植酸酶活性测定应注意的几个问题

1温度植酸酶作为一种酶制剂,对温度非常敏感,温度低会降低它的生物活性;温度高也会降低其生物活性,甚至完全失活。因此,在检测过程中对温度的控制则显得非常重要,国标要求植酸酶活性测定时的温度为(37±0.1)℃。在33℃时植酸酶不能很好地发挥其活性,酶活与其真实值相比约低10%;     

吸附剂膨润土对植酸酶活性的影响

在大多数植物性饲料中植酸含量很高，有70％磷是以植酸的形式存在的，对于单胃动物来说因为消化道缺少分解植酸的酶类，无法利用植酸中的磷。目前多在饲料中添加外源性植酸酶，以提高植物饲料磷的利用率。但种种原因导致植酸酶添加效果不够理想，目前大多观念认为植酸酶活性不同程度地受到饲料中成分的影响。     

降低猪饲料中钙磷比例以提高植酸酶活性

饲料中的钙含量过剩会形成不可溶的钙—植酸盐络合物,影响了磷的利用率。在添加了微生物植酸酶的猪饲料中,相应的磷水平一般比较低,那我们这时是否需要调整日粮中的钙磷比例呢？Liu等(1998)在密苏里大学进行了一项检验钙与总磷的比例大小对生长肥育猪的生长性能、胴体品质以及骨强度的试验。1材料与方法　　120头猪(56头阉公猪和64头小母猪),试验开始平均体重为23kg,23kg～54kg为生长期,54kg～123kg为育肥期。试验中收集粪样,并最后测定胴体品质。所使用日粮的成分见表1。表1日粮成分日粮组成生长期(23kg～54kg)育肥期(54kg～123kg)…     

《饲用植酸酶活性的测定——分光光度法》新旧国标变化及解读

从2009年10月1日起．GB／T 18634-2009《饲用植酸酶活性的测定——分光光度法》标准正式实施。     

饲用植酸酶活性测定的研究

磷是动物必需的一种矿物元素,在体内发挥着重要作用。猪和禽等单胃动物由于体内很少有分解植酸磷的酶,大量的植酸磷不能被利用而从粪便中排出。我国水域污染比较严重,而猪和禽等粪便中排出的磷又加重了对土壤和水源的污染。据报道,目前世界上每年至少有100万t磷随废水排放出来，其中30％以上是养猪业所为。排放到土壤中的磷，不仅不能在土壤中渗透和扩散，还能与铜、铝、钙等元素形成不溶性复合物保留在土壤中。     

发芽、温度及pH对麦类籽实中植酸酶活性的影响

在25℃的条件下发芽 ,小麦东农123、小麦东农973821、大麦垦啤2号在第3天植酸酶活性达到最高 ,分别为原来的2.04、2.55、4.63倍 ;小黑麦92021、小黑麦5305及黑麦2号在第1天即达到最大 ,为发芽前的1.36、1.82和2.45倍。小黑麦5305中植酸酶的适宜温度为50℃ ,在40℃～60℃范围内可保持较高的酶活 ;适宜pH为5.5 ,低于4.0或高于7.0 ,酶活性基本丧失。温度与pH对植物植酸酶活性的影响存在互作效应     

分光光度法测定饲用六位点植酸酶活性

植酸酶是一种能水解植酸的磷酸酶类,广泛存在于植物、动物和微生物中。目前,国内外学者公认的植酸酶有2种:即六位点植酸酶和三位点植酸酶。三位点植酸酶由霉菌、真菌、酵母菌产生;六位点植酸酶由植物体内产生,如小麦、大麦、黑麦的麸皮中,其中以小麦麸含量最高。三位点植酸酶作     

吸附剂膨润土对植酸酶活性的影响

在水溶液中研究了不同酶加入量、作用时间、pH、热处理条件下，膨润土对植酸酶活性的影响。结果表明，膨润土对植酸酶活性无破坏作用；在植酸酶一般添加量时，膨润土有催化酶活性作用，随着酶加入量增加膨润土对释放的磷有吸附作用，这种吸附作用不受作用时间影响，随着pH值升高吸附减少；在80℃湿热处理时，膨润土对酶活性有保护作用。     

快速检测动物饲料中植酸酶活性的改进方法

当前饲料中植酸酶活性直接的比色测定存在高P和其它因素的干扰。我们的目的是研究一个快速、可靠的旋转柱法(slaincolumnmethod)来精确地测定饲料成分中或配合饲料中植酸酶活性。饲料样本在0．2M柠檬酸盐缓冲液中,pH值5．5、室温条件下搅拌萃取30min．用一个注射滤过器去掉浮在表面的小部分油层．然后把滤出液放到一个旋转柱中．目的是在植酸酶活性化验之前移走游离的磷酸盐。     

沉淀消解法测定植物性饲料中植酸磷含量

本试验对植物性饲料中植酸磷含量进行测定，从而评价饲料营养价值。饲料样品经稀盐酸提取，植酸磷游离出来，加铁盐使其生成植酸铁沉淀，将沉淀用硝酸、硫酸消解，PO4^3-在酸性条件下，与钼酸发生反应生成磷钼酸，用抗坏血酸将其还原为钼兰显色，在波长660nm下进行比色测定。方法操作简单，具有良好的精密度，适用于植物性饲料中植酸磷含量的分析。     

植酸酶在畜禽消化道内的活性变化与定点释放

利用微生物植酸酶替代畜禽日粮中的磷酸氢钙已得到普遍应用,但植酸酶活性受多种因素影响,仍不能替代畜禽日粮中的全部磷酸氢钙。本文从植酸酶的酶学特性出发,通过总结畜禽消化道pH、蛋白水解酶和金属离子等因素对植酸酶活性的影响,探讨植酸酶的适宜作用位点,进而为植酸酶在畜禽消化道内实施定点释放提供参考。     

植酸酶的相关介绍及活性检测方法的探讨

1968年Shien等从68个土样中对2000个菌株进行考察发现．在所得到的22株黑曲霉中有21株能产生植酸酶．确定第一个被分离纯化的植酸酶来源于土曲霉。从此以后．陆续从十几种微生物中分离得到植酸酶．其中来源于Aspergillus ficuum NRRL3135（Aspergillus niger var awamori）的植酸酶phyA具有较好的耐热性,在酸性环境下有较高酶活性。1995年Van Gorcomd等将酸性植酸酶基因phyA重组到黑曲霉中,使植酸酶在重组菌株中得到高效表达,表达量达到了280IU／ml．这是目前国外报道的植酸酶最高表达水平．此菌株也是国外目前植酸酶工业生产所采用的菌株。     

植酸酶酶活测定方法的研究

植酸及其盐类广泛存在于植物组织和相应的粮食产品中,占其总量的1%～3%,其中磷含量占植物总磷的60%～90%,是磷和肌醇的主要储存形式。而植酸形式的磷不但不能被单胃动物所消化利用,它还抑制多种营养成分的吸收和利用。植酸酶是催化植酸水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称,由于植酸酶的这一特点,它已在饲料和食品工业中广泛地得到应用。植酸酶的产生主要是依靠微生物发酵获得,近年来有关微生物发酵生产植酸酶为目的的研究、开发报道很多,微生物发酵法生产植酸酶取得了很大进展。植酸酶酶活性的测定主要是检测分解产物无机磷的生成量。目前植酸酶…     

An improved method for a rapid determination of phytase activity in animal feed

The current direct colorimetric assay for phytase activity in feeds has interference from high P background and other factors. Our objective was to develop a rapid and reliable spin column method to accurately determine phytase activity in feed ingredients or complete diets. After the feed sample was extracted by stirring in 0.2 M citrate buffer, pH 5.5, for 30 min at room temperature, the oily layer of the supernatant fraction was removed by passing through an acrodisc syringe filter (0.45-microm HT Tuffryn membrane, Gelman Laboratory, Ann Arbor, MI). The filtrate was then loaded onto a spin column (MW cutoff 30,000, Millipore, Bedford, MA) to remove free phosphate before the phytase activity assay. Compared with the direct assay, this new procedure improved both accuracy and reproducibility. When diets contained phytase at 0 to 1,500 U/kg (as fed), the CV for multiple assays of the same samples (n = 6) by the new method ranged from 1 to 6% compared with 28 to 39% by the direct method. A linear relationship was found between the added phytase activity in practical diets and the analyzed activity by the new method (r2 = 0.99; P < 0.01). In conclusion, the spin column method is an improved assay for phytase activity in animal feed, and may be used for quality control of phytase supplementation.     

利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株

对产植酸酶的纯化黑曲霉用混合酶制取原生质体进行了研究。研究发现,经诱变后的原生质体在再生过程中菌落形态发生了明显变化,从中选育出了一株植酸酶的高产菌株,并对其遗传稳定性进行了鉴定。     

应用钼黄法和钼兰法测定植酸酶活性测定条件的研究

植酸酶活性的测定,基于在一定的条件下植酸酶酶解底物(植酸钠),游离出磷和肌醇。游离出磷量的多寡反映出酶活的高低。测定磷的方法应用较多的为钼黄法和钼兰法。钼黄法因其标准曲线线性关系好,颜色稳定,干扰物质相对较少而成为测定低含量磷的经典方法。钼兰法其测定条件及还原剂的选择已有深入的研究,并在微量磷测定中得到应用。钼黄法和钼兰法应用于植酸酶活性的测定,由于表面活性剂的引入,植酸钠及植酸酶的存在,改变了方法的测定条件。而酶提取溶剂的选择也是影响测定成败的主要因素。本文对上述因素的引入给测定方法带来的影响进行研究,…     

不同的处理条件对植酸酶活力的影响

242个饲料样品被分为试验和对照两组,每组分为121个样品。试验组选用层析柱来浓缩酶以去除原酶液中的底色对测定结果的影响,对照组选用原酶液。结果表明,层析柱虽可去除底色的副作用,但对测定植酸酶的活力无任何影响(P>0.05)。在制颗粒料过程中,随着制粒温度的升高(60、70、80℃),植酸酶的活力丢失也愈多(P<0.01)。当用柠檬酸和醋酸两种缓冲液来浸提和测定植酸酶时,以柠檬酸缓冲液测得的植酸酶活力较低(pH5.5,P<0.01)。不同的浸提温度(4、25℃)及不同的浸提时间(5、10、15、30、45、60、90和120min)对测得的植酸酶活力皆无明显的影响(P>0.05),因而植酸酶适宜的浸提温度和时间分别为25℃和60min。     

不同底物对植酸酶酶活检测的影响

试验采用2×5完全随机试验设计,考察不同底物(P3168和P8810)对不同酶活水平(6000、8000、10000、12000和16000U/g)的植酸酶酶活检测的影响。结果表明,以P8810为底物检测的植酸酶酶活显著高于使用P3168为底物的检测结果,但底物类型与酶活水平之间没有显著的互作效应。使用P8810与使用P3168的检测结果之间存在显著的线性关系(P=0.00),线性方程为:y(P3168)=0.843x(P8810)-431.16,R2=0.987。通过对曲线预测值验证的结果表明,可以使用P8810替代P3168作为底物进行植酸酶酶活检测。     

麦类籽实中植酸酶的活性及体外降解植酸盐效果的研究

为评价不同麦类籽实中内源植酸酶的活性及其对外源植酸盐的降解能力,以植酸钠为底物,测定5种10个不同品种麦类籽实中植酸酶的活性;在37℃、pH 5.50的条件下,以300 U/kg的浓度加入从麦类籽实中提取的植酸酶,检测了对玉米、豆粕中植酸磷的释放效果。结果表明,燕麦、大麦(垦啤2号)、小麦(东农123)、小麦(东农973821)、小黑麦(5305)、小黑麦(92021)、小黑麦(96026)、小黑麦(8809)、胜利黑麦和黑麦(2号)籽实中植酸酶的活性分别为57.50、143.25、1048.06、725.22、1978.67、2201.65、1713.46、1406.49、5310.89 U/kg和3446.53 U/kg(风干基础);在上述条件下,反应8h,玉米、豆粕中的植酸磷分别释放71.92%和38.94%。