自然流产胚胎绒毛组织hsa-miR-26a表达研究

以正常绒毛为对照,通过qRT-PCR检测自然流产胚胎绒毛组织中hsa-miR-26a的表达水平;利用基因表达谱芯片筛选自然流产胚胎绒毛的差异表达基因,并使用Targetscan预测这些差异表达基因中可能为hsa-miR-26a所调控的靶基因.结果显示hsa-miR-26a在自然流产胚胎绒毛中表达上调,差异表达基因中hsa-miR-26a可能调控的靶基因有2个:白血病抑制因子(LIF)和结缔组织生长因子(CTGF).hsa-miR-26a可能通过转录后调控着床相关基因LIF的表达,进而调节HCG水平,影响妊娠结局.     

自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用,取正常妊娠（6W～11W）人工流产子宫蜕膜组织30例,自然流产蜕膜组织30例,利用RT-PCR,原位杂交,免疫组织化学,蛋白印迹,免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测.结果表明：STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势,但差异无统计学意义（p〉0.05）,流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组（p〈0.05）.说明在自然流产子宫蜕膜组织中,STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入,这可能是诱发流产的原因之一.     

淋巴细胞免疫治疗原因不明复发性流产33例临床观察

目的观察原因不明复发性流产（URSA）患者采用淋巴细胞免疫治疗后体内抗微淋巴细胞毒抗体（APCA）水平的改变及妊娠成功率。方法 63例APCA阴性的URSA患者分为实验组（n=33）和对照组（n=30）,实验组给予丈夫或无关个体的外周血淋巴细胞免疫治疗及常规保胎治疗,对照组只进行常规保胎治疗,比较两组治疗前后APCA水平的变化及妊娠成功率。结果实验组治疗后的APCA水平为（13.67±4.25）%,明显高于治疗前的（6.25±2.78）%,差异有统计学意义（P〈0.01）;对照组的APCA水平治疗前后则差异无统计学意义（P〉0.05）。实验组33例中,足月分娩＋妊娠〉28周者共23例,妊娠成功率为69.7%;对照组足月分娩＋妊娠〉28周者共6例,妊娠成功率为20.0%。两组的妊娠成功率差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 URSA患者体内存在低水平的APCA,淋巴细胞免疫治疗可明显提高患者体内APCA水平,提高母体免疫耐受,提高妊娠成功率。     

自然流产蜕膜组织STAT1表达及其生物学意义研究

为了探讨信号传导子及转录激活子1在胚胎植入过程中的作用, 取正常妊娠(6W～11W)人工流产子宫蜕膜组织30例, 自然流产蜕膜组织30例, 利用RT-PCR, 原位杂交, 免疫组织化学, 蛋白印迹, 免疫荧光化学方法对流产组与正常妊娠蜕膜中STAT1进行定性定量检测. 结果表明: STAT1在正常妊娠6W～11W蜕膜表达呈逐渐降低趋势, 但差异无统计学意义(p＞0.05), 流产组蜕膜STAT1平均表达量显著高于正常妊娠组(p＜0.05). 说明在自然流产子宫蜕膜组织中, STAT1高表达可能通过促进蜕膜细胞过度凋亡和抑制细胞增殖而影响胚胎正常植入, 这可能是诱发流产的原因之一.     

血雌二醇监测在治疗不明原因性早期复发性流产中的意义

目的了解血雌二醇监测在治疗不明原因性早期复发性流产中的作用。方法 35例不明原因性早期复发性流产患者分A组（15例）和B组（20例）,根据血雌二醇（E2）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）和孕酮（P）监测结果调整用药量,A组单给予HCG和黄体酮安胎,B组给予HCG、黄体酮加戊酸雌二醇安胎,另选孕龄相同正常孕妇20例作为对照组。结果在孕4~5周,A、B组的血E2、HCG和P水平均明显低于对照组（P〈0.01）;在孕6~7周,A组的血E2水平仍分别低于对照组和B组（均P〈0.05或0.01）,A、B组的血P水平则均高于对照组（P〈0.01）;在孕8~9周,A、B组的血P水平仍均高于对照组（P〈0.05）。B组在孕6~7、8~9、10~12周继续妊娠率均高于A组（均P〈0.05）。结论血E2水平监测在不明原因性早期复发性流产患者安胎治疗中具有重要的指导作用,对于血E2水平低患者给予适量戊酸雌二醇治疗是必需的。     

家兔绒毛的显微结构研究

[目的]了解家兔绒毛的显微形态结构,[方法]选择具有典型特征的单根家兔绒毛,从尖部到根部对其进行显微结构观察,并检测其纤维直径.[结果]家兔绒毛的毛尖由鳞片层和皮质层组成,无髓质层;中部一般由鳞片层、皮质层和髓质层组成;根部无髓质层,鳞片层呈麦穗状.这是家兔绒毛的特性,可用于与其他动物纤维的比较研究及种类鉴别.兔毛具有发达的髓质层,纤维直径与髓腔列数成正相关.绒毛一般为单列,粗毛为多列.单根兔绒的尖部最细,中部变粗,根部又变细,且各部分直径差异较大,外形生长特性呈纺锤形.[结论]利用生物显微镜法鉴别不同动物毛皮及其产品种类是较为客观、简便的方法.     

彩色多普勒阴道超声照射对人早孕胚胎绒毛超微结构的影响

目的 探讨彩色多普勒阴道超声不同照射时间对人早孕胚胎绒毛超微结构的影响.方法96例拟行人工流产的早期妊娠孕妇患者随机分为A、B、C、D、E组,分别采用彩色多普勒阴道超声照射0、5、10、15、20 min.6～8 h后行人流术取绒毛,透射电子显微镜观察.结果 阴道超声引起的胚胎绒毛超微结构变化主要发生在合体滋养层,其次是细胞滋养层,间质改变最少,基膜基本无改变.A组超微结构正常,B～E组胚胎绒毛超微结构均有不同程度变化,其中D组变异率高于A～C组(P＜0.05),E组变异率高于A～D组(P＜0.05).结论 阴道彩色多普勒持续照射超过10 min对人早孕胚胎绒毛超微结构有明显影响.     

绒毛白蜡微体快速繁殖的研究

本文对绒毛白蜡微体快速繁殖技术进行了研究,试验采用单芽茎段作为外植体,结果表明:BA、GA、活性炭、碳源对嫩梢增殖生长有影响,MS BA_(3.0-4.0) IBA_(0.1) 蔗糖3—4.5%最利于嫩梢的形成。间苯三酚、IBA浓度和光照影响根的诱导,MS IBA_(1.5) PG_(60-120) 蔗糖3%最利于生根,黑暗条件下能提高生根率,提早生根时间。本文还提出了绒毛白蜡微体快速繁殖的优化技术程序。     

绒毛白蜡松散型胚性愈伤组织的诱导

以绒毛白蜡组培苗茎段为外植体,建立绒毛白蜡松散型胚性愈伤组织诱导体系,为绒毛白蜡遗传转化与离体诱变等研究奠定基础。试验结果显示：幼嫩茎段在WPM+0.5 mg·L^-12,4-D+5 mg·L^-1GA₃+30 g·L^-1蔗糖的培养基上可诱导出理想的松散型愈伤组织;将松散型愈伤组织在MS+0.5 mg·L^-12,4-D+1.0 mg·L^-1KT+30 g·L^-1蔗糖的培养基上继代培养,每15 d继代1次,继代时选择结构松散质地较硬的愈伤组织,3次继代培养后,可获得绒毛白蜡松散型胚性愈伤组织。     

绒毛白蜡不同无性系光合特性的研究

以12个绒毛白蜡无性系4a生苗木为试材,进行光合特性研究。结果表明:12个绒毛白蜡无性系间光合特性差异较大,其中净光合速率、蒸腾速率、胞间CO2浓度和水分利用效率差异达到显著水平。不同光合指标间的相关性也存在差异。净光合速率与蒸腾速率的正相关性较强,净光合速率、蒸腾速率与气孔导度的遗传和环境具备正相关性;水分利用效率与净光合速率存在一定正相关性,与蒸腾速率呈一定负相关性;细胞间隙CO2浓度与气孔导度存在正相关性,与净光合速率和蒸腾速率均呈一定负相关。树高、胸径和材积等生长指标与净光合速率和蒸腾速率均呈负相关。光合指标作为绒毛白蜡无性系良种早期选育指标是否适宜有待进一步研究。     

陆地棉胚珠及纤维发育过程中miRNA分离与鉴定

microRNA(miRNA)是生物中一类起负调控作用的非编码的小分子RNA,主要在转录后水平上调节生物体的生长与发育。直接克隆法是鉴定植物中miRNA最常用也是最有效的方法之一。利用直接克隆法分离了陆地棉开花后0~10 d(days post anthesis, DPA)胚珠中总RNA,从中筛选17~24 nt小分子RNA构建cDNA文库,对初筛得到的阳性克隆进行测序。通过与miRNA数据库比对,最终获得4个保守的miRNA。进一步对他们的转录表达进行分析,发现所有miRNA在棉花胚珠纤维不同发育时期均能表达。其中miR167a、miR172c和miR394b在棉花幼苗的根茎叶中有不同程度的表达。预测得到55个miRNA的靶基因,多数靶基因编码转录因子、代谢酶类以及发育相关蛋白,进一步证明miRNA参与调控棉花纤维的形态建成、发育等各项生理活动。     

miRNAs在植物色泽调控中的研究进展

色泽是影响植物外观品质及其商品价值的重要因素,目前关于植物色泽的研究主要集中于生理生化及转录水平上,而在转录后水平上报道较少。microRNA(miRNA)是一类在真核生物中广泛存在的非编码单链RNA分子,它可以通过对靶标mRNA的互补配对而降解或抑制m RNA的翻译,从而在转录后水平上对基因的表达进行负调控。简述了miRNA的作用机理,并对近几年miRNA在植物色泽调控中的研究进展进行了综述,以期为植物色泽在转录后水平上的调控奠定基础。     

SPRN0/0型小鼠与C57BL/6野生鼠大脑中miRNAs的差异表达

应用荧光定量PCR及基因芯片技术,检测小分子RNA(microRNA,miRNA)在SPRN0/0型小鼠与C57BL/6野生鼠大脑中的差异表达,探讨SPRN基因敲除后小鼠大脑中miRNAs相对表达变化,对检测部分差异表达的rmiRNAs进行验证.结果表明:与正常标本相比,SPRN0/0型小鼠大脑中miR-135a、-24-2*、-146a、-7a、-380、-448、-128和-152的表达量均显著下调,其中miR-24-2*、-380、-448、-152均下调1/10以上,miR-135a、-146a、-7a均下调1/2以上.miRNAs的这些变化可能与Shadoo蛋白的生理功能有关.     

盐胁迫条件下不同耐盐棉花miRNA差异表达研究

植物miRNAs在基因表达、生长发育和抵抗胁迫等方面有十分重要的作用。本试验以耐盐棉花品系山农91—11和盐敏感棉花品种鲁棉6号为试材,利用miRNA基因芯片杂交技术,分析盐胁迫条件下棉花幼苗miRNA的差异表达。结果表明：在盐胁迫条件下,共有27个miRNAs在山农91—11和鲁棉6号之间差异表达,其中山农91—11比鲁棉6号表达上调的miRNAs有11个,其中功能已知的10个分别属于miR156、miR164、miR167、miR397和miR399家族,表达下调的miRNAs有16个,其中功能已知的2个属于miR156、miR1l72家族。对这些miRNA家族作用的靶基因进行分析表明,这些miRNAs参与植物逆境条件下的信号传导,可能对棉花耐盐机制有重要作用。     

牦牛BoLA-I基因mRNA及其相关miRNAs在牦牛不同组织器官中表达分析

为了解牦牛BoLA-I基因mRNA组织表达谱,并探索可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,利用RT-PCR技术对牦牛BoLA-I基因mRNA在牦牛肝、脾、肺、肾、肌肉、卵巢、小肠、下颌淋巴结、大肠和肠系膜淋巴结等10种组织的表达谱进行分析,再通过Targetscan和miRBase软件来预测可能靶定BoLA-I基因的miRNAs,检测其在10种牦牛组织中的表达情况。结果表明:BoLA-I基因mRNA在检测的10种牦牛组织中均有表达,尤其在免疫器官组织中广泛表达,在牦牛的肠系膜淋巴结组织表达水平极显著高于小肠和大肠组织(P0.01);预测到的可能靶定牦牛BoLA-I基因的miRNA共有28个,从中选择了6个进行组织表达谱分析,发现bta-miR-759、bta-miR-142-5p、bta-miR-665、bta-miR-2322-5p、bta-miR-199a-3p与牦牛BoLA-I基因共表达;除卵巢外,bta-miR-219-5p在其他组织中均有表达,且在肝脏组织中的表达水平极显著高于其他组织(P0.01)。bta-miR-142-5p在肠系膜淋巴结中表达量极显著高于其他组织(P0.01)。由此推测,牦牛BoLA-I基因及其预测的miRNA可能在牦牛组织中起重要作用。     

湖羊羔皮毛囊候选miRNA在不同花纹间的表达与毛囊发育特性关联的研究

【目的】通过前期高通量测序技术结合生物信息学分析研究湖羊大花、中花和小花羔皮毛囊间miRNA的差异表达,筛选出了14个候选miRNA,现进一步研究14个候选miRNA在不同花纹组间的表达量与毛囊各指标的相关性,以了解候选miRNA与毛囊发育特性间的关联,筛选用于后期功能验证的miRNA。【方法】利用高通量测序技术筛选湖羊大花、中花、小花不同花纹羔皮毛囊中的差异表达miRNA。利用与高通量测序同一批样品所提取的RNA进行RT-RCR验证,随机选取高通量测序结果中的5个差异表达miRNA,验证高通量测序结果的可靠性。通过荧光定量PCR技术检测14个候选miRNA在不同组别间的表达量,制作不同花纹羔皮组织的石蜡切片以评估不同毛囊的结构,并结合组织学观察与显微观测技术,采用SPSS 17.0分析14个候选miRNA的表达水平与毛囊组织学性质的相关性。【结果】湖羊毛囊成群分布,以3毛囊群的居多,直径较大的为中心初级毛囊,直径较小的为侧部次级毛囊。在显微镜相同视野中,湖羊大花、中花和小花3种不同类型花纹羔皮的初级毛囊数差异不显著（P＞0.05）,小花组的次级毛囊数多于大花组和中花组的次级毛囊数且差异极显著（P＜0.01）,中花组与小花组二者次级毛囊数相仿,差异不显著（P＞0.05）,在相同的单位面积中,小花的毛囊总数要高于大花组和中花组;大花组的初级毛囊直径比中花组和小花组的初级毛囊直径要大的多,与中花组和小花组的初级毛囊直径差异极显著（P＜0.01）,大花组的次级毛囊直径也比中花组、小花组的次级毛囊直径大,同时也与二者均呈极显著差异（P＜0.01）,中花组和小花组二者的初级毛囊直径以及次级毛囊直径均差异不显著（P＞0.05）;在已知的miRNA中,miRNA-143在大花组中的表达量与小花组差异极显著（P＜0.01）,miRNA-10a在小花组的表达量与大花和中花组差异显著（P＜0.05）,let-7i在大花组的表达量与中花组差异显著（P＜0.05）;在测序新预测的差异miRNA中,NW_004080184.1_6326在中花组的表达量与大花组差异显著（P＜0.05）、与小花组差异极显著（P＜0.01）,NW_004080165.1_8572在中花组的表达量与大花组和小花组差异极显著（P＜0.01）,NW_004080181.1_3961在中花组的表达量与小花组差异极显著（P＜0.01）,NW_004080190.1_13733在中花组的表达量与大花组差异极显著（P＜0.01）,其余miRNA在大、中、小花中的表达差异不显著。14个miRNA的相对表达量均与毛囊部分指标存在相关性,表明I4个miRNA均有可能参与毛囊的生长发育。【结论】 miRNA-143、miRNA-10a、let-7i、NW_004080184.1_6326、NW_004080165.1_8572、NW_004080181.1_3961以及NW_004080190.1_13733 等7个miRNA可作为对湖羊羔皮毛囊发育具有重要影响的候选miRNA,在后续试验中将进一步验证。     

基于高通量测序的低温胁迫下赤桉miRNAs的挖掘与分析

目的 预测、挖掘和分析涉及赤桉Eucalyptus camaldulensis低温胁迫应答的miRNA,为研究其调控赤桉低温胁迫应答的分子网络奠定基础。方法 采用高通量测序对低温处理组和对照(CK)组的赤桉组培苗茎尖进行小RNA测序。以miRBase21.0、Rfam14.1和巨桉E. grandis基因组为参考数据库,利用Bowtie、miREAP和miRDeep2等软件进行miRNA预测,使用RNAfold对预测到的miRNA前体进行二级结构的折叠;采用psRNATarget预测靶基因,通过DEGSeq包分析差异表达的miRNA,并对它们进行GO注释和KEGG富集分析。结果 在赤桉中,共预测到隶属于54个家族的392个已知miRNA和97个新miRNA;其中,CK组共预测到282个已知miRNA,65个新miRNA;低温处理组共预测到329个已知miRNA,51个新miRNA。挖掘到80个在低温处理下显著差异表达的miRNA,包括55个上调和25个下调。GO基因功能注释和KEGG富集分析的结果表明,这些差异表达miRNA可能通过参与代谢通路、次生代谢物的生物合成、细胞膜的改变、信号转导和生物调节等响应低温胁迫。此外,还挖掘到25个可能与ICE1-CBFs-COR通路有关的miRNA。结论 借助高通量测序和生物信息学软件初步得到了低温胁迫下差异表达的赤桉miRNA,为进一步分析这些miRNA在赤桉低温胁迫中的分子功能提供一些参考。     

绒山羊胚胎期次级毛囊发生发育相关miRNA的筛选及靶基因验证

为筛选绒山羊次级毛囊发生发育相关microRNA(miRNA)及靶基因验证,本研究基于课题组前期高通量测序技术得到绒山羊胎儿期(45、55、65、75、95、115和135 d)皮肤组织miRNA表达谱的基础上,鉴定各比对组中差异表达的miRNA并根据毛囊形态发生规律筛选次级毛囊发生发育相关的miRNA,运用RNAhybrid、miRanda和TargetScan软件预测筛选到的miRNA靶基因并与次级毛囊发育相关基因取交集,所得基因进行GO和KEGG富集分析,筛选毛囊发生发育重要通路中的关键基因构建miRNA-mRNA调控网络,进而运用双荧光素酶报告验证关键miRNA-mRNA的靶向关系。结果表明:1)筛选到次级毛囊发生发育相关miRNA 153个,共预测到32 978个靶基因;2)取交集后得到1 352个靶向的次级毛囊发生发育相关的基因,且显著富集在29条KEGG通路中,其中毛囊发生发育重要通路TGF-β同样显著富集;3)构建了chi-miR-26b-5p-SMAD1和 chi-miR-495-3p-SMAD1等232对次级毛囊发生发育可能相关的miRNA-mRNA关系对,双荧光素酶报告系统进一步验证了关键靶向关系。本研究为解析miRNA在绒山羊次级毛囊发育过程中的分子机制奠定了前期基础。