猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状而导致高病死率的传染病,PRRSV抗体依赖增强作用(ADE)是造成PRRS免疫失败的重要因素,受到国内外学者的高度重视。近年来,对ADE的机理已进行了深入的研究,主要是巨噬细胞通过FcγR介导摄取PRRSV引发ADE现象。论文综述了PRRSV的结构蛋白和ADE机理,为PRRS的进一步研究和疫苗的研发提供参考。     

百色市高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测结果分析

为评估百色市猪群高致病性猪繁殖与呼吸综合征（HP-PRRS）免疫效果,2012年—2013年在66个规模养猪场和249个农村散养户分别采集猪血清样品465份和644份,使用间接 ELISA 检测 HP-PRRSV 抗体,结果显示,现2012年 HP-PRRSV 抗体平均阳性率为68．02％,2013年 HP-PRRSV 抗体平均阳性率为75．32％;HP-PRRSV 一免抗体平均阳性率为63．91％,二免抗体平均阳性率为83．60％;HP-PRRS 灭活苗免疫抗体平均阳性率为75．42％,HP-PRRS 弱毒苗免疫抗体平均阳性率为70．86％。说明2013年 HP-PRRSV 抗体平均阳性率高于2012年,二免的抗体平均阳性率高于一免;HP-PRRS 灭活疫苗的初步使用效果良好。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查

2006年6月份以来,我国多个省份暴发高致病性猪繁殖与呼吸综合征,给我国养猪业造成了巨大经济损失.为全面了解高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒在我国的流行情况以及遗传变异规律,本研究采用RT-PCR的方法,对从2006年8月至2007年10月期间,来自于19省(市)共474份样品进行高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸的检测,结果检出阳性样品294份.在各省不同时期样品中均有阳性样品检出.通过对阳性样品进行Nsp2基因和ORF5基因扩增,序列分析发现所有检测的猪繁殖与呼吸综合征病毒株高度同源,为同一毒株遗传变异而来,所有猪繁殖与呼吸综合征毒株与HB-1株遗传关系最近;且Nsp2均缺失30个氨基酸.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征减毒疫苗在仔猪体内的抗体消长规律

本文比较了不同日龄和母源抗体水平的仔猪接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征减毒疫苗（JXA1-R株）后的抗体平均值、抗体阳性率和变异系数等指标。结果表明,对于母源抗体水平和整齐度不高的猪群,15日龄和30日龄接种减毒疫苗的免疫效果相似;对于母源抗体水平和整齐度较高的猪群,采用30日龄进行减毒疫苗接种可以产生较好的效果。本研究结果为制定适合连云港地区的高致病性猪繁殖与呼吸综合征免疫程序提供了依据。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒双重液相基因芯片检测方法的建立

为了实现快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)并同步鉴别高致病性PRRSV毒株(HPPRRSV),根据PRRSV囊膜蛋白GP2基因保守序列和HP-PRRSV特有的Nsp2基因区保守序列设计特异扩增引物和杂交探针,通过双重一步法RT-PCR不对称扩增和双重微球杂交反应,建立了双重液相基因芯片方法。对12株PRRSV以及其他12种猪病原体的检测显示,该法能特异性检测12株PRRSV毒株并准确鉴别其中7株HP-PRRSV,与其他病原体无交叉反应;对PRRSV、HP-PRRSV病毒液的检测低限均小于每个反应0.5TCID_(50);其组内、组间检测变异系数均10%;检测55份疑似临床样品并与商品化荧光RTPCR试剂盒比较检测结果,符合率达98.2%(54/55)。研究结果为适应临床快速检测PRRSV提供了一种新的分子生物学检测方法。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒F株的分离鉴定

2012年2月,潍坊某猪场疑似发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。病猪主要表现为呼吸困难,耳朵发绀,皮肤有弥漫性出血点;剖检发现淋巴结、肺脏出血严重。从病死仔猪脾、肺、淋巴结和脑组织中分离得到病毒。将该毒株在Marc-145细胞上盲传3代出现典型细胞病变,F3代病毒滴度为106.5TCID50/mL。RT-PCR检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性。用F3代毒株进行动物回归试验,结果符合高致病性PRRSV致病特征。上述结果证明该猪场发生的传染病为高致病性PRRS,并且利用Marc-145细胞成功分离到高致病性PRRSV,命名为F株。本研究为高致病性PRRSV致病特点及其疫苗研制提供物质基础。     

应用生物反应器生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原

应用激流式生物反应器培养Marc-145细胞生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒,并通过工艺优化,实现了病毒抗原的高效生产。首先将Marc-145细胞用含6 0mL/L牛血清的DMEM培养液复苏放大培养,当细胞量达到3×109时,接种入反应器中。先用细胞生长液培养,当细胞达到最大量时更换生长液为维持液,并接种HP-PRRSV。整个过程采用流加方式,每8h采样测定培养上清中葡萄糖浓度。接种病毒后,每24h测定培养上清HP-PRRSV滴度。6个批次细胞生长至88h,糖耗达到最高水平。连续3个批次种毒后培养至96h,上清中HP-PRRSV滴度达到最高,平均约为每106.4 TCID50/0.1mL。因此,认为应用激流式生物反应器进行细胞培养,通过过程工艺优化,可以实现HP-PRRSV抗原的高滴度生产。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体的方法,通过对PRRSV基因连续缺失片段dNsp2(87)进行诱导表达,重组pUC57-dNsp2蛋白,经镍柱纯化后,作为抗原包被微量反应板,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。经反应条件优化,确定抗原的最适包被浓度为40μg/mL,最适封闭液为5%脱脂奶粉,检测血清稀释度为1:40,酶标二抗的最适工作浓度为1:5 000,最佳显色时间为1 h,确定阴阳性临界值为0.35(OD450)。该方法均不与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒(PCV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪伪狂犬病毒(PRV)阳性血清发生交叉反应,具有良好的特异性。与IDEXX PRRSV Kit进行重复性、敏感性、符合性试验,证明该方法具有较好的重复性、敏感性、符合性。结果表明,该方法可用于临床PRRSV抗体的检测。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR方法的建立

根据GenBank中的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(He-PRRSV)基因组序列设计1对特异性引物,建立一种基于SYBR Green I实时PCR检测HP-PRRSV的方法.结果表明,该方法能够检测到HP-RRSV的存在,不与其它猪源病毒发生非特异性反应,标准曲线线性范围为1011拷贝/反应～102拷贝/反应.与常规PCR方法相比,两者的符合率100%.该方法具有快速、简便、敏感等优点,具有重要的实用价值.     

我国高致病性猪繁殖与呼吸综合征研究进展

近年来我国学者对高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)做了大量调查研究,表明HP-PRRSV在我国已是长期带毒、持续流行状态,给我国养猪业带来巨大的经济损失,现就近期国内对该病的流行病学、诊断和免疫方面的相关成果作一综述。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引发高热综合征病因分析与防治措施

通过市场调研，分析了猪高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒引起高热综合征的发病原因，提出防治措施，以供广大养殖户参考。     

乳猪"高热症"猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与致病性分析

本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT—PCR／PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪瘟病毒（CSFV）核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离到PRRSV（XS070425毒株）。测序结果显示,XS070425毒株Nsp2基因无高致病性PRRSV Nsp2基因533～561位连续29个氨基酸“RPVTPLSEPIPVPAPRRKFQQVKRLSSAA”的缺失;但遗传进化分析显示,XS070425毒株Nsp2、ORF5基因与近期我国报道的高致病性PRRSV-HuN4和JXA1有较高的同源性,达95％～96％。致病性试验显示,PRRSV-XS070425原始病料悬液和Marc-145细胞分离物接种健康猪后,病毒血症可持续26d,并出现典型的PRRS临床症状和体温升高,但不致死感染猪。这些结果说明,无NSP2蛋白29个氨基酸残基缺失的PRRSV也是猪高热症的重要病原。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征治疗试验

在2007年高致病性猪繁殖与呼吸综合征病传人后,一度因疗效差和死亡率高引起恐慌,为了解其危害和探索科学有效的治疗方案,对发病后确诊为高致病性猪繁殖与呼吸综合征病的猪群154头进行治疗试验,治愈率73.38%.其中并发猪瘟组治愈率54.39%,比无猪瘟组的85.94%低31.55个百分点,差异显著;免疫过高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗的治愈率85.71%,比未免疫过高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗的75.00%高10.71个百分点,差异显著;猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病阳性猪群治愈率54.39%,比面上的治愈率43.59%高10.8个百分点,差异不显著.     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立

2006年5月以来,我国部分猪场暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的传染性疾病,经病原分离及分子流行病学分析证明是由一种带有nsp2部分缺失的、对猪呈高致病性的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的。本实验参考GenBank发表的以及本实验室分离鉴定的PRRSV的nsp2基因序列,在nsp2缺失区的两端的保守区设计并合成了一对引物,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法扩增高致病性PRRSV基因组时可获得230bp的片段,扩增经典型PRRSV时则获得320bp的片段,根据RT-PCR产物大小可将二者区分开来。通过大量临床病料的检测,并配合PCR产物测序验证,结果表明该方法简便、快速、特异,可以鉴别高致病性PRRSV,为进一步的PRRS流行病学研究提供了重要的技术手段。     

1株临床高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

本研究从江苏省某猪场患有明显呼吸道临床症状和高热死亡的仔猪肺脏组织中分离到一株病毒,经病毒生物学特性测定、血清学试验、病毒基因鉴定,确定为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。人工猪体感染发病试验表明,该分离株可以引起商品仔猪出现明显临床症状和死亡,证实我国已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

云南高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因变异分析

采用RT-PCR技术对云南2007年采集的48份猪组织样品中病毒Nsp2基因进行检测,获得阳性样品14份,选择5份代表性样品将其PCR产物纯化后,克隆至pMD18-T载体测序,并与已知代表性毒株进行比较及系统发育分析。结果发现云南病毒样品Nsp2基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为95．8％～99．0％和92．3％～98．6％。5份样品病毒Nsp2蛋白482位、534位～562位氨基酸均存在缺失,其中1份样品（YNMG）486位～489位氨基酸也发生了缺失。云南病毒样品在系统发育树上可划分为4个亚组群,分别与广东、广西、贵州、浙江、江苏、山东毒株遗传关系密切。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究

为了解PRRSV安徽分离株的致病性,用从安徽省某发病猪场的病死仔猪组织中分离到的SCH07毒株接种40日龄健康仔猪,对其进行临床症状、病理剖检、病理组织学观察及抗体检测,结果表明：该毒株能引起仔猪高热、呼吸困难等明显临床症状和肺脏、淋巴结肿大、出血等剖检变化,病理组织学观察可见显著的间质性肺炎等病变,攻毒后第7天试验组仔猪血清中首次检测到抗体,并有一头在第15天死亡,证实安徽省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征感染过程中的作用

中和抗体在抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染过程中起重要作用,被动输入PRRSV的中和抗体可预防PRRSV感染妊娠母猪,并且对母猪和仔猪都可起到消除性免疫作用。然而在自然感染PRRSV的过程中,这种中和抗体产生较晚,为病毒在宿主体内大量复制并感染其他易感动物提供了充裕的时间。PRRSV的主要中和位点位于糖蛋白GP5,核心区域称作B位点,GP5的另一个显性表位称作A位点,是非中和位点。A位点与B位点的同时出现将会抑制机体对B位点的免疫反应。当PRRSV发生中和位点突变时,产生无位点A的PRRSV,这种类型的PRRSV可诱导中和抗体的产生。文章通过对PRRSV的免疫反应、中和抗体的作用以及中和位点等三方面的阐述,综述了中和抗体在抗PRRSV感染过程中的作用。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质组双向电泳方法的建立及优化

为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)蛋白质组双向电泳方法,本研究通过对HP-PRRSV蛋白样品提取、裂解、一向等电聚程序、上样量、染色试剂、显色时间等条件优化,建立了有效的HP-PRRSV蛋白质组学双向电泳方法。优化结果表明采用冻融-超声-裂解提取样品,结合2-D clean-up试剂盒纯化蛋白,按上样量为200μg,采用硝酸银染色,显色6 min,选择适宜的一向等电聚焦参数,能获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。HP-PRRSV蛋白质组双向电泳方法的建立,为开展该病毒蛋白质组和免疫蛋白质组研究奠定了基础。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征的调查报告

为了解2011年盘锦地区免疫猪群中高致病性猪繁殖与呼吸综合征的免疫效果和感染状况,采用ELISA和荧光定量RT-PCR方法分别检测了本年度1-12月采集到的2160份猪血清和120份猪组织样品。结果表明,受检的猪组织样品中均无高致病性猪繁殖与呼吸综合征抗原;大洼县、盘山县、兴隆台区、双台子区猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为82.2%、81.1%、78.8%、81.1%;种猪场、商品代猪场、散养户的猪繁殖与呼吸综合征抗体阳性率分别为90%、81.3%、75%。从总体来看,2011年盘锦地区的猪繁殖与呼吸综合征免疫状况良好,无猪繁殖与呼吸综合征疫情发生。