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相似文献
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1.
为了建立Lm型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌/单雌/两性系花序MSAP反应体系,提取不同类型不同发育时期的花序基因组DNA,混合成基因池;用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的组合,12 h可将DNA酶切完全;16℃条件下,将酶切产物与EcoRⅠ、HpaⅡ/MspⅠ接头过夜连接;连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.5μL、Mg2+(25 mmol/L)2.0μL、模板2.0μL、E0扩增引物(10pmol/μL)1.5μL、H0扩增引物(10 pmol/μL)1.5μL、LA Taq(5 U/μL)0.25μL、dd H2O 12.75μL。预扩增产物稀释10倍后用于选择性扩增。优化后的选择性扩增体系为10×PCR Buffer 2.5μL、d NTPs(10 mmol/L)2.0μL、Mg2+(25mmol/L)4.0μL、模板3.0μL、EX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、H/MX扩增引物(10 pmol/μL)1.0μL、LA Taq(5U/μL)0.30μL、dd H2O 11.2μL。  相似文献   

2.
应用正交设计建立芍药的SRAP反应体系   总被引:3,自引:0,他引:3  
为快速建立优化的芍药SRAP扩增反应体系,应用L25(56)正交表,研究了Taq、Mg2+、随机引物、dNTPs和DNA模板5种反应组分的浓度变化对SRAP扩增结果的影响,直观分析和稳定性检测结果表明:正交设计可高效建立优化稳定的芍药SRAP反应体系;用该法建立的芍药SRAP-PCR优化反应体系为:25μL反应体系中含10×PCR Buffer(100 mmol/L Tris-HCl pH 8.3,500 mmol/L KCl)2.5μL,MgCl22.5 mmol/L,dNTP各0.25 mmol/L,引物各0.3μmol/L,TaqDNA聚合酶1 U,DNA模板120 ng。  相似文献   

3.
本研究以大麻嫩叶为材料,以改进的SDS法,提取了高质量的大麻基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验条件的优化,建立了AFLP反应体系。研究结果表明:在常规的SDS提取液里加入8μL/mLβ-巯基乙醇(V/V)和3%PVP(M/V)能够提取到高质量的适用于AFLP的基因组DNA;选取150ng大麻基因组DNA来进行酶切,EcoRⅠ和MseⅠ各0.5U,在37℃酶切4h,即可完全酶切。最优的选择性扩增体系为20μL反应体系中含有1.0U Taq DNA polymerase、1.0μL25mmol/L Mg2+、0.4μL10mmol/LdNTPs、50ng/μL引物各1.0μL、4.0μL稀释50倍的预扩增产物及2μL10×PCR Buffer;使用该方法,获得了清晰、稳定的图谱并筛选到了18对多态性较好的AFLP引物组合。  相似文献   

4.
李超  饶勇  陈静  刘作易  朱英  肖华贵 《种子》2005,24(6):15-17
以隐性核不育双低杂交油菜黔油12号父母本及其杂交种为材料,对影响油菜RAPD分析的主要因素进行系统的比较研究,试验结果表明,25.0 μl反应体系中,最佳的组成是:10倍Buffer,2.0 mmol/L的MgCl2,0.2 mmol/L的dNTPs, 0.7 μmol/L的引物,1.5 U的TaqDNA聚合酶以及50.0 ng的模板DNA.  相似文献   

5.
提取菠菜嫩叶DNA,运用改良CTAB法提取6份菠菜品种的DNA,对AFLP反应体系的DNA用量、酶切连接、预扩、选扩等试验条件进行了优化分析,初步建立适合于菠菜作物的AFLP反应体系.结果表明:①在PCR仪中酶切的效果比水浴的要好,酶切反应对酶切时间和DNA的浓度要求不敏感.②菠菜AFLP预扩选扩体系的反应体积为20 μL,Mg2+ (25 mmol/L) 1.2 μL,dNTPs (2.5 mmol/L) 1.6 μL,Taq-polymerase (5 U/μL) 0.2 μL最佳.为菠菜AFLP分子标记的品种亲缘关系鉴定和遗传育种等提供一定的理论基础.  相似文献   

6.
大蒜ISSR-PCR反应体系的正交优化建立   总被引:2,自引:1,他引:1  
为探寻出更适宜大蒜的ISSR反应体系,以‘弥渡紫皮’大蒜为试材,对ISSR-PCR反应体系中的5个主要因素(dNTPs、Taq酶、Mg2+、引物浓度、模板DNA)在4个不同水平上进行正交设计L16(45)优化。结果表明,含10×PCR Buffer 2.5 μL、2.5 mmol Mg2+、0.15 mmol dNTPs、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.4 μmol引物、20 ng/μL模扳DNA的25 μL反应体系为大蒜的最佳反应体系。利用新建立的反应体系对20个不同大蒜品种进行扩增,具有极好的稳定性和重复性。  相似文献   

7.
吴芳  余懋群  龙海 《粮食储藏》2011,40(2):34-37
以谷蠹为研究对象,采用L16(45)正交组合实验和单因素梯度实验对MgCl2、dNTP、随机引物、Taq酶、模板DNA浓度和退火温度、循环次数等影响RAPD扩增的重要因素进行优化,以期建立最优的RAPD反应体系与程序。实验结果表明:各因素最适条件为:25μL PCR反应体系中,10×Buffer 2.5μL,MgCl22.5 mmol/L,dNTP0.4 mmol/L,随机引物960 pmol/L,Taq酶0.5 U,模板DNA 20ng;退火温度为37℃,循环次数为45次。在对谷蠹进行RAPD分析时,采用优化的反应条件,规范实验操作,使用同厂家同批次的试剂,实验结果就会具有很好的重复性和稳定性。  相似文献   

8.
茄子IRAP分子标记体系的建立与优化   总被引:2,自引:0,他引:2  
为确保茄子 IRAP 反应结果的稳定性和重复性.进而为茄子遗传多样性分析和品种鉴定提供可靠的新方法,按照已报道的马铃薯和烟草的反转录转座子 LTRs 保守区域设计 IRAP 引物,以茄子品系HL-01 为试材,对影响茄子 IRAP 反应的重要因素进行了初步研究,建立并优化了茄子 IRAP 分子标记技术体系.优化的茄子 IRAP 分子标记体系为20 (1反应液中,10×反应 bufrer (100mmol/L Tris-HCl,100mmol/L KCl,80mmol/L (NH4)2SO4,pH9.0,NP-40)2μl,2mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTPs,Taq 酶1.0U,0.4μ mol/L 引物,DNA 模板 50ng.PCR 反应程序为94℃预变性 4min,然后按 94℃变性 30s,45℃退火 30s,72℃延伸 2min,进行32个循环,最后72℃延伸 10min.  相似文献   

9.
砂珍棘豆ISSR-PCR反应条件优化研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
以砂珍棘豆(Oxytropis racemosa Turcz.)DNA为材料,应用分子标记技术,分析了DNA模板浓度、Mg2 浓度、引物浓度和dNTP浓度对ISSR-PCR扩增结果的影响,经优化试验建立了砂珍棘豆ISSR-PCR反应体系.20 μL PCR反应液含有的组分和终浓度分别为:20 ng DNA模板,1 U Taq酶,0.24 μmol/L引物,2.0 mmol/L MgCl2,0.15 mmol/L dNTPs.  相似文献   

10.
食用向日葵SSR-PCR反应体系的优化   总被引:1,自引:0,他引:1  
为建立食用向日葵分子标记反应体系,以食用向日葵四叶期叶片为DNA模板提取材料,采用单因素试验和正交试验设计,对SSR-PCR反应体系中的6因素(10×PCR Buffer、Mg2+、d NTPs、引物、Taq DNA聚合酶和DNA模板)在5水平上进行正交优化试验,并比较了不同浓度Mg2+、Taq DNA聚合酶、模板DNA对扩增效果的影响,结果表明,各因素水平变化对反应体系的影响为Mg2+Taq DNA聚合酶(引物)DNA模板10×PCR Bufferd NTPs。最终建立食用向日葵SSR-PCR最佳反应体系为:在总体系为20μL的SSR-PCR反应体系中包括10×PCR Buffer 0.2mmol/L、Mg2+2.0 mmol/L、d NTPs 1.8 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.2 U、DNA 50 ng、引物1.5 mmol/L。  相似文献   

11.
介绍了运用冷冻干燥技术进行速溶蛋花汤的加工,研究了生产工艺、特点以及影响产品质量的主要因素。试验表明,采用冷冻干燥技术加工的速溶蛋花汤,具有营养丰富、风味独特、方便快捷等特点。  相似文献   

12.
A new definition of inertia,i.e. the momentum is the measuring of inertia of matter, is proposed. The article through and etc., subjects, the correctness of the new notion of inertia:The monentum is the measuring of inertia has been demonstrated, and the unsolved contradictions of the traditional definition of inetia. And the mass is the measuring of inertia has been revealed.  相似文献   

13.
壳聚糖对石榴果汁澄清效果的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用壳聚糖的絮凝作用对壳聚糖在甜石榴汁澄清中的应用效果进行了研究,试验结果表明,壳聚糖用量为0.3g/L、澄清时间为60min、温度为35℃时,甜石榴汁透光率可达85%以上,且通过对壳聚糖处理前后可溶性固形物、总酸、VC等营养成分含量的比较,确定以上工艺参数为甜石榴汁澄清的最佳选择。  相似文献   

14.
香蕉是热带亚热带发展中国家重要的粮食作物和碳水化合物来源。但近年来,香蕉生产受到严重的病虫危害。大多数香蕉栽培品种是三倍体,生长周期长,而且不孕。由于没有种子,给繁殖和育种带来一定的困难。遗传转化技术的发展为香蕉品种的改良提供了一种有效的手段。香蕉的遗传转化方法有电激法、基因枪法、农杆菌介导法等。农杆菌介导法的应用是香蕉品种改良的一个重大突破。香蕉遗传转化的外植体也发展到多种,有原生质体,胚性细胞悬浮系,分生组织,以及横切薄片等。近几年,随着分子生物学的发展,出现了转化效率更高,重复性更好的香蕉遗传转化技术。如农杆菌和基因枪结合法,离心辅助农杆菌介导法、真空渗透技术等。这些新技术新方法的出现,必将推动香蕉产业高速发展。  相似文献   

15.
基于RS与GIS技术,利用景观生态学理论及景观格局指数对布尔津县土地利用现状进行定量分析。结果显示为:(1)布尔津县以草地、林地为主要景观类型,镶嵌着耕地、水域等景观类型。(2)四个分区(即高山区、丘陵区、平原区、荒漠区)的林地资源组成差异明显,耕地、居民、交通及工矿用地集中分布在丘陵区和平原区(3)从各项指数来看,高山区的多样性指数较低;平原区是受人文因素最多的区域,景观优势度低,各种土地利用类型比例差异不大,有利于生态可持续发展,但要合理的开发利用;荒漠区生态环境相对脆弱,要加强生态环境的保护与改善。通过该研究对布尔津县的土地利用现状作一个了解,为该县乃至整个地区的景观规划和可持续发展战略提供科学依据。  相似文献   

16.
以生长6~9 d的酸枣种子幼根为试验材料,0.7 mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定剂、pH值5.5~6.0、28℃恒温水浴条件下,以光学显微镜观察的水解总时间、初始产生原生质体的时间、原生质体产量及细胞碎片量为指标,研究通过酶水解来制备酸枣幼根原生质体的方法.结果表明,在含1%果胶酶+4%纤维素酶R-10+3%纤维素...  相似文献   

17.
影响核桃贮藏品质因素的分析   总被引:14,自引:2,他引:14  
介绍了几种核桃贮藏方法,综述了影响核桃贮藏品质的几个主要因素,以及针对上述影响因素提出若干解决对策.  相似文献   

18.
Efficiency of water use of early plantings of sunflower   总被引:4,自引:0,他引:4  
Rain fed crop production in Mediterranean environments depends to a large extent on strategies that avoid the intense summer drought. Early plantings of sunflower have given consistently higher yields in such environments, but the basis for such yield increases has not been explored. We conducted two field experiments at Cordoba (Spain) to investigate the effects of an early and a late planting date on the components of water-limited crop productivity; namely, water use (T), water use efficiency (TE) and harvest index (HI) of sunflower. The results were generalized by simulating rain fed sunflower yields, under early (1 January) and late (15 March) plantings, for a 25-year period with the aid of a simulation model of the Ceres type (OILCROP-SUN) which has been validated in Cordoba. Experimental seed yields of early plantings in 1989 and 1996 were 2.0 and 3.0 t ha−1, while late plantings yields were 1.3 and 2.4 t ha−1, for the 2 years. Average simulated yields were 2.7 ± 1.1 and 1.9 ± 0.7 t ha−1 for early and late plantings, respectively. For the 2 years, T of early plantings was higher than that of late plantings, but the response of TE and HI to planting date was not the same in the two experiments. In the simulation exercise, T and TE of early plantings were consistently higher than those of late plantings, while there were no differences in the HI for the two planting dates. We conclude that early plantings of sunflower increase rain fed yields by increasing both T and TE, while the impact of planting date on HI very much depends on the crop water stress pattern, which is quite variable from year to year even in the predictable Mediterranean environment.  相似文献   

19.
The cotyledon and hypocotyl of eight varieties of alfalfa( Medicago sativa L. )are used to study the effect of different cultivation procedures and genotypes on embryogenic callus and embryoid induction,plant development and transplant of alfalfa.The varieties of alfalfa with high embryoid induction rate and high differentiation rate are screened. A high frequency regeneration system for alfalfa tissue culture is established:which is benifical to the gene transformation of alfalfa.  相似文献   

20.
Based on the relation between the incipient yield pressure and the limit of yielding in cylinder according to the elastic disabled rule, a laboratorial method of determining limit of yielding of material is designed and a set of experimental data were gained by the method. The incipient yield pressure of the cylinder is gained by analyzing the experimental data, and then the limit of yielding is gained. The laboratorial method has a good reliability as the experimental value has a little error to the theory value. It has a definite engineering signification and theory value to research the mechanical capability of material and the disabled rule of high pressure vessel.  相似文献   

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