云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源,通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株,观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期,烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月;蚜虫接种后约１周,在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑,继而产生强烈的过敏反应,即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑,叶片上布满坏死斑纹,有典型的环纹和蚀纹,严重的烟株叶片破裂,细脉坏死;随后进入缩顶期,烟株生长缓慢,叶间距明显缩短,顶部几乎成为一个平面,叶色稍黄,大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢,萎缩成为僵苗,不表现丛枝症状,也不会开花结实;感染约４周后,摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生,生长速度加快,几天后便表现为典型的黄化丛枝症状,叶黄化且变圆,能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别,初步认为是１种未见记载的新病害,建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅰ病害的症状学及其病程

 以云南烟草丛枝症病株为毒源,通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株,观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA.研究表明:云南烟草丛枝症病害的病程可分为4个阶段:潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期,烟株从感染到表现丛枝要经过约1个月;蚜虫接种后约1周,在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑,继而产生强烈的过敏反应,即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑,叶片上布满坏死斑纹,有典型的环纹和蚀纹,严重的烟株叶片破裂,细脉坏死;随后进入缩顶期,烟株生长缓慢,叶间距明显缩短,顶部几乎成为一个平面,叶色稍黄,大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢,萎缩成为僵苗,不表现丛枝症状,也不会开花结实;感染约4周后,摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生,生长速度加快,几天后便表现为典型的黄化丛枝症状,叶黄化且变圆,能够开花结实.其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别,初步认为是1种未见记载的新病害,建议称之为“烟草簇矮病(Tobaco bushy dwarf)”.文中附病程症状图2版.     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅹ病原研究：植原体问题

 云南烟草丛枝症病害四环素治疗无效,可经汁液摩擦和蚜虫传染,病程表现为潜伏期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期等4个阶段,细胞内产生质膜体和细胞质泡囊等膜系统畸形病变,病株总核酸中存在特殊的超稳定低分子量RNA,Nested-PCR在病株总核酸中(引物:R16mR1/R16mF2,R16R2/R16F2)未检测到植原体16sRNA基因。说明云南烟草丛枝症病害和烟草丛枝病是不同的病害,病原不是植原体,该病表现出病毒侵染的特征,可能由病毒或类似于病毒的病原引起。依据病害的症状和侵染特征,建议将"云南烟草丛枝症病害"称呼为"烟草簇矮病(Tobacco bushy dwarf)"。     

烟盲蝽田间种群动态及不同龄期与病毒病传播的关系

本实验研究田间烟盲蝽的种群数量动态。表明：田间烟盲蝽数量存在年度间差异，单株虫口密度与烟草丛枝症病发生率呈正相关。不同龄期烟盲蝽传毒测定结果表明，在1～12h内，烟盲蝽取食时间增加其传毒率增强。在相同时间内若虫的传毒率高于成虫，4龄若虫传毒能力最强，获毒6h就可使80％的烟株发病；3龄若虫传毒能力强于2龄和5龄，1龄若虫传毒能力最弱。烟盲蝽为非持久性传毒，其带毒时间为5～8d，3龄若虫带毒持续时间最长。以上结果说明，虽然烟盲蝽在田间发生的数量比较低，但它的传毒能力强，因此对于烟盲蝽的防治应引起重视。     

云南烟草丛枝症病害的超微细胞病变研究

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测。病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA，切片中未观察到病毒粒子和植原体等病原，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体和细胞质泡囊，质膜体(1000～2000nm)结构类似于病毒形成的旁壁体。细胞质泡囊(100-200nm)是含纤维状物的双膜的囊。运用不同盐浓度介质的RNase处理病变细胞组织，发现高盐介质的Rnase(2XSSX)不能消解小囊泡中的纤维状物，而低盐介质的Rnase(O．01XSSC)可以消解小囊泡中的纤维状物。文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为这是云南烟草丛枝症病害发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征。     

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅥ 网罩隔离培育无毒烟苗防治病害

 云南烟草丛枝症病害是经烟蚜和烟盲蝽传染的病毒病,在 "治虫防病"为主的防治技术的基础上,本文研究网罩隔离技术培养无毒烟苗应用于大田控制病害的方法,并进行一定面积的技术示范工作,结果表明:网罩隔离育苗在田间成功地培育出无毒烟苗,病苗率为0.23%～3.6%,较对照下降约75%～95%,移栽后结合优质烟栽培技术,封顶时烤烟的田间发病率为2～5%,说明以无毒苗应用技术为核心、辅之介体控制和病苗拔除等技术的综合防治体系能够有效和稳定地控制烟草丛枝症病害的危害。     

云南烟草丛枝症病原及传媒研究初报

云南烟草丛枝症一直被认为是烟草丛枝病，其病原是植原体。由于生物学测定结果与植原体病害一般特性不尽相符，对云南烟草丛枝症的病原尚难以确定。我们对典型烟草丛枝症的原发病株和转接发病株按照检测植原体的方法提取DNA。扩增病株中植原体16S rDNA片段，在云南烟草丛枝症中没有检测到植原体的存在。在检测DNA提取物含量过程中，原发病株和转接发病株样品中检测出含量较高的RNA带，分子量约0．8kb；而健康烟株策和枣疯病株中未检测出，由此说明云南烟草丛枝症的病 原不是植原体，病株中检测出的RNA带是该病的病原还是感病后的诱导产物，有待进一步研究；RNA可作为室内鉴别烟草丛枝症的方法。在理论上证明烟蚜是烟草丛枝症的传播媒介，同时估计云南烟草丛枝症的病原是病毒，并与以往国内报道的烟草病毒病害不同，可能是一种新的病毒病害。     

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中,按植物病毒学的标准程序,测试云南烟草丛枝症病害的传染途径,结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径,可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅴ传染途径

 在隔离环境中,按植物病毒学的标准程序,测试云南烟草丛枝症病害的传染途径,结果表明:云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径,可以通过机械传染(嫁接、摩擦)和介体传染(菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉)等方式传播.     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅷ验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

 来自云南省22个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定RNA,大小相当于800bp左右的DNA;病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此RNA,种子中未检测到此RNA;此RNA的最大吸收峰为269nm;能被蛇毒磷酸二酯酶I消化,不具有类病毒结构特征,推测可能是病毒的基因组分;支持莫笑晗等对此RNA的结构推测,即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为1.61kb的单链RNA。与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA目前发现的超稳定RNA。     

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅤ 白肋烟品种的抗性测定

 采用人工接虫方法,对215个白肋烟品种进行了抗烟草丛枝症病害的抗性测定,有7个品种表现较好的抗性,11个品种表现出中抗,38个品种表现出中感,159个表现出感高感。     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅻ病原研究：病毒问题

 云南烟草丛枝症病害病程表现为潜伏、过敏反应、缩顶、丛枝等4个阶段,以过敏反应导致叶片严重坏死和枯死为前期特征,以腋芽丛生而表现为黄化丛枝症为后期特征,苗期感染形成僵苗症,大田期感染表现丛枝症;汁液摩擦接种11科32种植物发现其只侵染烟属植物,通过机械传染(嫁接、汁液) 和介体传染(菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉) 等方式传播,该病害与文献记载的烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别,可能是未见记载的病害。在云南烟草丛枝症病株的老叶和带毒蚜虫中抽提到直径约22～24nm的球状病毒,回接烟草发病,病株检测到和云南烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA,说明该病毒和云南烟草丛枝症病害有密切的关系,且与SBMV,VTMV,TRSV,ArMV,CarMV,CMV,BCMV,TNV等8种病毒无血清学关系,综合各项研究和文献检索结果,作者推测该病毒可能是未见记载的病毒,建议称为"烟草簇矮病毒(Tobaco bushy dwarf virus)"。     

金坛地区白背飞虱的测报与防治

总结了1995年以来金坛地区白背飞虱的测报与发生情况,对田间虫卵量高的年份作了重点分析,并对白背飞虱的测报与防治药种提出了合理的建议。     

云南烟草丛枝症病害研究Ⅲ细胞的超微病变

 超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织,并抽提试验材料的总核酸电泳检测,结果表明:病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量RNA,切片中未观察到病毒粒子,薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变:质膜体(plamalemmasome)和双层膜泡囊(double membranous vesicles).质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成,直径约1000～2000nm,结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体.双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊,直径约100～200nm,结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊(cytoplasmic vesicles)和植原体(phytoplasmas),但因其广泛分布于寄主细胞中,不能认为是植原体.文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征,初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害,发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征,此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量RNA可能有密切关系.     

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ,大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ;病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ,种子中未检测到此ＲＮＡ;此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ;能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化,不具有类病毒结构特征,推测可能是病毒的基因组分;支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测,即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．     

烟草丛顶病中间寄主测定

采用饲毒烟蚜(MyzuspersicaeSulzer)和汁液摩擦传毒的方法,对22种烟蚜田间常见的中间寄主进行接种,接种后7d,用无毒烟蚜接种中间寄主饲养2d后回接到健康烟株。观察烟株是否发病。经多次重复试验,最终确定小酸浆(PhysalisangulataL)和龙葵(DaturastramoniumL)为烟草丛顶病的中间寄主。采用汁液传毒中间寄主并用蚜虫回接烟苗未出现发病症状。     

烟草品种辣椒叶脉斑驳病毒病的症状与抗病性鉴定

 辣椒叶脉斑驳病毒（Chilli veinal mottle virus,ChiVMV）为马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的确定种,在我国烟草上的危害呈上升趋势,了解ChiVMV侵染烟草品种的症状和品种的抗性有利于病害防治。本文通过塑料大棚内摩擦接种,分析了21个烟草品种的症状特征和对ChiVMV的抗性。ChiVMV侵染烟草的典型症状为褪绿黄化、花叶、疱斑和叶缘下卷。按照国家标准GB/T 23224—2008,依据接种ChiVMV后14 d的平均病情指数,各品种对ChiVMV的抗性分别为：MD609,巴斯玛1号和云烟97为感病,MSK326,MS云烟87,MS云烟85,红花大金元等18个供试品种为高感。云南省烟草主栽品种缺乏对ChiVMV的抗性,ChiVMV的危害需要引起重视。