影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的因素

本研究从丝裂霉素 - C处理时间、消化时间及细胞浓度等方面比较了诸因素对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的影响。结果表明 ,1 0 μg/m L 丝裂霉素 - C处理以 1 .5～ 2 h为宜 ,0 .2 %胰酶 + 0 .0 4% EDTA消化时间以 2～ 3min( 37℃ )为宜 ,接种浓度以 3～ 3.5×1 0 5m L- 1为宜。在成纤维细胞的分离过程中 ,接种后 30 min换液 ,能达到纯化成纤维细胞的效果。     

影响制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层的因素

为了建立活力稳定高效的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层,实验以13.5~14.5 d的ICR小鼠胚胎为实验材料,以MTT法测定细胞活力,探讨了用丝裂霉素C处理MEF后,含有不同浓度胎牛血清的培养基对MEF活力的影响,以及不同传代次数的MEF对其活力的影响。结果表明:用含10%的胎牛血清培养液培养丝裂霉素C处理后的MEF,其活力比含2%、5%、20%的FBS培养液稳定。对不同传代次数的MEF进行处理后,第1、3代的MEF活力比第5、7代的MEF活力稳定。结论:用丝裂霉素C处理第1到第3代的MEF,以10%的胎牛血清培养液培养能得到活力稳定高效的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层。     

不同浓度链球菌溶血素O对小鼠胎儿成纤维细胞生长状态的影响

本研究比较了0、10、25、50 U或100 U链球菌溶血素O(SLO)处理下的小鼠胎儿成纤维细胞(MEFs)的细胞密度、存活率、贴壁率,并绘制了适宜浓度SLO下MEFs的生长曲线。结果表明:25 U SLO处理组的细胞密度与10 U SLO处理组间差异不显著(P>0.05),但极显著高于50 U和100 U SLO处理组(P<0.01)。0、10 U和25 USLO处理组的细胞存活率差异不显著(P>0.05),但显著高于50 U处理组(P<0.05)。25 U SLO处理组的贴壁率极显著高于50 U和100 U SLO处理组(P<0.01)。25 U SLO处理组MEFs具有正常分裂增殖生长模式。因此,为了既能达到SLO对MEFs细胞膜的渗透化效果,又尽可能减少对细胞的损伤,宜选用25 U SLO进行MEFs的渗透化处理。     

丝裂霉素C和γ射线对小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的影响

用丝裂霉素C和γ射线对小鼠胎儿成纤维细胞进行处理，观察它们对小鼠胎儿成纤维细胞分裂与存活的影响。结果表明，小鼠胎儿成纤维细胞用不同浓度的丝裂霉素C或不同强度的)，射线处理一定时间(5μg／mL 4h、10μg／mL 1～4h、20μg／mL 1．0～2．5h或14Gy 1h、21Gy 1h、28Gy 1h)，能有效地抑制其分裂，且不影响其活力。     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎，用2种不同的消化液消化后，将所得的牦牛胎儿成纤维细胞（yakembryonicfibroblasts，YEF）培养于不同血清含量的RPM11640培养液中，并接种于2种不同材质的培养瓶表面，对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清（FBS）添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明，含150mL／LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长，可传代27次以上；经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2．5g／L胰蛋白酶消化，所得的YEF的细胞活率差异不显著（P〉0．05），其原代细胞在含100mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著（P〈0．01）；不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因对山羊胎儿成纤维细胞的影响

利用包含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的真核表达载体pCI-neo-hTERT转染山羊胎儿成纤维细胞,筛选阳性克隆扩大培养,并对转染阳性细胞分别进行RT-PCR检测,倍性分析,细胞周期检测和细胞凋亡检测,以观察该基因对山羊胎儿成纤维细胞的影响.试验结果表明,筛选出的阳性细胞现已传至第50代;RT-PCR检测,端粒酶基因成功整合到山羊胎儿成纤维细胞并持续表达;倍性分析结果显示,转基因第50代细胞呈正常二倍体;对细胞周期进行分析,结果显示转基因第50代细胞较未转染第30代细胞有较高的S期,说明该细胞DNA合成旺盛,具有很强的增殖能力;细胞凋亡检测结果发现,转基因第50代细胞中凋亡细胞的比例明显少于转染第30代山羊胎儿成纤维细胞.这些试验结果均表明,hTERT能增加山羊胎儿成纤维细胞体外培养的代数,并保持细胞良好的形态及较强的增殖能力.     

小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备的研究

研究主要探讨在制备小鼠胎儿成纤雏饲养层中，不同处理条件对小鼠胎儿成纤雏细胞分裂与存活的影响。结果表明：小鼠胎儿成纤雏细胞用适当处理浓度的丝裂霉素-C或适当强度的γ-射线处理一定的时间(10μg／mL 1-4h,20μg／mL 1—2．5h或21Gy和28Gy各处理1h)，能有效地抑制其分裂，且不影响其活力。     

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。     

4℃保存的小鼠胎体皮肤成纤维细胞继代培养及冻存

为了探讨利用死亡动物皮肤组织获取成纤维细胞的方法,研究将小鼠胎体或皮肤分别在4℃的mPBS液中保存24~120 h,然后通过原代培养、冷冻复苏和继代培养,观察了皮肤成纤维细胞的生长增殖能力。结果表明:与新鲜皮肤(对照组)原代培养成纤维细胞达到85%以上汇合需要8 d相比,4℃保存24~120 h后的皮肤(试验组)需要的时间延长(9~21 d),但仍能贴壁生长并达到85%以上汇合,且皮肤保存法优于胎体保存法;各试验组经3~4 d继二代培养即可达到85%汇合(对照组为3 d);冷冻复苏的各试验组原代培养细胞,经继二代培养即可在3~4 d内达到85%以上汇合。说明动物死亡后,若及时采集其皮肤并在4℃的mPBS液中保存一段时间,经原代培养和继代培养,或经原代培养、冷冻复苏和继代培养,可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。     

列当多糖对鸡新城疫病毒在鸡成纤维细胞中增殖的抑制作用

为研究列当多糖抗新城疫病毒(NDV)活性,用水提醇沉法提取列当总多糖及4种分级多糖,并通过苯酚硫酸法及红外光谱对列当多糖进行检测。通过MTT法测定各级多糖对鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度。以3种加药方式(先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加)加药,检测列当多糖对新城疫病毒的阻断作用、抑制作用及直接杀灭作用。结果表明,列当总多糖及4种分级多糖均具有抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用及阻断作用强于对NDV的直接杀灭作用。50%、80%梯度醇沉的列当多糖(OSP50、OSP80)及总多糖(OSPt),阻断作用下的病毒抑制率分别为19.50%、33.10%和22.30%,抑制作用下的病毒抑制率分别为19.00%、21.90%和22.60%,杀灭作用下对NDV的抑制率分别为,14.70%、17.50%和13.30%,其余各组多糖阻断作用、抑制作用及杀灭作用下的病毒抑制率均低于上述3组多糖。说明OSP50、OSP80及OSPt的抗NDV活性较好,可以作为进一步研究的材料。     

长春新碱对天祝白牦牛胚胎成纤维细胞的作用

目的：探讨长春新碱对天祝白牦牛胚胎成纤维细胞生长的抑制作用,并用碱性磷酸酶指标判断天祝白牦牛胚胎成纤维细胞在长春新碱作用下去分化的可能性。方法：选取白牦牛胚胎成纤维细胞生长良好的24孔培养板,分别滴加浓度依次为0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5μg/mL长春新碱,每天在倒置相差显微镜下观察不同浓度的长春新碱对细胞形态的作用,并进行碱性磷酸酶染色检测。结果：适量浓度的长春新碱可以使细胞的形态发生变化（细胞变圆）,而且在去除长春新碱后,细胞能正常生长。高浓度的长春新碱会使细胞死亡崩解。长春新碱并不能使白牦牛胚胎成纤维细胞中的碱性磷酸酶浓度增高。结论：长春新碱浓度为0.5μg/mL时,对白牦牛胚胎成纤维细胞的抑制作用最佳,但是它并不能使细胞中碱性磷酸酶的含量增高。     

复合植物多糖对兔生长性能、消化代谢及免疫机能的影响

为分析复合植物多糖对兔生长性能、消化代谢及免疫机能的影响,试验选择日龄、体重相近的新西兰仔兔100只随机分成4个组,每组25个重复,每个重复1只,1组饲喂基础日粮为空白对照组,试验2、3、4组在基础日粮中分别添加1.0%、1.5%、2.0%的复合植物多糖,试验期为30 d。结果显示:(1)试验3、4组的平均日增重较1组相比分别提高33.3%、27.7%(P<0.05),料重比较1组相比分别降低14.4%、10.6%(P<0.05),试验2、3、4组平均采食量均高于1组(P>0.05);(2)试验3、4组干物质、粗蛋白质、粗纤维的养分表观消化率较1组比分别提高6.2%、8.0%、24.6%、4.4%、8.1%、24.6%(P<0.05);试验2、3、4组的总能及钙、磷的养分表观消化率均高于1组(P>0.05);(3)试验3、4组血清中的Ig G、IgA、IL-2含量较1组比分别提高10.3%、10.9%、24.1%、9.6%、9.3%、27.5%(P<0.05),试验2、3、4组血清中的IgM、IL-6含量均高于1组(P>0.05)。结论表明,1.5%的复合植物多糖添加可以提高兔的生长性能、消化代谢及免疫机能。     

SC1(pluripotin)对昆明小鼠胚胎干细胞分离培养的影响

比较了在无血清培养体系中分别添加小分子化学物质pluripotin(SCl)和白血病抑制因子(LIF)对昆明小鼠ES细胞未分化状态的维持作用,并探讨了SC1在培养液中的最佳浓度.以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)为饲养层,以含LIF的添加血清替代品(KSR)的培养基(ESC-SR)为对照,分别用SC1浓度为0.3、1、3μmol/L的ESC-SR培养液对昆明小鼠胚胎进行分离培养.结果显示:胚胎在添加3 μmol/L SC1的ESC-SR培养液中ICM形成率显著高于对照组(P＜0.05),形成的ES集落与对照组形态差异不明显,最高传至第7代,并且在无饲养层条件下可以传至第6代而保持未分化状态.不同浓度SC1培养液中,胚胎在SC1浓度为0.3 μmol/L组的F2代形成率显著高于1 μmol/L组和3μmol/L组(P＜0.05),所分离的细胞AKP染色呈阳性,Oct4、Nanog和Sox2的免疫荧光染色均显阳性,具有ES细胞的特点.结果表明,ESC-SR培养液中SC1可以替代LIF用于小鼠ES细胞未分化状态的维持,并且可以在无饲养层条件下进行昆明小鼠ES细胞的培养.     

4种中药多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

本试验旨在研究黄芪多糖(APS)、芦荟多糖(AP)、银耳多糖(TFPS)、黑木耳多糖(AAP)4种中药多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.将4种多糖体外作用于小鼠脾淋巴细胞;采用MTT法测细胞增殖活性.结果显示,与对照组相比较,4种多糖在浓度为400 μg/mL时均能促进静止态淋巴细胞增殖;多糖协同ConA或LPS作用于淋巴细胞,4种多糖表现不同程度的增殖促进作用.在静止态淋巴细胞增殖以及协同丝裂原作用于淋巴细胞的增殖试验中,芦荟多糖所表现的促进增殖作用较强于其他3种多糖.     

三种不同多糖对枯草芽孢杆菌增殖情况的影响

从大尾寒羊粪便中分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),绘制生长曲线。在LB液体培养基中添加5、10、15、20、25、30、40mg/mL和50mg/mL的香蕉和山楂多糖溶液,以及0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0mg/mL和5.0mg/mL的菊糖溶液,经高温灭菌后,将提前制备好的枯草芽孢杆菌种子液以5%的接种量接种在LB培养基中,摇床(37℃、150r/min)培养3、4、5、6、7、8、9h和10h时测量其OD值。结果表明:添加量为50mg/mL的香蕉多糖、25mg/mL的山楂多糖和2.5mg/mL的菊糖对枯草芽孢杆菌的增殖效果较好,且50mg/mL的山楂多糖对枯草芽孢杆菌增殖性能的影响效果最好。     

ICR小鼠胚胎干细胞的分离与培养

为了研究不同条件对ICR小鼠ES细胞的影响,试验以12.5~13.5 d ICR小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)为饲养层,以3.5 d ICR小鼠胚胎为试验材料,探讨了血清、生长因子及传代方法对ICR小鼠ES细胞分离培养的影响。结果表明:采用含15%FBS的ES细胞培养液的囊胚贴壁率及ICM增殖率(79.3%,69.0%)均比含15%KSR、5%FBS+10%KSR的细胞培养液高(42.9%,28.6%;75.0%,54.2%),ES细胞最高传至6代;培养液中添加10 ng/mL LIF+10 ng/mL SCF的效果比单独添加1种因子的效果好,最高传至6代,高于单独添加1种因子的传代数(4代,2代);用3种传代方法进行传代时,采用差异贴壁法传代效果最佳,最高传至8代,酶消化法传至4代,机械加酶消化法传至6代。     

日粮中添加不同组合非淀粉多糖酶对肉鸡生产性能及营养物质代谢的影响

本试验研究小麦-豆粕型日粮中添加不同组合的非淀粉多糖酶对肉鸡生产及营养物质消化代谢的影响。选用1日龄AA肉鸡360羽,随机分为6组,分别饲喂小麦型高能饲粮、小麦型低能饲粮和添加不同酶制剂组合的小麦低能饲粮,每组4个重复,每重复15只鸡。结果表明:小麦型低能日粮中添加木聚糖酶对肉鸡生产性能及表观代谢能没有显著影响;添加木聚糖酶+葡聚糖酶、木聚糖酶+葡聚糖酶+甘露聚糖酶、木聚糖酶+葡聚糖酶+甘露聚糖酶+纤维素酶组合均可显著改善低能饲养肉鸡日增重和饲料利用率、提高其表观代谢能(P0.05),其中以添加木聚糖酶+葡聚糖酶+甘露聚糖酶组合和木聚糖酶+葡聚糖酶+甘露聚糖酶+纤维素酶组合两组对肉鸡生产的效果最好,但不同酶制剂组合间无显著差异(P0.05)。     

昆明白小鼠胚胎生殖细胞的分离与培养

以昆明白品系小鼠胎儿生殖嵴为材料，以不同的培养液分离培养胚胎生殖细胞（EG cells），发现小鼠胎儿肝细胞条件培养液的效果好于未添加白血病抑制因子（LIF）的基础培养液，而差于添加了1000IU／mL LIF的基础培养液。同时，试验对比了从不同胎龄胎儿分离培养原始生殖细胞（PGCs）的情况，鉴定了EG细胞的生物学特性；EG细胞经体外培养，可以分化为神经样细胞、上皮样细胞和简单类胚体。     

饲料中添加紫花苜蓿多糖对育肥猪生长性能和胴体品质的影响

为研究紫花苜蓿多糖对育肥猪生长性能及胴体品质的影响,选择体重相近的健康三元杂交育肥猪180头,随机分成3组,每个组3个重复,每个重复20头,1组饲喂基础日粮为对照组,2、3组分别在基础日粮中添加5.0%、10.0%紫花苜蓿多糖,预试验10 d,试验期60 d。在试验1 d和60 d测定生长性能指标,试验结束测定胴体品质。结果表明:(1)试验2、3组试验末重和平均日增重分别较对照组提高5.8%、6.2%、14.0%、14.9%(P <0.05),试验2、3组料重比分别较对照组降低4.6%、5.0%(P <0.05)。(2)试验2、3组屠宰率和瘦肉率分别较对照组提高4.2%、4.0%、5.8%、6.9%(P <0.05);试验2、3组胴体率均高于对照组(P> 0.05),试验2、3组背膘厚和眼肌面积分别较对照组降低7.8%、10.0%、8.9%、8.7%(P <0.05)。(3)试验2、3组肉质评价指标大理石评分、肉色、剪切力、p H24 h较对照组相比,均差异性不显著(P> 0.05)。综述所述,日粮中10.0%紫花苜蓿多糖可以提高育肥猪的生长性能和胴体品质。