲酸乙酯产生的调控作用

通过不同处理方法分析传统黄酒在发酵过程中氨基甲酸乙酯产生的代谢规律以及精氨酸代谢酶对氨基甲酸乙酯产生的调控作用,其中对照组不加任何抑制剂,实验组分别加入0.001、0.01和0.2mol/L L-鸟氨酸盐酸盐及150和750U脲酶作为抑制剂.结果表明:L-鸟氨酸盐酸盐和脲酶抑制剂对氨基甲酸乙酯产生的抑制效果良好;尿素和瓜氨酸是氨基甲酸乙酯产生的主要前体物,在黄酒发酵中胞内鸟氨酸氨甲酰基转移酶活性对氨基甲酸乙酯的产生起着抑制作用,然而其具体的调控机制还有待进一步解析.     

碱性脂肪酶产生菌的发酵条件及酶学性质研究

研究1株碱性脂肪酶产生菌L198发酵条件及酶学性质.结果表明,产酶发酵培养基为(;):豆饼粉1.0,玉米浆1.0,葡萄糖1.0,K2HPO4 0.5,NaNO3 0.5.500 mL三角瓶装液50 mL,30℃,180 r/min摇床培养40 h.酶学性质研究:最适反应温度为40℃,最适pH 9.0;在pH 8～10稳定.其热稳定性较好,在20～40℃放置6 h后仍可以保持较好酶活力.金属离子Na+、 K+对酶活有显著激活作用,而Cu2+对酶活有显著抑制作用,而K+、Mg2+、Fe+对酶活有抑制作用.     

腈水合酶产生菌发酵条件的优化及其酶学性质研究

通过腈水合酶生产菌Rhodococcus sp．SHZ-1菌株的发酵过程研究，阐明了发酵液pH、葡萄糖含量以及细胞浓度变化与酶活之间的关系。在发酵过程中调节pH以及补加葡萄糖，使酶活从2294U／mL，增加到5226U／mL，提高了1．28倍。腈水合酶的酶学性质研究表明，温度30℃，反应体系在pH中性范围酶活达到最高。该酶对于底物有很强的耐受性，丙烯腈浓度为7．2％时，酶活最高；产物丙烯酰胺浓度过高，则会严重抑制酶的活性。     

耐热果胶酶产生菌的分离及酶学特性研究

果胶酶是一种用途广泛的酶 ,报道一株耐热性果胶酶产生菌及酶学特性的研究。经实验确定该菌株产生的果胶酶最适反应温度 6 0℃ ,液体酶 6 0℃保温 1h ,酶活保存 5 0 % ,最适反应pH 8.0 ,在pH4～ 10具有较好的酶活性。     

脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究

[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌。[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）。采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质。[结果]该菌株最佳产酶条件：碳源为0.5%的可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍。该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定。[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础。     

牛肉酱纤溶酶产生菌发酵条件的优化

对从牛肉酱中筛选出来的一株产生纤溶酶的枯草芽孢杆菌BC-3进行了优化培养。结果表明,该菌株最适培养基配方为:豆粕粉3%、玉米粉3%、MgSO40.05%、CaC l20.02%、吐温-80 0.1%;最适发酵条件:温度30℃,初始pH值6.8,发酵时间96 h。该菌株在最适条件下1 m l发酵液的纤溶酶量相当于2 620尿激酶单位。     

酒糟中纤维素酶产生菌的筛选及酶学特性研究

以CMC-Na为唯一碳源,采用平板分离法从河套酒业酒糟中分离筛选出1株产低温酸性纤维素酶菌株C-11,16S rDNA基因序列与枯草芽孢杆菌的同源性较高。菌株C-11所产纤维素酶的最适反应温度为30℃,在35℃保持97%的活性,30℃保温24 h可保持91%的酶活力,保温60 h保持67%的活性,热稳定性好;该酶在pH 5.0时酶活最高,在pH 4.0和pH 5.0下保存60 h可保持38%和40%的活性。菌株C-11所产纤维素酶为低温酸性纤维素酶,可以耐受酒糟环境,降低酒糟纤维素含量。     

岩藻聚糖硫酸酯降解酶产生菌的筛选鉴定及酶学特性研究

[目的]从水环境中筛选高活性降解菌,从而将高分子多糖降解为低分子量、药用价值更高的多糖。[方法]通过唯一碳源、富集培养等方法对淡水来源的细菌进行筛选获得活性较高的岩藻聚糖硫酸酯降解菌,然后根据菌株的形态、生理生化特征及16S rDNA分析和进化树构建进行种属鉴定,进一步对降解菌粗酶液的热稳定性、最适反应温度、最适pH和金属离子对酶稳定性影响进行研究。[结果]筛选获得了2株活性较高的岩藻聚糖硫酸酯降解菌JS3和JN3,这2株菌菌液酶活达384、410 U。菌株JS3和JN3归属于克雷白氏杆菌属(Klebsiella sp.)。酶学分析表明,JS3和JN3菌株粗酶液在40～70℃具有比较好的热稳定性,在pH 4.0～7.0内,该酶能保持良好的稳定性。JS3和JN3粗酶液与底物反应的最适温度分别为45、40℃,最适pH均为5.0。金属离子对酶的活性有一定影响,离子浓度为1×10^-2 mol/L时,Mg²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺对该酶有激活作用,Cu²⁺则强烈抑制酶活,Ni^2+...     

碱性蛋白酶产生菌S9发酵条件的研究

为了解大庆地区盐碱土中嗜碱微生物蛋白酶产生情况,对大庆市盐碱土中筛选出的一株碱性蛋白酶菌株S9,通过单因子试验与正交试验确定该菌株的最佳培养基为:葡萄糖2%、硫酸铵2%、酵母浸粉0.5%;最佳培养条件为:温度30 ℃,pH 9.5.     

鲤鱼体内木聚糖酶产生菌的筛选及部分酶学特性

利用选择培养基从鲤鱼体内筛选木聚糖酶高产菌株,研究温度、pH值等环境条件对该木聚糖酶的影响,结果显示,酶的最适反应温度为30℃,最适pH值为5.0.     

普鲁兰酶产生菌的筛选及部分酶学性质研究

利用选择性培养基从淀粉加工厂附近土壤中分离出11株具有产普鲁兰酶能力的菌株,对其中产酶能力最高的PB1菌株所产酶进行了性质测定。结果显示:PB1所产普鲁兰酶活力为3.25U/mL;该酶最适反应温度为60℃,在低于70℃范围内热稳定性较好;最适反应pH值为5.0～6.0,在pH值为4.0～7.5范围内稳定;Fe3+对该酶活性有明显的促进作用,而Cu2+、Ag+、Hg2+、Pb2+对该酶活性有强烈的抑制作用。