高产纤溶酶菌株的筛选及鉴定

以脱脂奶粉作为初筛底物,纤维蛋白作为复筛底物,透明圈作为筛选标记,从高温大曲、酒糟、窖泥等材料中筛选出产纤溶酶的菌株15株,得到1株产纤溶酶较高的菌株GZHZⅥ-7,经鉴定为枯草芽孢杆菌,其发酵液酶活力(相当尿激酶酶活力单位)为1 348.96 U/mL。     

豆豉纤溶酶产酶菌的筛选及菌种保藏

[目的]从豆豉产品中筛选分离活性较高的豆豉纤溶酶产酶菌,并对菌种进行保藏。[方法]用自制的猪血粉为底物配制筛选培养基进行豆豉纤溶酶产酶菌的筛选,然后根据水解圈的大小筛选活性高的产酶菌株,最后将其保藏于LB培养基中。[结果]成功从湖南、广东、江西等地产的豆豉中筛选到一株溶栓活性相对较高的产酶菌。[结论]该研究为新型溶栓药物的开发奠定了基础。     

豆豉纤溶酶高产突变株的选育

[目的]从豆豉中筛选出高产纤溶酶的菌株,并通过平板筛选得到高产突变株。[方法]从6种不同豆豉样品中,筛选得到具有较高纤溶酶活性的菌株,采用物理化学诱变方法进行复合诱变,再利用纤维蛋白平板对诱变后菌株进行筛选。[结果]得到1株高纤溶酶活力菌株,命名为DC-YC41,酶活达到742 IU/ml。[结论]初步判断,得到的这株高纤溶酶活力菌株为枯草芽孢杆菌。     

产纤溶酶菌株的分离筛选

以脱脂奶粉作为初筛底物,纤维蛋白作为复筛底物,透明圈作为筛选标记,从肉联厂,污水沟等地筛选出产纤溶酶的菌株40株,从中筛选出产酶活力最高的2号菌株,将其编号为ZLW-2,并采用改进的紫外分光光度法测酶活,提高了酶活测定的精确性,对提高纤溶酶产生菌的筛选效率有重要意义。菌株ZLW-2的发酵过程研究表明,纤溶酶是在菌体大量生长以后酶活力才开始增加。     

高活性纤溶酶菌株筛选与基因克隆表达

本研究以本实验室曾在酒曲、酒糟、窖泥等样品中分离的具有酱香味的13株菌株作为出发菌株,经脱脂奶粉平板、纤维蛋白双层平板筛选出纤溶酶活性最高的菌株GZHZ_(V-8),结合形态学特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ_(V-8)菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。以GZHZ_(V-8)菌株总DNA为模板扩增出纤溶酶基因的编码区,与pMD18-T载体连接、转化至大肠杆菌(Escherichia coli) DH5α,分析表明纤溶酶基因开放阅读框包含1092 bp碱基,编码363个氨基酸。纤溶酶基因与表达载体pET-22b(+)连接转化至E.coli BL21中表达,表达菌株经IPTG诱导表达分泌活性纤溶酶,培养后测得发酵上清液、菌体细胞破碎上清液和菌体细胞破碎沉淀的纤溶酶活力分别为613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL。     

高产纤溶酶菌株的诱变育种及产酶条件的响应面法优化

以解淀粉芽孢杆菌GZJSr-12作为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍复合诱变,筛选得到突变株GZJS1-12-7,其产纤溶酶活力为2046.44 IU/mL,是出发菌株GZJSr-12的1.51倍.结合Plackett-Burman设计法和响应面分析法,对GZJSr-12-7合成纤溶酶的发酵条件进行优化.结果表明,初始MgSO4浓度、发酵温度和NaH2PO4浓度是影响纤溶酶发酵产量的主要因素,优化后的发酵条件为葡萄糖30 g/L、蛋白胨10 g/L、吐温-80 5 g/L、CaCl2 0.4g/L、MgSO4 0.847 g/L、Na2HPO4 2g/L、NaH2P04 6.988 g/L、pH 9.0,接种量4％,种龄21h,温度31.3℃,每250 mL装液量50 mL,转速150 r/min.在此条件下,纤溶酶产量为4 789.08 IU/mL.     

牛肉酱纤溶酶产生菌发酵条件的优化

对从牛肉酱中筛选出来的一株产生纤溶酶的枯草芽孢杆菌BC-3进行了优化培养。结果表明,该菌株最适培养基配方为:豆粕粉3%、玉米粉3%、MgSO40.05%、CaC l20.02%、吐温-80 0.1%;最适发酵条件:温度30℃,初始pH值6.8,发酵时间96 h。该菌株在最适条件下1 m l发酵液的纤溶酶量相当于2 620尿激酶单位。     

产纤维素酶菌株的筛选及产酶条件的选择

采用摇床液体发酵试验,对18个菌株产纤维素酶进行滤纸酶活性、CMC酶活性、β-葡萄糖苷酶活性测定,筛选出1株产纤维素酶活性较高的菌株(C真3),并通过正交试验,确定该菌株的最优产酶条件.结果表明,最佳组合条件是液体发酵时间7d,摇床培养温度30℃,起始粗酶发酵培养基pH值5.5.     

Bacillus subtilis Z-3菌株纤溶酶的分离纯化研究

为获取微生物源溶栓药物,从土壤中获得产纤溶酶活性较高的1株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Z-3。从Z-3菌株的发酵液中提取纤溶酶,利用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和聚丙烯酰凝胶电泳等方法,对纤溶酶进行分离纯化。分离纯化得到1个单一组分(BSFE-1),SDS-PAGE电泳检测为单一条带,BSFE-1表观分子量为48 kDa,等电点为10.5,属丝氨酸蛋白酶类,纤维蛋白平板法检测纤溶酶活性BSFE-1的比活力为4 494.099 U/mg,BSFE-1在4~50℃和pH 4~11之间活性较稳定。     

产纤维素酶真菌菌株的分离筛选及产酶条件优化

【目的】由于真菌的纤维素酶系较全,且可分泌至胞外,易分离,所以试验致力于筛选高产纤维素酶真菌菌株.【方法】利用羧甲基纤维素钠培养法、刚果红染色法、纤维素酶活性测定法从样品中分离筛选出产纤维素酶菌株,同时结合菌落形态观察、显微镜观察和ITS序列同源性分析进行鉴定.【结果】通过初筛,筛选出15株Hc值较大的产纤维素酶真菌菌株,再经过液体发酵复测羧甲基纤维素酶活和滤纸酶活,筛选出一株产纤维素酶活最高的菌株B-2-3,经鉴定B-2-3为烟曲霉(Aspergillus fumigatus),其羧甲基纤维素酶活为2 341.76U/mL,滤纸酶活为398.18U/mL.经过产酶条件优化,确定其最适产酶条件为温度25℃、接种量4μL、蛋白胨0.5~0.6g/L、CMCNa 0.3~0.35g/L、pH 6.5.【结论】筛选出一株产纤维素酶活较高的烟曲霉菌株B-2-3.     

一株猪粪降解菌的筛选、评价及鉴定

发酵床是目前国内规模化养猪企业广泛采用的粪污处理模式,其关键在于投加的微生物菌剂。为了分离出能高效降解猪粪的菌株,采用NH₃选择性培养基对土壤微生物菌株进行初筛,共得到7株氨氮降解率大于70%的菌株。通过猪粪发酵模拟实验对分离株的NH₃抑制效果进行初步评价,结果表明,7株菌株均能不同程度地减少猪粪发酵过程中氨的释放量,其中Z10菌株的NH₃抑制效果最为显著。针对猪粪除臭及促进猪粪腐熟效果开展了Z10菌株应用效果评价。除臭试验结果显示,Z10菌株对猪粪臭气中NH₃与H₂S均有较好的抑制作用,在21 d发酵周期内, NH₃与H₂S的释放量较对照组分别减少了38.66%与50.03%。促腐熟试验结果显示,Z10组种子发芽率与发芽指数分别达到了83.33%与88.55%,而对照组发芽率与发芽指数仅为68.35%与59.12%。生化鉴定显示,Z10菌株无蛋白酶活性,具有较弱的糖化酶、淀粉酶及脂肪酶的活性,但表现出较强纤维素降解活力,其纤维素酶活力达到232.543 U·mL^-1,推测Z10菌株表现出的促腐熟效果主要源于其高纤维素降解活力。16S rDNA分子鉴定结果显示该菌为烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)。     

猪源抗腹泻芽孢益生菌的分离与Z-27菌株的鉴定

为了获得对腹泻病原菌有拮抗作用的益生菌株,采集健康仔猪的粪便为试样,以0.5%的猪胆酸盐为筛选压力,以大肠杆菌(Eacterium coli)K88菌株作为病原指示菌,筛选对大肠杆菌具有拮抗作用的产芽孢菌株.通过初筛,共得到对大肠杆菌具有拮抗作用的菌株18株,进一步复筛出1株拮抗活性较高的菌株Z-27.根据形态和生理生化特征,初步鉴定Z-27菌株为Bacillus velezeusis,结合对Z-27菌株的16S rDNA序列分析结果,最终鉴定Z-27菌株为Bacillus velezeusis.     

磷酸盐还原为磷化氢功能菌株的筛选与鉴定

利用厌氧培养反应瓶和筛选培养基以A2/O厌氧池、污泥浓缩池的污泥、养殖场新鲜猪粪、鸡粪、牛粪及鸭粪为种泥,通过跟踪厌氧培养过程培养液中总磷的去除率和吸收液中磷化氢的生成量筛选出最佳种泥,并对最佳种泥进行厌氧条件下能将磷转化为磷化氢的菌株进行了筛选、分离和鉴定.结果表明,6种泥中鸡粪的厌氧除磷能力最强,鸭粪能力最弱,污泥浓缩池中的污泥和猪粪次之,牛粪及厌氧池污泥有一定的作用.本实验条件下鸡粪是厌氧除磷工艺的最佳种泥,将成为今后生物除磷工艺厌氧除磷菌种增殖、驯化的首选污泥.在1周期7 d内鸡粪的最佳培养时间为5 d.鸡粪培养液经21 d培养后分离到2株肠杆菌科、2株真杆菌属和1株丁酸弧菌属,均是厌氧条件下磷酸盐还原为磷化氢的菌株,真杆菌属和丁酸弧菌属为首次分离到.     

高产溶纤酶菌株的筛选鉴定及特性研究

从多个大豆细菌发酵食品中,分离纯化得到9株高溶纤酶活性的芽孢杆菌,并对筛选得到菌株的菌落形态和菌株形态、生理生化特性进行了鉴定,确认所筛选得到的9株高产菌株均属枯草芽孢杆菌属,其中3株菌的发酵液还可强烈抑制金黄色葡萄球菌的生长。另外,对BS1菌株的其他特性作了相应的研究。     

微生物发酵制备纤溶因子的研究进展

血栓性疾病是目前危害人类健康的第一大健康杀手,微生物发酵制备纤溶因子安全性高,是国内外筛选特异性强的溶栓剂常用方法之一。综述了纤溶茵（或纤溶酶）来源、纤溶酶制备和溶栓发酵液的其他生物活性,并对微生物发酵制备纤溶因子的未来发展方向进行了展望。     

从新旧蚯蚓匀浆液中制备蚯蚓纤溶酶组分的比较研究

为探寻从蚯蚓匀浆液中制备蚯蚓纤溶酶(EFE)的简便途径,利用亲和层析的方法,分别从新鲜制备的与多年存放的蚯蚓匀浆液中制备了新、旧蚯蚓纤溶酶(即新、旧EFE)。利用天然电泳、SDS-PAGE纤维蛋白活性电泳分析组分差异,通过纤维蛋白平板比较两者纤溶酶活性,发现蚯蚓匀浆液在存放过程中,EFE的部分组分发生降解,但EFE的比活却升高了1.4倍。     

四川省腹泻病猪的猪萨佩罗病毒检测及1B基因序列比较分析

为了解猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus, PSV)的流行及变异情况,采集2015-2016年四川地区12个县市34个猪场共计428份腹泻病料,采用QRT-PCR方法对PSV进行检测。结果显示:在428份病料中,共有114份为PSV阳性,阳性率为26.6%;所检测的34个猪场中,共有20个猪场显示PSV阳性,猪场阳性率为58.8%,表明PSV在四川地区普遍存在。此外,对来自不同县市共14份PSV阳性病料1B全基因进行PCR扩增,通过分子克隆,测序,再利用序列分析软件对四川部分地区猪萨佩罗病毒1B基因进行序列分析。结果表明,14条猪萨佩罗病毒1B基因核苷酸序列及推导出的氨基酸序列相似性分别为90.6%~100%和97.1%~100%。遗传进化分析显示,该研究获得的四川株与已知中国株分属于一个大的分支,说明我国猪萨佩罗病毒1B基因序列较为保守,没有发生大的基因变异。所有中国分离株与韩国株、德国株、英国株处在不同分支,又说明我国PSV的流行毒株可能存在独立进化。