杆状病毒与抗凋亡基因的进化关系研究

截至2010年2月,已有50种杆状病毒完成了全基因组测序,为研究这些杆状病毒所包含的抗凋亡基因之间的关系,以及抗凋亡基因与其来源的宿主之间的进化关系,对抗凋亡基因进行了分类,并利用Clustal X软件对其进行序列比对,构建单基因进化树.分析结果显示,在已测序的杆状病毒中都包含抗凋亡基因,且绝大部分含有2个或2个以上的...     

昆虫杆状病毒及其应用研究进展

杆状病毒是一类具有双链、环状DNA的病毒，因其在生物防治方面具有宿主专一性强、对人畜无害、对环境安全和可自然传播等特点，而得到人们广泛的关注。本文概述了昆虫杆状病毒特征和作为表达系统的应用。野生型昆虫杆状病毒具有杀虫速度慢、稳定性差和宿主域窄等缺点，因此本文还介绍了通过基因工程改造野生型昆虫杆状病毒，以提高其作用效率和扩大杀虫谱的方法，同时对杆状病毒的应用前景做出了展望。     

MicroRNA在杆状病毒侵染过程中的功能研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的非编码RNA,约22 nt,是基因表达的关键调节因子,参与生物体中一系列重要的生物学过程。大多数DNA病毒编码miRNA,包括杆状病毒。杆状病毒由双链环状DNA组成,能特异性感染鳞翅目、膜翅目和双翅目等昆虫,在农业害虫防治和生物学研究中广泛应用。介绍了miRNA的生物合成和作用机制,并综述了杆状病毒感染宿主后病毒和昆虫宿主编码的miRNA以及其在杆状病毒侵染过程中的功能,为杆状病毒杀虫剂的研发和应用提供理论依据。     

杆状病毒的生态学和流行病学研究进展

杆状病毒作为杀虫剂应用,已成为生物防治中不可缺少的环节,也是一类重要的生物防治因子,但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一.文中就杆状病毒与宿主的关系,杆状病毒在环境中的存活、滞留与扩散等方面的流行病学研究进展做一总结.     

昆虫杆状病毒分子生物学及其应用研究的新进展

杆状病毒是昆虫专一性的病原病毒,具有重要的应用价值。首先,杆状病毒是昆虫杆状病毒表达系统的核心部分,该系统已在药物研发、疫苗生产等方面得到广泛应用。随着杆状病毒载体的不断改进,杆状病毒表达系统获得重组病毒的几率已从最初的0.1%~1%提高到现在的80%~90%,并且出现了一些新的宿主域扩大的杆状病毒载体。其次,杆状病毒是非复制型载体,且能高效表达目的蛋白,目前杆状病毒作为基因转移载体在基因治疗中已显示出良好的应用前景。此外,杆状病毒还是一类重要的微生物杀虫剂。重组杆状病毒杀虫剂及其安全性也是目前人们关注的焦点。综述了杆状病毒分子生物学及其最新应用进展。     

杆状病毒miRNA研究进展

MicroRNAs(miRNAs)是一类由内源基因编码的非编码单链小RNA分子,在转录后水平调控靶基因的表达。MiRNA在生物发育、病毒感染、细胞周期、宿主免疫及代谢等多种生命活动过程中有着重要的调控作用。杆状病毒miRNA的研究起步较晚,近10a来的研究表明,杆状病毒miRNA在促进病毒感染方面具有重要作用。本文从杆状病毒miRNA的鉴定、生物合成途径、生物学功能和持续性感染等方面进行了概述,并对杆状病毒miRNA的研究前景进行了展望。     

昆虫杆状病毒基因组学研究进展

杆状病毒(Baculoviruses)是一类在自然界中专一性感染节肢动物的共价闭合双链环状DNA病原微生物。由于杆状病毒的宿主特异性高,其作为无公害生物杀虫剂在生物防治方面发挥重大作用。此外,杆状病毒已被开发成为高效的真核表达载体,广泛应用于药物研发、疫苗生产等领域,并作为基因治疗载体用于疾病的基因治疗。综述了获得全基因组序列的昆虫杆状病毒类别及其序列特征,以及昆虫杆状病毒基因组中的主要功能基因,包括RNA转录相关基因、DNA复制相关基因、结构蛋白基因等,也对其应用做了较为详尽的阐述。     

VA菌根菌与宿主植物之间的相互作用

综述了VA菌根菌与宿主植物这一共生体系之间在生理、分子水平上的相互作用.     

家蚕基因工程载体研究新进展

基因工程分为将外源DNA整合到宿主染色体的种系转移和外源DNA不整合到宿主染色体的瞬时表达,用于家蚕基因工程的载体主要有两类,一类是基于转座子的载体:Minos转座子载体、Mosl元件载体和PiggyBac转座子载体。另一类是基于病毒的载体:杆状病毒载体S、indbis病毒载体和假型反转录病毒载体。家蚕种系转移主要采用piggyBac转座子载体,而外源基因的表达则主要采用杆状病毒载体和家蚕培养细胞组成的NPV-Bm表达系统,Sindbis病毒载体在家蚕RNA干涉的研究中显示出了诱人的前景。     

基因工程微生物农药——昆虫杆状病毒

昆虫杆状病毒也是一类重要的、较早应用的昆虫病原微生物。昆虫感染病毒很常见，杆状病毒科的宿主范围限定在一小部分节肢动物昆虫、一些甲壳类和螨类，然而，敏感昆虫包括许多害虫。杆状病毒占所有已知感染昆虫病毒的60％以上，它们对脊椎动物和植物不具致病性。目前至少已有600多种昆虫（主要是鳞翅目昆虫）和其它无脊椎动物中发现杆状病毒感染，并常常在引起昆虫流行病，也是调节昆虫种群密度的重要病原因子。     

昆虫激素与杆状病毒

近年来,提高杆状病毒表达载体系统外源基因表达量是一研究热点。本文综述了昆虫激素对杆状病毒寄主蛋白质合成的调控作用,杆状病毒基因组内egt基因的结构功能和表达,并综述了昆虫激素与杆状病毒之间的相互影响,以现有试验结果为依据,提出了利用外源昆虫激素提高杆状病毒表达载体系统表达量的途径。     

乙型脑炎病毒非结构蛋白的表达及与hnRNP K的相互作用

【目的】为探明JEV病毒复制与宿主蛋白的关系。【方法】首先构建非结构蛋白质粒,然后将构建成功的非结构蛋白的质粒转染至Vero细胞中,24 h在荧光显微镜下观察蛋白表达情况,再分别与pCMV-MYC-hnRNP K质粒同时转染至Vero细胞中,培养24 h,收取细胞蛋白样,进行Co-IP试验相关步骤,用Western-blot实验进行结果呈现,得出试验结果。【结果】构建的非结构蛋白质粒在Vero细胞中可以表达,通过与表达hnRNP K蛋白的质粒共转染,通过Co-IP试验经Western-blot结果分析能够得出JEV的NS1与hnRNP K之间存在相互作用,JEV的NS2a、NS3、NS5与宿主hnRNP K之间不存在相互作用。【结论】JEV的NS1蛋白与宿主蛋白hnRNP K存在相互作用,为JEV非结构蛋白的研究进一步拓宽了思路,同时为JEV病毒在宿主细胞中的生命活动周期的研究提供了基础,为深入研究JEV病毒复制提供了新方向。     

重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP诱导Sf9细胞凋亡的机制分析

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒是一种模式杆状病毒,在农业虫害防治中广泛应用。其表达的PK2蛋白可以通过竞争性的与宿主细胞e IF2α激酶结合形成异源二聚体,抑制其磷酸化e IF2α,从而加速病毒增殖、诱导细胞凋亡。为了探讨PK2诱导宿主Sf9细胞凋亡的机制,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP。Western blot分析结果表明,重组病毒AcMNPV-PK2-RFP处理组在病毒侵染后48,60,72 h,宿主细胞内凋亡因子SfP53蛋白的表达量显著高于AcMNPV处理组,分别是AcMNPV处理组的1.16倍、1.39倍和1.79倍;在病毒侵染后48,72 h,AcMNPV-PK2-RFP处理组反映线粒体膜电位的绿色荧光分别是野生处理组的1.54倍和1.89倍,表明AcMNPV-PK2-RFP处理组的线粒体膜电位显著低于野生病毒处理组;同时,观察到AcMNPV-PK2-RFP处理组线粒体中的细胞色素c从病毒侵染后12 h开始释放。结果说明,过表达PK2的重组病毒AcMNPV-PK2-RFP可在感染后期加速SfP53蛋白的表达,通过影响线粒体凋亡信号通路加速宿主Sf9细胞的凋亡,同时表明重组病毒AcMNPV-PK2-RFP是一种相比野生型病毒抗虫活性更高的杀虫剂。     

猪圆环病毒3型与宿主相互作用机制研究进展

猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3, PCV3)从2015年发现至今已在全世界多个国家和地区的养猪业被检出，是重要的新发猪病病原体。目前有关PCV3致病机制的研究有限，大部分集中于PCV3的流行病学调查、基因组演化分析和检测方法建立。猪圆环病毒(porcine circovirus, PCV)与宿主之间关系紧密且复杂，二者的相互作用决定宿主细胞的命运和病毒的传播与存活。部分学者通过瞬转表达系统、临床分离和反向遗传学技术从病毒组分或全病毒水平对PCV3与宿主相互作用展开研究。本文系统阐述宿主细胞对PCV3感染的应答机制、PCV3-宿主蛋白的相互作用，以及PCV3生命周期的研究结果，将有助于进一步了解PCV3及其致病机制。     

家蚕生长阻遏肽结合蛋白与杆状病毒P13蛋白互作关系的研究

为探明生长阻遏肽结合蛋白(Growth blocking peptide binding protein,GBPBP)与杆状病毒P13蛋白的互作关系,以家蚕Bombyx mori Linnaeus为供试昆虫,采用GST pull-down试验的方法,检测了家蚕生长阻遏肽结合蛋白(BmGBPBP)与黏虫核型多角体病毒P13蛋白(LsP13)间的相互作用。结果表明,GBPBP蛋白与P13蛋白发生了结合反应,暗示两者生理功能之间具有一定的联系。     

小菜粉蝶颗粒体病毒lef-3基因的克隆与分析

 【目的】研究杆状病毒lef-3基因的起源与进化,从分子水平明确病毒之间的亲缘关系。【方法】通过常规PCR方法获得小菜粉蝶颗粒体病毒晚期基因表达调控因子lef-3的基因片段,克隆后测序,然后利用软件对lef-3及编码序列进行生物信息学分析。【结果】克隆得到的PiraGV lef-3基因ORF序列中存在4个突变位点,但氨基酸性质未发生改变,推导PiraGV LEF-3蛋白含399个氨基酸残基,分子量为3.99 kD;通过高级结构预测及其编码序列与其它杆状病毒的LEF-3同源性比对表明,该基因可能编码单链DNA结合蛋白;BLAST比对发现lef-3基因只存在于鳞翅目昆虫为宿主的杆状病毒基因组;进化分析表明LEF-3可分为3组,其中GV属的LEF-3聚类为1个组,NPV属的LEF-3聚类为2个组;GV的lef-3基因编码区的选择压力分析表明,大多数lef-3基因间相比较表现为负向选择,但不同lef-3基因间的Ka/Ks不同,也有正向选择;起源分析表明,杆状病毒lef-3基因可能来源于细菌。【结论】获得了小菜粉蝶颗粒体病毒（PiraGV）lef-3基因,通过生物信息学分析推测出了lef-3基因的起源进化规律。     

轮状病毒入侵细胞机制的研究进展

轮状病毒（Rotavirus,RV）是引起婴幼儿腹泻死亡的主要病原体之一,是一种没有外膜的RNA病毒,由3层同心的蛋白质衣壳包被双链RNA基因组构成。RV入侵宿主细胞是一个有机的多步骤过程,有多种受体参与,其作用机理还不完全清楚,目前认为,病毒与宿主细胞表面受体之间至少存在4种相互作用关系。     

罗非鱼无乳链球菌传播途径与逃避宿主免疫防御策略

罗非鱼是我国重要的养殖鱼类之一,近年来频繁暴发的链球菌病严重影响了我国罗非鱼养殖业的健康发展。无乳链球菌是罗非鱼链球菌病的主要病原之一,阐明其感染机制和免疫逃避机制,对预防与治疗该病至关重要。对鱼源无乳链球菌的侵染途径、肠道的定植策略以及逃避宿主免疫监视机制等方面的研究成果进行综述,为深入研究无乳链球菌与宿主之间的相互作用提供参考,为罗非鱼链球菌病的综合防控奠定理论基础。     

几种核型多角体病毒感染性的检测

通过共转染法获得重组绿色荧光蛋白GFP基因的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcMNPV,并通过检测荧光的产生来分析昆虫是否受到感染。观察多种病毒组合感染的BmN细胞,分析病毒对细胞的影响规律,从而了解不同病毒在同一宿主体内的相互作用情况。结果表明,亲缘关系较近的病毒之间更容易相互感染。该结论可以对宿主域拓展的研究提供有价值的信息。     

以luxAB为报告基因的大豆根瘤菌的竞争结瘤研究

 将来自pHN101的luxAB基因和来自pTR102的parCBA /DE基因,经过一系列中间载体整合到PLAFR3上构建成广宿主、稳定性质粒PHN158。通过三亲本杂交将pHN158导入费氏中华根瘤菌得到4株能在癸醛的激发下发出荧光的转移接合子WZRL、HWRL、HZRL和WWRL。将它们与3株大豆慢生根瘤菌WHB1、WHB2和WWB组配成12对组合,并以黑龙33和Williams为宿主以luxAB为报告基因进行竞争结瘤试验。结果表明,费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的平均竞争结瘤能力相当;同类型根瘤菌不同菌株之间的竞争结瘤能力存在着显著的差异;同时根瘤菌的竞争结瘤能力也明显受到宿主的影响。表明费氏中华根瘤菌与大豆慢生根瘤菌之间的竞争结瘤是一个菌株之间、菌植之间复杂的相互作用的过程。