新城疫不同毒株EID50的测定及增殖速度的比较

新城疫也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的急性高度传染性疾病。该病严重危害养鸡业的发展，常给养鸡业带来巨大的经济损失。试验通过对新城疫不同毒株增殖速度进行比较，希望能加深对新城疫不同毒株的了解，更好地对新城疫进行防疫。     

猪源新城疫病毒研究进展

新城疫病毒是一种变异及进化速度很快的病原，随着世界范围内新城疫病毒的4次大流行和疫苗的广泛、大量重复使用，新城疫病毒的宿主范围随之明显扩大，现已向哺乳动物——猪跨进。对猪源新城疫病毒病原学、引发的临床症状、实验室诊断方法及其毒力和基因变异等方面进行综述，并对猪源新城疫病毒发生的可能原因进行了分析。     

兰藤注射液体外抗新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验测定了兰藤注射液对新城疫病毒的抑制作用.结果表明,中药对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种后,可抑制新城疫病毒在鸡胚中的增殖.     

中药炎康注射液体外抗鸡新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验,测定了2种中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,在药物与病毒同时接种情况下,均可抑制新城疫病毒在鸡胚中的增殖,但1号配方明显好于2号配方。     

中药炎康注射液体外抗鸡新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血凝抑制试验,测定了2种中药配方对新城疫病毒的抑制作用.结果表明,在药物与病毒同时接种情况下,均可抑制新城疫病毒在鸡胚中的增殖,但1号配方明显好于2号配方.     

鸽新城疫病毒在鸡胚上的增殖动态

采用红细胞凝集试验（HA），通过对鸽新城疫病毒（NDV）在鸡胚上增殖动态的研究表明，ND－gs01病毒经尿囊腔接种9－10日龄鸡胚、24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始增殖，72h左右鸡胚死亡。新城疫病毒在尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中含量较高，增殖动态趋于一致。卵黄、胚体中含量较低。上述结果，为该病毒的进一步研究和应用提供了科学依据。     

新城疫病毒变异、进化与跨种感染

新城疫病毒是一种变异、进化速度很快的病原,近年来新城疫病毒感染的宿主范围有不断扩大的趋势,不仅可跨种感染多种水禽,并有跨种感染猪的报道。本文通过新城疫病毒F基因和HN基因变异规律分析,探讨了基因变异对新城疫病毒毒力及跨种感染能力的影响。     

鸽新城疫病毒分离株的部分生物学特性鉴定及疫苗免疫试验

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到1株病毒，通过血凝（HA)试验、血凝抑制（HI）试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒，进而进行了鸡胚半数感染量（EID50）、鸡胚平均死亡时间（MDT）测定和对不同动物红细胞的凝集试验，证明该分离株属新城疫强毒力毒株，将该毒株经鸡胚尿囊液增殖后用甲醛灭活，制成油佐剂来活苗，对鸽免疫后检测其血清抗体水平并进行攻毒试验，结果在免疫后21d抗体达到高峰，攻毒试验表明油佐剂灭活苗对鸽新城疫病毒感染有较强的保护力。     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的实验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

中药复方口服液体外抗鸡新城疫病毒的试验研究

采用鸡胚培养法和血球凝集试验测定了中药配方对新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药配方对鸡胚无毒性作用;在药物与病毒同时接种情况下,能抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)干扰新城疫病毒(NDV)增殖现象的研究

ＩＢＶ毒株Ｈ１２０、Ｈ５２、ＭＡ５对ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ的干扰实验证明ＩＢＶ特异性干扰ＮＤＶ增殖。１）采取不同顺序的同胚接种法：ＩＢＶ接种之后再接种ＮＤＶ;或ＮＤＶ接种之后再接种ＩＢＶ,及ＩＢＶ,ＮＤＶ同时接种,ＩＢＶ均干扰ＮＤＶ的增殖。２）ＮＤＶ接种３６小时之内,干扰现象最为明显,Ｈ１２０,Ｈ５２的干扰能力稍强于ＭＡ５。３）ＮＤＶ血清中和实验结果显示,不同顺序同胚接种ＮＤＶ、ＩＢＶ时,ＮＤＶ－ＬａＳｏｔａ不影响ＩＢＶ的增殖能力。同胚增殖ＩＢＶ,ＮＤＶ的关键是控制ＮＤＶ、ＩＢＶ的接毒量及选择合适的收毒时间。     

鸡传染性支气管炎病毒与新城疫病毒增殖作用及免疫干扰的研究

试验旨在观察鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）和鸡新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）之间的增殖干扰现象,分析在免疫过程中两种疫苗存在的免疫干扰,为确定疫苗的免疫程序提供依据。采用完全随机试验设计,选取10日龄鸡胚尿囊腔接种不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV,收集尿囊液测定其血凝效价（HA）;用不同浓度的IBV、NDV以及不同浓度混合的IBV和NDV分别免疫BALB/c小鼠及SPF雏鸡,收集血清,间接酶联免疫吸附法（ELISA）和血凝抑制（HI）试验测定IBV和NDV的抗体效价及抑制效价。结果表明,同胚培养时,无论先接种IBV后接种NDV还是先接种NDV后接种IBV或IBV和NDV同时接种,IBV对NDV均有干扰作用,而NDV对IBV没有干扰作用;接种IBV和NDV的小鼠,其产生IBV和NDV的抗体效价均低于单独免疫组,免疫的次序及免疫间隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用。不同针混合免疫方式能提高IBV和NDV的抗体效价;接种IBV和NDV的雏鸡,免疫次序及免疫相隔时间对IBV和NDV的抗体效价均有影响,IBV对NDV的免疫效果具有较大的干扰作用;雏鸡和小鼠免疫血清HI试验数据表明,免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但对NDV抗体的产生影响更明显,随着免疫间隔时间的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势,雏鸡比小鼠更能敏感地反映出IBV对NDV的免疫干扰作用。混合注射时IBV和NDV的抗体水平均降低,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。因此,在同胚培养、小鼠及雏鸡的免疫中,IBV对NDV有干扰作用,而NDV对IBV无干扰作用。混合接种时IBV和NDV抗体效价均下降,IBV对NDV的免疫效果有干扰作用。免疫次序及免疫间隔时间对IBV和NDV抗体的产生均有影响,但随着免疫间隔的增加,IBV和NDV的抗体水平呈增加趋势。     

Study on the Effect of Infectious Bronchitis Virus and Newcastle Disease Virus on Proliferation and Immune Interference

This experiment aimed to investigate the proliferation interference effects of the infectious bronchitis virus (IBV) and Newcastle disease virus (NDV),analyze the immune interference of two vaccines in the immune process,and provide a basis for determining vaccine immune program.This experiment was in a complete randomized design,10-day-old allantoic cavity of the chick embryo was inoculated with different concentrations of IBV and NDV and with a mixture of different concentrations of IBV and NDV,and then the allantoic fluid was collected for determination of the titer of hemagglutination (HA).Furthermore,BALB/c mice and SPF chicken were immunized with different concentrations of IBV and NDV and also with the mixed IBV and NDV with different concentrations,the blood of mice and chicken were collected,and antibody titer and inhibitory titer of IBV and NDV were determined by indirect enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and hemagglutination inhibition (HI) test.Experimental results showed that in the homeomorphic cultivation research,whether IBV and NDV were inoculated in a different order or inoculated at the same time,the inoculation of IBV behaved interference to the NDV,while the inoculation of NDV had no interference effects to IBV;Mice were inoculated with IBV and NDV,IBV and NDV antibody titers were lower than single immunized group,immune procedures and immune intervals often had effect on the titer of IBV and NDV antibody,IBV had interference on the immune effect of NDV,different needle mixed immunization can improve the antibody titer of IBV and NDV.In the group of SPF chicken inoculated with IBV and NDV,the order of the inoculation and the immune interval had effect on the titer of IBV and NDV antibody,IBV had a interference on the immune effect of NDV;In the immune serum inhibitory test,the data showed that the IBV and NDV antibody production were affected by the immune order of the inoculation and the interval,the effect on the NDV antibody was more obvious,but with the increase of the immune interval,the antibody level of IBV and NDV showed an increasing trend,the chicken was more sensitive than the mice to reflect the immune interference of IBV on NDV.IBVand NDV antibodies titer was also reduced in the groups that was inoculated with the mixed IBV and NDV,IBV had a interference on the immune effect of NDV.In the homeomorphic cultivation research and animal research,IBV behaved interference to the NDV,while NDV had no interference effects to IBV.IBV and NDV antibody titers decreased when mixed immunization,IBV had a interference on the immune effect of NDV.The order of the inoculation and the immune interval had effect on the antibody titer of IBV and NDV,but with the increase of the immune interval,the antibody level of IBV and NDV showed an increasing trend.     

新城疫病毒胶体金免疫层析试纸条的制备

为了建立一种简便、快速检测新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）的方法,本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记NDV单克隆抗体6C4制备免疫检测探针。在硝酸纤维素膜上,用微定量喷头喷好1条病毒检测线（T线）和1条羊抗鼠抗体质控线（C线）,制备免疫层析检测试纸条,使用该制备好的检测试纸条可在10 min内检测出新城疫病毒。试纸条检测NDV的灵敏度比HA试验结果提高8倍,与禽流感病毒未出现交叉反应,用缓冲液对照测试,结果为阴性,在密封、干燥、低温的条件下,试纸条的灵敏性与特异性没有明显变化。本研究建立的NDV免疫层析检测法具有特异、灵敏、稳定、操作简单等特点,符合现场快速检测的要求。     

一株鸽新城疫病毒的分离鉴定

对广东地区疑似发生鸽新城疫感染的鸽病料进行病毒分离,通过血凝试验(HA)、中和试验、F基因扩增及序列测定.结果分离到1株血凝效价为4log2,且能被NDV阳性血清中和的病毒;用针对NDV F基因设计的特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出相应的目的片段;测序及Blast分析表 明其与山东分离株chicken/...     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

鸡新城疫病毒强弱毒株RT_PCR鉴别诊断方法

本研究通过对大量不同毒力ＮＤＶ Ｆ基因核苷酸序列分析,根据毒力和序列间的相关规律,分别设计合成了两组引物,建立一个可以迅速鉴别ＮＤＶ强、弱毒株的ＲＴ－ＰＣＲ方法,对强毒株可扩增出１３３ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段,弱毒株可以扩增出２５２ｂｐ的特异性片段的３６２ｂｐ的通用片段。只需一个ＲＴ－ＰＣＲ反应,整个实验过程可在５小时内完成。敏感性测定结果表明该方法的最低检出量不低于５００ｐｇ的ＤＮＶ ＲＮＡ。为了增加方法的实用性,我们进一步建立了直接从组织病料中检测并鉴别强弱毒株的方法。     

新城疫病毒复制对其溶瘤作用影响的初步分析

本研究旨在明确新城疫病毒（NDV）溶瘤作用是否依赖其复制水平,并改进NDV溶瘤机制研究模型。以NDV疫苗株LaSota感染人肿瘤细胞系HCT116、A549和人非肿瘤细胞系HEK293T为研究模型;RT-qPCR检测NDV在各细胞系的基因组复制水平;Western blot检测NDV在各细胞系的蛋白表达水平;利用流式细胞术检测NDV感染对各细胞系的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果表明,NDV在三个细胞系内的基因组复制水平和蛋白表达水平没有显著差异,但对三个细胞系的溶瘤作用存在明显差异;进一步流式细胞术检测发现,NDV感染能诱发HEK293T和HCT116的细胞周期发生G1期停滞,但对A549的细胞周期没有明显影响;此外,NDV感染24 h后,A549细胞以早期凋亡为主,而HCT116细胞以坏死/晚期细胞凋亡为主。NDV的溶瘤作用并不依赖于其复制水平,而且NDV对不同类型肿瘤细胞的溶瘤作用存在不同机制。     

1株鸭源Ⅰ类新城疫病毒分离株F和HN基因的分子特性分析

采用RT-PCR技术对Ⅰ类新城疫病毒(NDV)09-014分离株完整的融合蛋白(F)基因和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因的序列测定结果表明:该分离株F基因全长为1 792 bp,可编码553个氨基酸,裂解位点的氨基酸组成为112E-R-Q-E-R-L117,具有典型的新城疫弱毒株特征。同源性分析表明本分离株的F基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为93%～95.2%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于70.6%～72.4%。HN基因的序列测定结果表明:HN基因全长2 001 bp,可编码616个氨基酸,同源性分析表明本分离株的HN基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性在92.7%～94.7%之间,而与Ⅱ类新城疫病毒同源性较低,为70.7%～71.5%。根据完整的F基因和HN基因构建的遗传进化树均表明:本分离株在分类地位上属于Ⅰ类新城疫病毒基因3型,因此Ⅰ类新城疫病毒的F基因和HN基因具有相似的进化速率。     

一株Class Ⅰ新城疫病毒分离株NP和P蛋白基因分子特征和遗传进化分析

本研究对2009年实验室保存的一株Class Ⅰ新城疫病毒分离株NDV09-056的NP和P基因进行了扩增和序列分析,对其分子特征和遗传进化关系进行了分析。结果表明该分离株NP蛋白基因全长为1746nt,共编码489aa,其N端1～401氨基酸相对比较保守,C端402～479氨基酸变化比较大;同源性分析表明本分离株的NP蛋白基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为93.5%～98.5%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于77.0%～79.2%。P蛋白主要氨基酸突变区集中在57～107aa和135～212aa两个区域,而N端和C端相对保守;同源性分析表明本分离株的P蛋白基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为90.4%～95.3%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于68.3%～72.5%。遗传进化分析表明本分离株与Ⅰ类基因3型新城疫病毒代表株NDV08-004的亲缘关系最近。